异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损的功能评价

1、异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损的功能评价         10-04-30 15:48:00     编辑：studa20               作者：赵志钢，陈秉耀，魏海温，王成琪，吴宝岭【摘要】  目的评价异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损后神经功能恢复，从而为临床应用去细胞异种神经移植修复神经缺损

2、提供更为充分的理论依据。方法雄性Wistar大鼠15只，致左侧坐骨神经1 cm缺损，以等粗兔化学去细胞神经移植修复。每2周测定坐骨神经指数，移植后4个月动物麻醉后暴露移植段神经，刺激近侧神经干、于同侧胫后肌群记录运动诱发电位，之后取移植段神经切片后行HE组织化学及NF-160免疫组织化学染色。 结果去细胞异种神经移植物未被宿主排斥，大量神经纤维长入移植物，神经电生理及坐骨神经指数显示宿主坐骨神经功能有部分恢复。结论去细胞异种神经移植可以作为修复周围神经缺损的一种有效方法。 【关键词】  外周神经缺损； 去细胞异种神经移植； 功能恢复    Abstrac

3、t：ObjectiveTo observe the nerve regeneration and functional recovery in the adult rats.MethodThe sciatic nerves on the left side of 15 rats were exposed and 1.0 cm long segments of the nerves were removed from the midthigh level and replaced by rabbit nerve made acellular through chemical extraction

4、.At 4 months after procedure,the nerve regeneration and function recovery were examined with HE staining,NF160 immunohistochemical staining,electrophysiological tests and sciatic functional index (SFI).ResultIn the rats repaired by acellular nerves,regenerated axons reentered into the acellular xeno

5、nerve segments without excessive sign of inflammation following implantation.As stimuling(1.5 mA,0.1 ms,1.0 Hz) to the proximal sciatic nerves,the implanted segment resulted in motor evoked potentials,which were recorded from posterior tibial muscles.SFI showed a partial recovery of locomotion of th

6、e limb with sciatic nerve defect.ConclusionSciatic nerves defect can be repaired by chemical acellular xenogeneous nerves in rats.There was partial functional recovery,which revealed the grafting with chemical acellular xenogeneous nerves may be a promising mehod for nerve defect in clinical. &

7、#160;  Key words：peripheral nerve defect;     acellular xenogeneous nerve transplantation;     functional recovery     周围神经的缺损在战创伤中十分常见，其修复一直是医学界的一个棘手问题。在临床上，  自体神经移植是最基本和最可靠的方法。但自体神经移植来源有限，移植神经多为腓肠神经等的细小皮神经，无法满足较大神经缺损和广泛神经缺损修复的需要

8、，  同时，自体神经移植不可避免的会造成二次创伤、供区功能障碍、感觉缺失、瘢痕形成和神经瘤性疼痛等，故在临床应用上受到限制。近年来，有学者发现，对同种异体神经进行特定的化学萃取处理，可清除神经中的细胞及髓鞘成分从而基本消除抗原性，同时由于保留了神经的基管膜及板层结构而成为神经纤维再生的良好支架，他们相继以化学去细胞同种异体神经移植修复大鼠、兔及犬的坐骨神经缺损获得成功1 3，目前已有临床应用的报道4。但临床上同种异体神经来源并不充分，因此有可能使其应用受到限制。在前期研究中作者应用化学萃取去细胞兔神经分支移植修复大鼠坐骨神经缺损，移植后未见明显免疫排斥反应，大量再生纤维长过移植物，同

9、时见宿主雪旺细胞随再生纤维迁移进入移植物并形成髓鞘5 6。上述结果初步提示应用化学去细胞异种神经修复外周神经缺损的可能性。本实验通过行为学观察、动态坐骨神经指数测定及电生理检测，  对兔化学去细胞神经移植修复大鼠神经缺损后神经功能变化进行综合评价，进一步探讨经化学萃取的去细胞神经用于异种周围神经移植的可行性，为临床应用提供更为确实的依据。    1     材料与方法    1.   1     实验动物  

10、;  雄性新西兰大白兔1只，体重2.   5 kg；雄性Wistar大鼠15只，体重200 250 g。以上动物由解放军第89医院动物实验室提供。    1.   2     兔神经取材及化学去细胞处理    1.   2.   1     兔臂丛神经取材     846合剂(0.   15 mlkg体重)麻

11、醉动物，暴露双侧臂丛，剪取直径约1.   5 mm，长度超过1.   0 cm的分支，按后述方法处理。    1.   2.   2     化学去细胞处理     参考Sondell等的方法2，将新鲜取材的神经置蒸馏水中清洗，除去表面的组织碎块及纤维膜，然后按下面的程序处理：(1)蒸溜水浸浴7 h，换水2次；(2)震荡器中(150转分)3.   0Triton X-100溶液消化12

12、h；(3)蒸馏水浸浴1 h；(4)震荡器中(150转分)4.   0脱氧胆酸钠溶液消化24 h。重复以上步骤1次，蒸馏水清洗后将处理好的神经置无菌PBS液(pH 7.   2)中，4冰箱保存备用。    1.   2.   3     大鼠坐骨神经缺损模型制作及神经移植过程     0.   5戊巴比妥钠(40 60 mg100 g体重)麻醉Wista大鼠，  自臀部肌间隙暴露

13、左侧坐骨神经，自第一个肌支以上切除0.   8 cm，以1.   0 cm长化学去细胞兔神经分支移植修复，局部滴入硫酸庆大霉素注射液3 4滴，逐层关闭切口。分笼饲养。    1.   3     观察指标    1.   3.   1     大体行为学观察     置实验鼠于平地，观察手术侧下肢运动情况。 

14、   1.   3.   2     坐骨神经功能指数(scimic functional index，SFI)测定     采用沈宁江7等的改良方法于术前及术后每2周测定实验侧足(E)、正常侧足(N)的足印长度(PLF)、足距宽度(TSF)、中间足趾宽度(ITF)，直至术后4个月。将数据代入Bain公式，计算SFI及其恢复率。    SFI=-38.   3(EPL-NPL)NPL+109.   5(ETS-NTS)NTS+13.   3(EIT-NIT)NIT)    正常大鼠SFI为0，坐骨神经完全离断指标为-100。    1.   3.   3     神经电生理观察