丙二醛(MDA)含量的测定

1、植物生理学实验课件植物生理学实验课件 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。原理原理+1

2、00 COHNSNHOOOHHHNHSNHOOHOOHNNHS2O硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）1. 分光光度计；分光光度计； 2. 研钵；研钵；3. 剪刀；剪刀； 4. 恒温水浴；恒温水浴；5. 试管：试管：20 mL4 6. 离心机。离心机。1. 5 %三氯醋酸；三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸三氯醋酸溶解定容）；溶解定容）；3. 0.05 mol L1磷酸缓冲液，磷酸缓冲液， pH 7.8。 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。或其他植物的叶片。1取小麦植株上

3、不同叶位的叶片取小麦植株上不同叶位的叶片35片，洗净擦干，剪成片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。长的小段，混匀。2称取叶片切段称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂和英砂和2 mL 0.05 mol L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol L-1磷酸磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。3在提取液中加入在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。硫代巴比妥酸溶液，摇匀。4将试管放入沸水浴中煮沸将

4、试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中，（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。入冷水浴中。5待试管内溶液冷却后，待试管内溶液冷却后，3000g离心离心15 min，取上清，取上清液并量其体积。以液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、600 nm和和450 nm处的消光值。处的消光值。 式中，式中，Vt：提取液总体积（：提取液总体积（mL）；）； Vs：测定用提取液体积（：测定用提取液体积（ml）；）； FW：样品鲜重（：样品鲜重（g）。）。-1

5、t532600450VMDA mmol g FW = 6.452DD0.559 DV Ws 1可溶性糖与可溶性糖与TBA显色反应的产物在显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。必要时要排除可溶性糖的干扰。 2低浓度的铁离子能增强低浓度的铁离子能增强MDA与与TBA的显色反的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为（最终浓度为0.5 nmol L-1） 3如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间