鱼类急性毒性试验指导

1、鱼类急性毒性试验实验目的 鱼类急性毒性试验是研究水环境污染及保鱼类急性毒性试验是研究水环境污染及保护水环境质量的重要方法。护水环境质量的重要方法。 鱼类急性毒性试验鱼类急性毒性试验可用于评价被测水体对可用于评价被测水体对水生生物产生的影响，从短期暴露效应来表水生生物产生的影响，从短期暴露效应来表明受测物的毒害性；可对化学物质的毒性和明受测物的毒害性；可对化学物质的毒性和安全性进行评价，水体污染程度测定，废水安全性进行评价，水体污染程度测定，废水处理效果的检测，为制定水质标准、评价水处理效果的检测，为制定水质标准、评价水环境质量和管理废水的排放提供科学的依据。环境质量和管理废水的排放提供科学的依

2、据。一、需要查阅的资料一、需要查阅的资料被测化学物质：被测化学物质： 水的溶解度水的溶解度 在水中的稳定性在水中的稳定性 蒸汽压蒸汽压 pKa值值 结构式结构式 正辛醇正辛醇-水的分配系数水的分配系数 纯度纯度 快速生物降解实验结果快速生物降解实验结果 水溶液中的定量分析方法水溶液中的定量分析方法二、仪器设备二、仪器设备溶解氧仪溶解氧仪温度计温度计pH计或精密计或精密pH试纸（试纸（6-8)分析天平分析天平鱼缸鱼缸潜水泵、抽水泵潜水泵、抽水泵空气泵空气泵渔网（对照组和试验组分用）渔网（对照组和试验组分用）三、鱼种三、鱼种推荐的鱼：推荐的鱼：斑马鱼、稀有狗鲫、剑尾鱼斑马鱼、稀有狗鲫、剑尾鱼推荐的

3、本地代表性的鱼：推荐的本地代表性的鱼：白鲢鱼、草鱼、鲤鱼、白鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鲫鱼等鲫鱼等实验的鱼：实验的鱼：金鱼金鱼鱼种的选择：鱼种的选择：全年可得、易于饲养、试验方便、全年可得、易于饲养、试验方便、经济、生物或生态因素、来源可靠稳定。经济、生物或生态因素、来源可靠稳定。受试鱼的挑选：受试鱼的挑选：要选择无病、行动活泼、鱼鳍完要选择无病、行动活泼、鱼鳍完整舒展、食欲和逆水性强、体长（不包括尾部）整舒展、食欲和逆水性强、体长（不包括尾部）约约21cm的同种、同颜色、同龄的鱼。的同种、同颜色、同龄的鱼。、四、试验步骤四、试验步骤试验溶液浓度设计试验溶液浓度设计 确定正式试验溶液的浓度范围确定正式

4、试验溶液的浓度范围正式试验正式试验 记录不同时间的鱼死亡数记录不同时间的鱼死亡数毒性判定毒性判定计算致死浓度（计算致死浓度（LC50）预试验（探索性试验）预试验（探索性试验） 通常选七个浓度通常选七个浓度(至少五个至少五个)五、试验程序五、试验程序1.供试鱼的驯养供试鱼的驯养 选出的鱼必须先在与试验条件相似的生活条件（温度、水质选出的鱼必须先在与试验条件相似的生活条件（温度、水质等）下驯养等）下驯养7 d以上；试验前一天停止喂食；如果在试验前以上；试验前一天停止喂食；如果在试验前7 d天内发生死亡现象（主要指发病的鱼）低于天内发生死亡现象（主要指发病的鱼）低于5%的该批次鱼的该批次鱼可用于试验

