开心胶囊对冠心病大鼠血脂及脂蛋白亚组分的影响

1、    开心胶囊对冠心病大鼠血脂及脂蛋白亚组分的影响         摘要：为开发一种具有调脂作用、有效防治冠心病的中药制剂，采用高胆固醇饲喂和大剂量垂体后叶素双重因素造成实验性冠心病大鼠模型，用沉淀酶联法和改良的双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术，对大鼠的血脂、脂蛋白及其亚组分胆固醇、血清脂蛋白谱(SLPG)进行了检测分析，并观察了由广州中医药大学第一附属医院研制的治疗冠心病、心绞痛及无症状心肌缺血的中药系列复方开心胶囊、号对其的影响。结果：开心胶囊号(生脉散加减)具有降低总胆

2、固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)作用(P0.05)；开心胶囊号(越鞠丸合失笑散加减)具有降低TC、LDL-c和甘油三酯(TG)的作用(P0.05，P0.01)，并具有升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)作用。表明开心胶囊能够调整血脂水平，调整血清脂蛋白各亚组分平衡，降低动脉硬化指数(KAI)，因而具有抗动脉硬化的作用。主题词：开心胶囊/药理学；生脉散/治疗应用；越鞠丸/治疗应用；失笑散/治疗应用；冠状动脉硬化/中药疗法；胆固醇/血液；脂蛋白类/血液；大鼠中分类号：R541.4文献标识码：AEffect of Kaixin Capsule on Blood Lipid and Li

3、poprotein Subfractionsin Experimental Rats with Coronary Heart DiseaseTANG Tiejun(Doctorate Postgraduate Student,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China);CHEN JingheDENG Tietao(Dept. of Internal Medicine,First Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China);ZHAN

4、G Min(Zhujiang Hospital of the First Military Medical University,Guangzhou 510282,China)Abstract:High cholesterol diets and a large dose of pituitrin were used to set up the experimental rat model with coronary heart disease.The blood lipid,lipoprotein subfractions and serum lipoprotein graph were d

5、etected by enzyme_linked method and modified digradient poly_acrylamide gel electrophoresis.Effects of Kaixin Capsule on the above indexes were observed.The results showed that Kaixin Capsule could decrease the content of total cholesterol(TC)and low density lipoprotein cholesterol(LDL_c)(P0.05).Kai

6、xin Capsule decreased the content of TC,LDL_c and triglyceride(TG)(P0.01,P0.05),and increased the high density lipoprotein cholesterol(P0.05).This indicates that Kaixin Capsule can regulate the blood lipid level and the balance among the subfractions of lipoprotein and can inhibit arteriosclerosis b

7、y lowering the atherogenic index.Key words:KAIXIN CAPSULE/pharmacology;SHENEMAI POWPERS/therapy use;YUEJU PILL/therapy use;SHIXIAO POWDERS/therapy use;CORONARY ARTERIOSCLEROSIS/TCD ther.;CHOLESTEROL/blood;LIPOPROTEINS/blood;RATS开心胶囊是广州中医药大学第一附属医院研制的中药系列复方，临床上用于治疗冠心病(CHD)、心绞痛及无症状心肌缺血(SMI)，取得良好疗效。以往的研

8、究表明，开心胶囊具有较好的抗心肌缺血作用1。为进一步了解该方是否对血脂及脂蛋白有调整作用，本实验对复合造模的冠心病模型大鼠的血脂、脂蛋白及其亚组分胆固醇进行了检测，并采用改良的双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法对血清脂蛋白谱(SLPG)进行了检测分析，旨在了解开心胶囊对血脂及脂蛋白亚组分水平的影响。1材料与方法1.1药物组成及提取开心胶囊号：西洋参、北芪、麦冬、五味子、桂枝、丹参、益母草、香附、山楂；开心胶囊号：西洋参、香附、苍术、川芎、山栀子、五灵脂、蒲黄、神曲、山楂。均采用经以往实验证实为最佳药效的水醇分提法提取1。1.2动物分组及造模Wistar大白鼠50只，本校实验动物中心提供，89周龄，体重

