弓形虫IgM酶联免疫法检测试剂盒

1、弓形虫IgM酶联免疫法检测试剂盒（TOXO IgM ELISA TEST SYSTEM）体外诊断试剂 产品编号：8Z8651M简 介：宙斯（Zeus）公司的弓形虫 IgM 酶联免疫检测试剂盒是应用酶联免疫技术定性检测人血清中的刚地弓形虫IgM 抗体的系统。目的是为急性、有活性的或近期发生的刚地弓形虫的感染提供血清学证据。本试剂盒必须结合抗弓形虫IgG抗体的方法同时使用。本产品FDA没有明确可以用于检测血液和血浆供体。本方法还未能用于怀孕妇女和新生儿的检测。背 景：刚地弓形虫是一类分布在世界范围内的细胞内原生动物寄生虫（1，2）。虽然猫科动物是其终宿主，但该生物体却能感染几乎所有的哺乳动物和鸟类

2、。血清学数据表明虽然不同国家的人弓形虫盛行的种类不同，但大部分的工业化国家有大约30%的人都会慢慢受到该原虫的感染，（3）。弓形虫有三种存在形式：滋养体、包囊和卵囊（1，2）。滋养体（速殖子）在急性感染阶段是具有攻击性的形式。原虫在宿主细胞胞质中繁殖以后形成组织包囊形式，此时的包囊可以包含数千个生物体（缓殖子）。卵囊只在猫科动物的小肠上皮细胞中发育，并未在其他宿主中发现。卵囊随着猫科动物排泄的粪便排出体外，数天后发育成熟。人类或其他动物摄取了具有包囊的生的、未加工的肉或具有卵囊的被猫的粪便污染了的食物便得到感染。一旦消化，该寄生虫便从包囊中（缓殖子）被释放出来，卵囊（孢子体）被消化酶消化并侵染

3、小肠粘膜。寄生虫就地繁殖然后以包囊的形式转移到其他器官，包囊可以在宿主的生命中长期存在。包囊主要存在于脑、心脏和骨骼肌中。感染刚地弓形虫的人大多数（8090%）是无症状的（4）。感染急性弓形虫的成年人大多表现的临床症状为无症状的单结或多结淋巴结病症状，伴随淋巴结病症状还有发热、身体不适和非典型性淋巴细胞增多，症状与单核细胞增多症相同。少数宿主患者通常会出现严重的并发症，像脑炎、心肌炎或局部急性肺炎等（1）。尽管感染刚地弓形虫对于一般寄主通常并无疾病影响，但是，对于那些患有免疫缺陷疾病的寄主却是致命的（5）。免疫缺陷的病人可以发展成具有严重传染性的弓形虫病，或弓形虫性脑炎，或者同时患上这两种病。

4、弓形虫在艾滋病患者体内通常会侵染患者的中枢神经系统（6）。血清学证据表明，弓形虫性脑炎是艾滋病患者身上的潜在传染病，大约30%的弓形虫抗体阳性的艾滋病患者将会发展成弓形虫性脑炎（7）。当一名血清学检测阴性的妇女在怀孕期间感染了弓形虫，该生物体便通过胎盘传送给胎儿（1，8）。胎儿感染的严重性根据感染的时期不同而有所不同，前期感染的可以导致孕妇自然性流产，或者顺利生产但新生儿有明显的疾病症状。如果在怀孕后期感染，新生儿通常会没有症状，所以不易识别（8）。先天性感染弓形虫病的新生婴儿大约有75%是无症状的。然而，几乎所有具有潜在弓形虫病的儿童在他以后的成长过程中其视力或神经系统发育均会留下后遗症。大

5、约8085%的儿童发育成视网膜炎，甚至一些儿童会失明或者患上精神性运动或智力障碍。目前，有很多种检测刚地弓形虫抗体的血清学方法作为辅助诊断急性传染或评价先前感染弓形虫的方法。常用的方法包括：Sabin-Feldman 染色法、直接凝集法、间接凝集法、乳胶凝集法、间接免疫荧光法和ELISA法（9）。感染刚地弓形虫的患者大多数在第一周即可出现IgM抗体，并且仅存在短暂的时期（1）。检测IgM抗体的血清学方法能够帮助鉴别近期获得传染的病人（1，2，4）。检测刚地弓形虫IgM抗体的血清学方法包括间接荧光法、免疫凝集法和ELISA法（4，9，10，11）。ELISA法最早是由Engvall和Perlma

6、n 提出的（12，13），以后，ELISA检测系统被广泛应用于各种各样的抗原和抗体检测（14）。应用ELISA法检测刚地弓形虫是非常特异的、灵敏的和可靠的（9，11）。ELISA法在每一个测试样本中都加入了确定的目标抗体，适用于检测大量的病人样本。IgG抗体是弓形虫IgM的高度类似物，如果它存在于标本中，会干扰IgM抗体的特异性检测。高度类似物IgG抗体可以先于IgM抗体与刚地弓形虫抗原结合，造成IgM抗体假阴性结果（14）；同样，类风湿性因子（RF）如果与IgG特异性抗原同时存在，它可以与IgG特异结合而造成IgM抗体假阳性的结果（15）。以上两个问题可以通过在测试前去除标本中的IgG来得到