5、；死亡率为可用于试验；死亡率为5-10%（不包括饲养期间受外力作用（不包括饲养期间受外力作用机械性损伤而死亡的鱼），则继续驯养机械性损伤而死亡的鱼），则继续驯养7天死亡率超过天死亡率超过10%该批次鱼不能使用该批次鱼不能使用 每天光照每天光照12-16h 溶解氧高于饱和溶解氧的溶解氧高于饱和溶解氧的80% 喂养喂养每天投食或隔天投食每天投食或隔天投食 试验用水的试验用水的pH值通常控制在值通常控制在6.78.5之间之间 ：高质量的天然水：高质量的天然水未受污染的河水或湖水；未受污染的河水或湖水；自来水需曝气除氯两天或曝晒一周自来水需曝气除氯两天或曝晒一周 2.稀释水稀释水 试验溶液：将受试物储

6、备液稀释成一定浓度的溶液。试验溶液：将受试物储备液稀释成一定浓度的溶液。 当加入受测物后当加入受测物后pH发生变化，则应调节发生变化，则应调节pH值至原水值至原水pH值，最好使用值，最好使用HCl和和NaOH来调节。来调节。3、暴露条件、暴露条件 96h 承载量：静态和半静态试验系统最大承载量不超过承载量：静态和半静态试验系统最大承载量不超过1g鱼鱼/L。流水式系统承载量可稍多。流水式系统承载量可稍多。 溶解氧不低于饱和溶解氧量的溶解氧不低于饱和溶解氧量的60%。曝气不能使受试。曝气不能使受试物明显损伤。物明显损伤。 温度始终控制在温度始终控制在1范围，以水银温度计为准。范围，以水银温度计为准

7、。4、预试验和正式试验、预试验和正式试验 试验前停止喂食试验前停止喂食24h。 预试验用以确定正式实验所需浓度范围，选择较大的浓度预试验用以确定正式实验所需浓度范围，选择较大的浓度梯度范围如梯度范围如1000、100、10、1、0.1、0.01mg/L。每个浓。每个浓度组放入五条鱼，试验持续度组放入五条鱼，试验持续96小时。每日至少两次记录容小时。每日至少两次记录容器内死鱼数。并及时取出死鱼。器内死鱼数。并及时取出死鱼。 根据预试验得出的结果，在根据预试验得出的结果，在全部死亡的最低浓度和全部死亡的最低浓度和96h鱼鱼类全部存活的最高浓度之间至少设置类全部存活的最高浓度之间至少设置5个浓度组，

8、并以几个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应何级数排布。浓度间隔系数应2.2 每个浓度组应至少设置每个浓度组应至少设置2-3个平行样，每一个系列设一个个平行样，每一个系列设一个空白对照。空白对照。 每个浓度组至少使用七尾鱼，建议用十尾鱼每个浓度组至少使用七尾鱼，建议用十尾鱼5、试验记录、试验记录u试验溶液调节到相应温度后，从驯养的鱼群中随机取出试验溶液调节到相应温度后，从驯养的鱼群中随机取出鱼，并随机放入试验容器。应在鱼，并随机放入试验容器。应在30分钟内转移完毕。分钟内转移完毕。u在在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。在试验开后检查受试鱼的状况。在试验开始后始后3h观测并

9、记录试验鱼的异常行为：观测并记录试验鱼的异常行为：侧翻、失去平衡，侧翻、失去平衡，游泳能力、呼吸功能衰竭、反应迟钝、色素沉积游泳能力、呼吸功能衰竭、反应迟钝、色素沉积等现象。等现象。u每天测定并记录每天测定并记录pH值、溶解氧、温度值、溶解氧、温度一次。一次。u死亡判定死亡判定：如没有任何肉眼可见的运动，如腮的煽动、：如没有任何肉眼可见的运动，如腮的煽动、触尾柄后无反应等，即可判断予以死亡。触尾柄后无反应等，即可判断予以死亡。6、质量控制、质量控制u试验结束时，试验结束时，对照组的死亡率不得超过对照组的死亡率不得超过10%。u试验期间的溶解氧含量试验期间的溶解氧含量不得少于饱和溶解氧含量不得少