9、180220g，雌雄不拘，随机分成以下5组，每组10只。A.普饲组：饲喂基础饲料；B.高脂组：饲喂高脂饲料；C.阿斯匹林组：饲喂高脂饲料加阿斯匹林90mg/(kg.d)灌胃；D.开心胶囊号组：饲喂高脂饲料加开心胶囊号10g/(kg.d)灌胃；E.开心胶囊号组：饲喂高脂饲料加开心胶囊号10g/(kg.d)灌胃。各组皆自由饮水，在C、D、E组灌药的同时，给A、B组以等量的自来水灌胃。高脂饲料配方2：2%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶，余为基础饲料，喂服11d。开心胶囊和阿斯匹林用量根据人与大鼠间药物剂量换算方法按125换算3而确定。1.3实验方法按以上分组造模方法饲喂3d，第4天给予垂体

10、后叶素(Pit)10U/kg皮下注射，每周1次。继续以上述方案饲喂7d，于第12天早晨，摘眼球，眶动静脉丛取血3mL用于血脂及脂蛋白亚组分测定。1.3.1甘油三酯检测采用乙酰丙酮显色法4。1.3.2脂蛋白及其亚组分胆固醇含量检测采用沉淀漂浮酶联法5。1.3.3脂蛋白谱测定双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法6。操作步骤：配制10×电泳缓冲储存液：Tris 6.0g+甘氨酸28.8g加水1000mL(pH8.4)；制备3种不同浓度的丙烯酰胺凝胶，按高浓度向低浓度的顺序，先后注入同一电泳扫描硬质玻璃管中(内径为3.55mm)；取100L血清与10L饱和苏丹黑液在离心管中混匀，经37水浴50min预

11、染；取预染标本45L上样于上层胶表面；电泳：以BIO-RAD电源作恒流电源，先每管0.5mA，2h，其后加大到每管2mA，2h；电泳后取下玻璃管，置扫描架中，放入扫描仪内(日本岛津CS-9000型)以60nm波长依次进行吸光度扫描，扫描仪将谱自动量化，计算出各区带的比值(%)，自动打印出谱及数据。2结果经高脂饲喂造模的各组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-c)均升高(P0.05或P0.01)，经开心胶囊治疗后多数参数仍高于正常组，但与高脂组比较，开心胶囊号有降低TC和VLDL-c作用(P0.01)，对甘油三酯(TG)无降低作用(P0.05)。开

12、心胶囊号对TC、TG、LDL-c均有降低作用(P0.05)，对VLDL-c无作用(P0.05)，对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)有升高作用(P0.05)。两药对HDL-c的亚组分HDL2-c、HDL3-c的影响均无显著意义。见表1。表1开心胶囊对实验性CHD大鼠血脂及脂蛋白亚组分水平的影响(<"z0401 (850 bytes)" src="/med/cano/201003/20100323182614975" 14 17>±s)组别TC/(mg.L-1)TG/(mg.L-1)LDL-c/(mg.L-1)VLDL-c/(mg.L-

13、1)HDL-c/(mg.L-1)HDL2-c/(mg.L-1)LDL3-c/(mg.L-1)普饲组606.8±151.11305.2±823.4311.4±114.337.2±8.0276.8±123.4168.6±78.3108.4±57.9高脂组2242.8±1242.5*936.1±547.0*1927.3±1295.6*140.0±51.2*245.5±86.5151.0±55.394.4±43.8阿斯匹林2173.6±734.41619

14、.5±1116.31944.4±778.9*123.7±111.3*191.3±63.5*103.1±48.987.9±29.2开心号1506.8±657.1*985.9±680.5*1292.7±688.7*30.5±10.5201.9±57.5118.2±55.783.7±34.2开心号2001.3±564.1*560.8±232.4*1161.6±586.2*176.5±47.5*293.1±91.2173.6

15、±51.387.0±76.3     *与普饲组比较P0.05，*P0.01；与高脂组比较P0.05，P0.01 采用致动脉硬化指数(KAI)来综合评价各组与动脉硬化(AS)的相关性，结果见表2。高脂造模后3项KAI均升高(P0.01)。经开心胶囊治疗后各项指数均有降低(P0.05)，开心胶囊号组各项KAI略低于开心胶囊号组，但无统计学意义，阿斯匹林组对KAI无影响。表2开心胶囊对实验性CHD大鼠KAI的影响(<"z0401 (850 bytes)" src="/med/cano/201003/20

