第二节 血涂片制备与染色

1、职业教育医学检验技术专业教学资源库第二节 血涂片制备与染色（一）主要器材（一）主要器材1载玻片 2推片 （二）简要操作（二）简要操作1 薄血膜推片法（1）手工推片法：采血取血于载玻片上推片干燥。取 1 小滴血于载玻片的一端（1.5cm 处或整片 1/3 处）；推片时使推片与载玻片成 3045角度，让推片接触血滴，使血液沿推片下缘散开，再向血滴前方向匀速移动推片。 如果用力不均匀、载片不清洁可造成血涂片分布不均合格的血涂片：厚薄适宜，头、体、尾分明，两端和两侧留有空隙，血膜至少长 3050mm，两侧空隙 23mm。（2）仪器推片法：目前有多种型号的血细胞分析仪或血细胞形态分析仪配有血涂片仪和染色

2、仪，可以根据需要进行自动送片、取血、推片、标记和染色等操作。2厚血膜推片法 采血取 1 小滴血液于载玻片中央以推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成直径约 1.5cm 的圆形厚血膜，干燥滴加蒸馏水，溶解红细胞，脱去血红蛋白倾去水，干燥。（三）质量保证（三）质量保证1玻片 载玻片需清洁、干燥、中性、无油腻，勿用手触及玻片表面。2标本 抗凝血需在 4小时内制备血涂片，否则细胞形态会发生改变。3制片 制备厚薄适宜的血涂片： 厚：血滴大、角度大、速度快厚：血滴大、角度大、速度快 大、大、快大、大、快 薄：血滴小、角度小、速度慢 小、小、慢制备血膜分布均匀的血片：血膜分布不均主要是推片边缘不齐、用力不匀

3、和载玻片不清洁所致。4制片后处理血涂片染色是为了使血细胞着色，染料将细胞的胞膜、胞质、胞核等染成不同的颜色，便于在显微镜下观察识别。（一）方法（一）方法1瑞特染色法瑞特染色法（1）染色原理：细胞的着色既有物理的吸附作用，又）染色原理：细胞的着色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。有化学的亲和作用。（2 2）试剂）试剂瑞特染液瑞特染液 酸性染料伊红（酸性染料伊红（伊红化钠伊红化钠 ） 碱性染料美蓝（碱性染料美蓝（氯化美蓝氯化美蓝） 复合物溶于复合物溶于甲醇甲醇。磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBSPBS） （pH6.4pH6.46.86.8） （3 3）简要操作）简要操作（4 4）染色效果）染

4、色效果正常情况下，经瑞特染色后血膜外观呈淡紫红色。显微镜下：红细胞呈粉红色圆盘状；白细胞的细胞核染紫红色，核染色质结构清楚，胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色；血小板染成紫红色。2吉姆萨染色法吉姆萨染色法（1）原理：吉姆萨染色原理与瑞特染色相同，但提高了噻嗪类染料亚甲蓝的质量，加强了天青的作用。与瑞特染色法比较，该法对细胞核着色效果较好，但对中性颗粒着色较差。（2）试剂：由吉姆萨染料、甲醇和甘油组成。（3）简要操作：同瑞特染色法。3瑞瑞-吉复合染色法吉复合染色法可取长补短，使血细胞获得满意的染色效果。（二）质量保证（二）质量保证1瑞特染液质量在密封条件下，贮存时间愈久，亚甲蓝转化的天青

5、B 愈多，染色效果愈好。可用吸光度比值（RA）作为瑞特染液的质量评价指标RA=A650/A525， RA 降至 1.30.1即可使用。瑞特染液需适当加入甘油，密封严实，以防止甲醇挥发或氧化，影响染液质量。2pH 如环境 pHPI（PI 为该蛋白质的等电点），易与酸性伊红结合，染色偏红；当环境的 pHPI 则带负电荷增多，易与亚甲蓝结合，染色偏蓝。3染色时机 血涂片干透后才能染色，否则易脱落。4染液用量 以刚好覆盖血膜为宜。用量过多，会造成深染；过少，会导致血涂片局部未着色，或易干使染料沉积。5混匀 染液与缓冲液需充分混匀，否则细胞着色不均。6染色时间 环境温度越低、细胞越多，染色时间越长；反之亦然。7冲洗 用小流水将染液冲洗干净，不能先倒掉染液再用流水冲洗，以免染料