10、于饱和溶解氧含量的的60%。u受试物受试物实测浓度不能低于设置浓度的实测浓度不能低于设置浓度的80%。u尽量维持衡定条件，最好使用尽量维持衡定条件，最好使用半静态或流水式半静态或流水式试试验。验。7、数据处理和报告、数据处理和报告l 数据处理：数据处理：以暴露浓度的对数值为横坐标，死亡率为纵以暴露浓度的对数值为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机上绘制浓度对死亡率的影响的趋势线。并坐标，在计算机上绘制浓度对死亡率的影响的趋势线。并计算出计算出24h、48h、72h、96h的的LC50值，并计算值，并计算95%的置信的置信限。如果试验数据不适合计算限。如果试验数据不适合计算LC50，则可用不引起死亡

11、的，则可用不引起死亡的最高浓度和引起最高浓度和引起100%死亡的最低浓度估算死亡的最低浓度估算LC50及两个浓及两个浓度的几何平均值。度的几何平均值。l 结果评价结果评价：根据鱼类急性毒性分级标准根据鱼类急性毒性分级标准96h LC50mg/L96h LC50mg/L1 11-101-1010-10010-100100100毒性分级毒性分级极高毒极高毒高毒高毒中毒中毒低毒低毒安全浓度安全浓度=48LC500.18、试验报告、试验报告1、受试物质、受试物质2、试验用鱼、试验用鱼3、试验条件、试验条件4、试验步骤、试验步骤5、预试验结果、预试验结果6、正式试验方案设计、正式试验方案设计7、24h、

12、48h、72h、96h时的每个浓度的累计时的每个浓度的累计死亡率、死亡率、LC50、安全、安全浓度浓度8、浓度死亡率曲线图、浓度死亡率曲线图9、确定、确定LC50的统计学方的统计学方法法10、对照组死亡率、对照组死亡率11、试验期间可能会影、试验期间可能会影响试验结果的隐患响试验结果的隐患12、鱼的异常反应、鱼的异常反应13、结果讨论、结果讨论14、结论、结论六、具体实验安排六、具体实验安排1、全班测试乐果对金鱼的毒性。分别作预试验和正式试验。每组设一个、全班测试乐果对金鱼的毒性。分别作预试验和正式试验。每组设一个组组长长，负责安排每天做试验的学生，并负责管理本小组的试验进程，监督，负责安排每

13、天做试验的学生，并负责管理本小组的试验进程，监督试验情况。试验情况。2、预实验整个班分为两个小组，约、预实验整个班分为两个小组，约20人为一组，每组作一组实验，人为一组，每组作一组实验，5个浓度个浓度梯度（梯度（ 1000、100、10、1、0.1、0.01mg/L ），每个处理），每个处理10条鱼（条鱼（2组组5个处理个处理10条条=100条）。条）。2、正式试验整个班分为六个小组，约、正式试验整个班分为六个小组，约78人为一组，每组做一组实验，人为一组，每组做一组实验，7个个浓度梯度（浓度梯度（浓度根据预实验结果确定浓度根据预实验结果确定），每个处理），每个处理10条鱼（条鱼（6组组7个处

14、个处理理10条条=420条）。条）。3、每个组应认真观察每天的试验，并详细记录在记录本上。、每个组应认真观察每天的试验，并详细记录在记录本上。4、每组成员每天轮流、每组成员每天轮流喂食、观察、检测喂食、观察、检测pH、水温、溶解氧量、水温、溶解氧量等参数。等参数。5、认真遵守养鱼试验要足以的一些操作规程。、认真遵守养鱼试验要足以的一些操作规程。6、本试验视鱼苗驯养情况大约需两到三周。本试验视鱼苗驯养情况大约需两到三周。7、正式试验、正式试验第一天前第一天前8小时小时需要连续观察，并作记录。以后每天固定时间需要连续观察，并作记录。以后每天固定时间（约上午约上午10点左右点左右）观察一次。）观察一次。八、具体操作注意事项八、具体操作注意事项如果用抄网捕鱼动作应尽量要轻，避免将鱼弄伤。如果用抄网捕鱼动作应尽量要轻，避免将鱼弄伤。加热琫或温度控制器，只能在水中使用，严禁干加热琫或温度控制器