16、100323182614975" 14 17>±s)组别KTC/HDL-cKTC-H/HDL-cKLDL-c/HDL-cKHDL2-c/HDL3-c普饲组2.59±1.071.59±1.071.48±0.961.45±0.62高脂组11.93±10.53*10.93±10.53*10.62±10.57*1.66±0.98阿斯匹林13.41±7.11*12.41±7.11*18.35±17.95*2.55±3.39开心号8.88±6.91*7

17、.88±6.91*7.82±6.94*1.70±1.04开心号7.61±3.82*6.61±3.82*6.29±3.65*2.20±0.87     *与普饲组比较P0.05，*P0.01；与高脂组比较P0.05，P0.01 血清脂蛋白谱(SLPG)检测结果见表3。经高脂饲喂后，各组大多数族脂蛋白较普饲组降低，族脂蛋白中的前脂蛋白1(pre-Lp1)、乳縻微粒(CM)升高。表3开心胶囊对实验性CHD大鼠SLPG的影响p/(<"z0401 (850 bytes)"

18、; src="/med/cano/201003/20100323182614975" 14 17>±s)%组别AL-Lp1-Lp2-Lp3-Lp4-Lp5普饲组5.62±2.091.28±1.215.65±3.7316.31±6.9811.55±5.145.31±3.21高脂组4.35±1.410.88±0.44*4.72±2.407.21±4.96*6.79±3.66*3.55±2.79*阿斯匹林3.48±0.77*0.77&#

19、177;0.31*4.12±1.809.28±5.09*4.14±2.59*1.17±1.04*开心号5.05±0.850.54±0.26*1.93±1.78*7.26±5.36*7.63±4.66*3.74±2.64*开心号3.77±0.68*0.99±0.853.30±2.40*10.32±7.29*6.24±4.27*4.42±5.94组别-Lpint-Lppre-Lp1pre-Lp2CM普饲组8.44±3.364.21

20、±1.9324.57±5.997.26±2.525.31±4.04高脂组12.11±4.43*9.53±5.86*42.06±9.09*4.75±3.53*19.44±7.77*阿斯匹林10.54±4.35*13.73±11.61*40.85±11.49*5.96±2.6814.41±3.69*开心号16.92±6.9011.92±5.49*34.71±6.66*7.74±11.768.46±0.78*开心

21、号14.06±11.2615.48±12.11*35.91±19.75*3.33±1.31*9.79±2.43*     *与普饲组比较P0.05，*P0.01；与高脂组比较P0.05，P0.01 经中药治疗后，开心胶囊号可降低脂蛋白2(-Lp2)(P0.05)、pre-Lp1(P0.05)及CM(P0.01)，升高脂蛋白(-Lp)(P0.05)。开心胶囊号可升高脂蛋白3(-Lp3)(P0.05)、间脂蛋白(int-Lp)(P0.05)，降低pre-Lp1、CM(均P0.01)。阿斯匹林仅显示出对CM有降

22、低作用(P0.05)，对清蛋白脂质复合物(AL)各组均无显著性影响。3讨论流行病学调查研究认为CHD与诸多危险因子有关，但血脂异常是最重要的危险因子7，对血脂紊乱的调整直接影响到冠心病患者的预后8。因此，评价一个治疗CHD的药物，了解其对血脂的影响是极其重要的。近年来的研究表明在考虑心血管危险时，要重视KLDL-c/HDL-c、KTC/HDL-c等，以此作为KAI来衡量AS的危险度9。本研究结果显示开心胶囊号降低TC的作用强于开心胶囊号，但开心胶囊号因对TC、TG、LDL-c有降低作用，对HDL-c有增高作用，故其各项KAI均低于开心胶囊号。血清脂蛋白分析最基本的两项技术是超速离心和区带电泳法

