实验四离体蛙心灌流

1、实验四：离体蛙心灌流实验四：离体蛙心灌流n【目的要求】n1、学习斯氏离体蛙心灌流法。n2、观察Na，K，Ca2及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。n【基本原理】n心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na，K，Ca2等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而

2、改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。因此可用人工灌流的方法，研究心胜活动的规律及特点；还可观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。n【动物、器材与试剂】（以下是每组所需的种类和数量）n蛙或蟾蜍1只、纱布1块、毁髓针1支、眼科镊1把、手术剪1把、眼科剪1把、蛙板1块、蛙钉4只、玻璃分针1支、滴管7支、尖嘴滴管2支、细棉线2段30cm、解剖盘1只、任氏液至少150mL、蛙心夹1只、张力换能器（50g）1个、二道生理纪录仪1台、铁支架1个、双凹夹1个、万能滑轮1个、小烧杯1个、斯氏蛙心套管1个、套管夹1个、0.65% NaCl 5mL、2% CaCl2 1mL、1% KCl 1mL、

3、1/10000肾上腺素2滴、1/10000乙酰胆碱2滴、300U/ml肝素2滴。n【方法与步骤】n1、离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法）n取一只蛙或蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用；另一根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。左手提起左主动脉上方的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内23cm高度)任氏液(内加一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥，当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将插管稍向后退(因主动脉内有螺旋

4、瓣会阻碍插管前进)，并将插管尾端稍向右主动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉球的背部后下方及心尖方向推进，在心室收缩时经主动脉瓣进入心室（图10）。注意插管不可插得过深，插管的斜面应朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此时可见血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)，用滴管吸去套管中的血液，换新鲜任氏液；稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得翻液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，着清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿

5、损伤静脉窦)，用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.52cm)，即可进行实验。n2、插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不要夹过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑枪与张力传感器相连。注：勿便灌流液滴到传感器上。调节记录仪上的收缩曲线的幅度适中。n3、实验观察（图11）n(1)记录正常心搏曲线。n(2)改用0.65% NaCl溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常，注意：换液时切勿碰套管，以免影响描

6、记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。n(3)向套管内加12滴2% CaCl2溶液（较细的套管需少加）溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。n(4)同法向套管内加入12滴1% KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常公n(5)同法记录套管中加入12滴肾上腺素溶液(1/10000)后心搏曲线的变化。n(7)同法记录套管中加入12滴乙酰胆碱溶液(1/10000)后心搏曲线的变化。n【注意事项】n1、制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。

7、n2、蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。n3、每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并记录其效应。加药时应在心跳曲线上予以标记，以便观察分析。n4、各种滴管应分开，不可混用。n5、在实验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器的各种参数一经调好，应不再变动。n6、给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液，否则会造成不可挽回的后果，尤其是K稍有过量，即可导致难以恢复的心脏停跳。n7、标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加12滴2%CaCl2或1：10000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。n8、谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。n【思考题】n1、心脏灌流说明心肌的哪些生理特性？n2、用实验说明