大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜组织凋亡相关因子Bax,Bcl

1、大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜组织凋亡相关因子Bax,Bcl2的表达变化         11-03-28 10:16:00     编辑：studa20                 作者：张静 陈丽薇 吕洋 吴靖芳【摘要】  目的：探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间促凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl2在胃黏膜

2、组织中表达的变化。方法：胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型，免疫组织化学法检测正常组、溃疡组、盐水组大鼠胃黏膜组织Bax和Bcl2表达变化,并应用图像分析系统软件进行积分光密度值(IOD)分析。结果：Bax阳性细胞在胃溃疡组1d即增多，表达强度强，显著高于正常组与相应盐水组(P<0.01);之后随术后时间延长,阳性细胞逐渐减少,表达强度渐弱,至术后23d，溃疡组Bax IOD与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl2阳性细胞随术后时间延长表达逐渐增多,至胃溃疡损伤后的第6天Bcl2阳性细胞数量最多，表达强度最强，胃溃疡损伤后10d及14d Bcl2 IOD略低于溃

3、疡后6d，但仍维持于较高水平，至胃溃疡损伤后23d，Bcl2 IOD显著降低，与正常组、盐水组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠胃溃疡自愈期间Bax与Bcl2共同参与了胃黏膜的损伤修复。在胃溃疡损伤早期以促凋亡因素为主，抗凋亡因素对溃疡胃黏膜的保护及修复作用主要是在损伤后的614d。 【关键词】  胃溃疡;Bcl2;Bax;免疫组织化学;大鼠【ABSTRACT】 Objective:To investigate the expression of Bax and Bcl2 proteins in gastric mucosa during selfhealing

4、of experimental gastric ulcer in rats.Methods:Acetic acidinduced ulcers were caused by injection acetic acid to submucosal of paries anterior gastricus.The expressions of Bax and Bcl2 in gastric ulcer group(GU),normal saline group(NS)and normal group(N)were detected by immunohistochemical method,and

5、 the results of IOD were analyzed by using the image analytical systems.Results:Bax positive cells significantly increased and showed strong expression on the first day after the experimental gastric ulcer in rats,the IOD value was markedly higher than that in control groups(P<0.01).Then the IOD

6、values of Bax cells in GU group were gradually decreased,and on 23rd day，which had not statistical difference compared with that of the control groups(P>0.05).The expression of Bcl2 gradually increased and the IOD of Bcl2 reached the peak(IOD=21.038±7.537)on the 6th day in GU group,which sho

7、wed the reduction tendency,but on the 10th and 14th days,the IOD values still stayed at the higher level.On the 23th day in GU group,IOD decreased significantly,and had no statistical difference compared with that of control groups(P>0.05).Conclusion:Bax and Bcl2 proteins participate in renovatin

8、g the gastric mucosa during healing of experimental gastric ulcer in rats.The proapoptosis protein Bax plays main role in the early stage of the experimental gastric ulcer,and antiapotosis protein bcl2 protects and repairs stomach mucosa on 614d after the experimental gastric ulcer in rats.【KEY WORD

9、S】 Stomach ulcer,Bax,Bcl2,Immunohistochemistry,Rats研究证实,胃溃疡主要是通过细胞凋亡方式造成的胃黏膜上皮细胞丢失1，2。在胃黏膜的愈合过程中，细胞凋亡明显减少，提示细胞凋亡与胃溃疡黏膜修复关系密切3，4。多种凋亡相关因子的激活，可调节细胞凋亡及其途径影响胃黏膜组织的愈合过程5，从而影响胃溃疡的发展和转归。本实验通过建立实验性胃溃疡大鼠模型，动态研究胃黏膜内促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl2在胃溃疡自愈过程中的表达变化，旨在探讨凋亡相关因子在胃黏膜愈合过程中的调控意义。1 材料与方法1.1 实验动物与标本制备雄性8周龄SD大鼠(购自北京维通利

10、华实验动物技术有限公司)共69只，体质量180230g。分为实验性胃溃疡组(简称溃疡组，GU)42只,盐水对照组(简称盐水组，NS)21只和空白对照组(简称对照组，N)6只。溃疡组按本室已建立的方法在胃体前壁近胃窦处黏膜下注入0.01mL冰醋酸,制成胃溃疡模型;盐水组模拟手术,注入等量生理盐水代替冰醋酸;正常组为正常大鼠，不做任何处理。溃疡组和盐水组均分为制成模型后1d、2d、4d、6d、10d、14d、23d组(每个时间点GU 6只，NS 3只，N 6只与1d组同时取材)。各组动物饲养条件相同，取材前将动物禁食12h,不限饮水，经3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，迅速开胸，经心脏灌注4%多聚甲醛

11、磷酸缓冲液(pH7.4)250mL，固定后，迅速取出胃,沿胃大弯剪开大鼠胃壁，剪取溃疡旁约3mm×5mm的组织条，置于Bouins液中，石蜡包埋，连续切片，厚6m，裱贴于涂有APES的载片，行免疫组化染色。1.2 免疫组织化学染色兔抗大鼠Bax多克隆抗体、兔抗大鼠Bcl2多克隆抗体(工作浓度均为1100)购自武汉博士德生物工程有限公司，SP试剂盒、DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡切片常规脱蜡至水，枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波热修复，3%甲醇H2O2去除内源性过氧化物酶，滴加一抗，4孵育过夜，次日滴加生物素化二抗，室温30min,滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温30m

12、in,DAB显色，苏木精复染细胞核，以PBS代替一抗作为阴性对照。在光镜下观察阳性反应呈棕黄色。1.3 形态计量与图像分析用OLYMPUSCX31显微镜连接Motic Med 6.0显微图像处理软件观察阳性细胞分布、形态并进行积分光密度值测量。Bax、Bcl2阳性细胞以胞浆内出现棕黄色颗粒视为阳性，每只动物随机选择5个高倍视野，进行积分光密度值(integrated optical density,IOD)测量。1.4 统计学处理应用SPSS for windows11.5统计软件进行统计分析，数据以(x±s)表示，溃疡组、盐水组、正常组之间积分光密度值比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 造模后胃组织形态学改变胃溃疡术后1d，溃疡组大鼠胃体前壁即可见一个直径约4mm的溃疡，边界清楚，周围