23、。两者把脂蛋白分成HDL、LDL、VLDL、CM或-Lp、-Lp、pre-Lp、CM4个部分。近年来，脂蛋白各组分内颗粒的不均一性进一步受到重视，各亚组分之间仍然存在着密度、大小、脂质种类与构型的差异。应用超高速离心和高分辨率电泳技术，可以实现亚组分的进一步分离。本实验应用的改良的双梯度PAGE方法，将分离胶的连续梯度浓度改为3种不同浓度，在同一次电泳过程中，分别处理-Lp族和-Lp族，将常规的4种脂蛋白一次分离成11条区带完整的血清脂蛋白谱，既表达了-Lp族和-Lp族，pre-Lp及CM的数量关系，又表达了它们各自内部亚组分之间的数量关系。因此能更加全面地了解脂蛋白变化的概貌。临床上高血脂与

24、CHD往往并存，两者互为因果，为了更为接近地模拟临床实际，本文在动物模型上尝试采用复合因素造模方法。首先按文献2报道的方法造成高血脂及AS早期的改变，在此基础上给与大剂量Pit，诱发冠状动脉痉挛，导致心肌缺血(MI)，称之为实验性冠心病模型。自1908年Anitschkow创立了高胆固醇饲养AS模型近1个世纪以来，此模型一直在AS研究中被广泛地应用。近年来在此模型基础上常加上另外一个造模方案，形成双重造模因素的复合动物模型10。Pit诱发MI模型亦有60余年的历史，近年来的研究证明Pit导致MI的效果是确定的11。参照以上两个经典的动物模型，本实验将CHD的主要病因AS与基本病理改变MI同时复

25、制在同一动物机体。与对照组比较，开心胶囊对血脂的降低作用是明显的，但尚未能使之达到正常水平，可能与用药时间短，高脂饲所致的血脂升高幅度较大有关。目前已发现有60多种草药具有不同程度的降血脂作用12，基础研究表明其作用机理也不尽相同。开心胶囊中山楂、蒲黄等均有明显降脂作用，诸药配伍也显示出较好的降脂效果，其特点为调整血脂及脂蛋白各亚组分的动态平衡，降低KAI。西药降脂药物近年来有很大进展，但普遍存在着毒副反应、以及价格昂贵等问题。在国外对早期轻度的血脂增高，非药物疗法特别是饮食疗法倍受重视13，14。开心胶囊为纯中药制剂，号是以益气养阴名方生脉散加减而成，具有补益心气、益气养阴的作用，以补虚扶正

26、为主；号是以越鞠丸合失笑散加减而成，具有行气活血、祛湿化痰的作用，以泻实去邪为主，高脂饲喂所造模型可能偏于邪实，故开心胶囊号的效果较好。临床上CHD患者常见虚实错杂，不可能完全等同于模型动物，辨别虚实随证选用号、号可能均会收到较好的效果，有关临床的降脂效果有待于进一步研究。作者简介：第一作者，男，讲师，主治医师，医学博士，现为中山医科大学中西医结合研究所博士后；基金项目：国家中医药管理局资助项目，编号：95A2111作者单位：唐铁军(广州中医药大学95级博士生，广州510405)；陈镜合邓铁涛(广州中医药大学第一附属医院内科，广州510405)；张?(第一军医大学珠江医院，广州510282)参

27、考文献：1唐铁军，陈镜合，刘中秋，等.开心胶囊不同提取工艺的药效学比较J.中药新药与临床药理，1999，10(1)：452徐叔云.药理学实验方法M.北京：人民卫生出版社，1982.7823施新猷.医用实验动物学M.西安：陕西科技出版社，1989.4184梅美珍.动脉粥样硬化实验技术M.衡阳医学院编，1989.65肖中宜.血清高密度脂蛋白胆固醇及其亚组分胆固醇的常规测定方法探讨J.中华医学检验杂志，1987，(10)：276张?，李小敏，尹柄生.改良双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳及其应用的初步探讨J.解放军医学杂志，1994，19(1)：257Cullen P,Funke H,Schulte H,et al.Lipoproteins and cardiovascular risk from genetics to CHD preventionJ. J Atheoscler Thromb,1997,4(2):518Borgi