7、解决。目前，已经有几种方法被应用于分离IgG。这些方法包括，过滤法、蛋白A吸收法、离子交换层析法和抗人IgG血清共沉淀法。ELISA法检测原理：宙斯公司的TOXO IgM ELISA 检测系统是针对由于感染TOXO抗原而产生IgM类抗体，并对此抗体进行检测而设计的测试系统。整个检测步骤包括三步温育过程。1 用提供的样品稀释液稀释待测血清。样品稀释液中含有抗人IgG，它可以将样品中的IgG和类风湿因子沉淀掉，使IgM得以和弓形虫抗原反应。在样品温育过程中，特异性的IgM抗体将与免疫抗原结合。然后洗去未结合的抗体和血清中其他的成分。2 结合有过氧化物酶的羊抗人IgG（m链），加到微孔板上温育。结合

8、物与第一步中事先连接在板上的抗体杂交。然后洗去未反应的结合物。3 固定在微孔板上的免疫过氧化物酶结合物与其底物溶液反应，底物水解发生颜色变化。一定时间后终止反应，读取光吸收值即可。溶液颜色的深浅与原始待测样本中的抗体浓度有关。2.试剂盒提供成份每个试剂盒内包含有足够数量的下列组份，以便于能进行包装所示的试验次数。1 酶标板。96孔12条8孔板，用灭活弓形虫（ RH链）抗原包被的酶标板，酶标板放置在酶标板框架上并密封在一个含有干燥剂的包装袋中。2 结合剂。辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（链）。直接使用，15ml，一瓶，白色盖子。内加防腐剂。3 阳性对照（人血清）。0.35ml一支，红色

9、盖子。内加防腐剂。4 校正品（人血清）。0.5ml一支，蓝色盖子。内加防腐剂。5 阴性对照（人血清）。0.35ml一支，绿色盖子。内加防腐剂。6 样品稀释液。30ml，一瓶（蓝色盖子）。溶液中含有Tween-20、BSA、磷酸盐缓冲液（PH7.2±0.2）和抗人IgG(链)，。紫色溶液，直接使用。注：使用前充分混匀。（产品编号：005M）。内加防腐剂。7 TMB。15ml一瓶，琥珀色瓶子（琥珀色盖子），含有TMB，直接使用。溶液中含DMSO15%（W）。8 终止液。15ml一瓶，红色盖子，溶液中含有1 M H2SO4，0.7M HCl。直接使用。9 浓缩洗板液（10浓度）：1份浓缩洗

10、板液加9份的去离子水或蒸馏水。100ml一瓶(透明盖子)，含有10浓度磷酸盐缓冲液（PH7.2±0.2）、Tween-20（蓝色溶液）。内加防腐剂。（注：1浓度的溶液PH应为7.2±0.2。）以下溶液不是每批都有差别的，可以通用于ELISA试剂盒：TMB、终止液、洗板液。注：试剂盒内同样包括有：1 各组分清单和不同批号特异的资料。2 使用说明书预先警告：1 用于体外诊断。2 接触实验室试剂时常规的注意事项。如果接触到眼睛，立即用大量的水冲洗并到医院检查。穿适当的防护服，戴手套和眼/脸保护设备。不要呼吸到蒸汽。处理废弃物时遵守相关法规。3 ELISA板上没有活性的有机物。但应

11、将之视为有潜在生物毒性的物质并小心处理。4人血清对照品是有潜在生物毒性的物质。产品的原材料经检测对HIV-1抗原和HBsAg以及抗HCV、抗HIV抗体是阴性的。但没有实验方法可以完全确保无感染因素，因此，这些样品还是应该按照生物安全标准2进行处理。根据疾病控制中心和国家健康控制研究院手册“微生物和生物医学实验室的生物安全”现版本和对血液病原体处理的OSHAs标准推荐的方法，处理任何具有潜在传染性的人血清或血液制品。5 严格按照说明书中指定的温育时间和温度操作是获得正确结果的重要保证。实验前一定要使所有试剂的温度回复至室温（2025）。没有用完的试剂应立即放回到冰箱。6 不正确的清洗会导致假阳性

12、或假阴性的结果。加入结合试剂和底物溶液之前一定要确保尽量拍干的残留的洗板液。另外，在温育过程中要避免微孔干透。7 人血清对照、样本稀释液、结合物和浓缩洗板液都包含有防腐剂（thimerosal,0.04%(w/v)），一旦误服将引起中毒。8 终止液有毒，如果吸入、接触到皮肤或误服将烧坏。如果发生此类情况立即就医。9 TMB溶液将刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。10. 浓缩的洗板液将刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。11. 擦掉微孔板底部残留的试剂和手印以免影响OD读数。12. 稀释或掺杂其他试剂会导致错误的结果。13. 不要用其他批号的试剂或其他厂家的产品来替代试剂盒中的试剂。14. TMB溶液应该是无色的

13、。当使用时，显示很浅的黄色、绿色或兰色。它与结合物或其他氧化物的污染会导致溶液过早地改变颜色。如果底物溶液已经变成明显的蓝色时切勿使用。15. 切勿用嘴吸移液管。避免试剂和病人样品与皮肤或粘膜接触。16. 避免试剂被微生物污染，这将产生错误的结果。17. 试剂和样本的交叉污染会导致错误的结果。18. 重复使用的玻璃容器应清洗，并彻底冲去洗涤剂。19. 避免溶液飞溅或产生气溶胶。20. 在储存和温育过程中，避免把试剂暴露在强光下。21. 先将微孔板回复至室温，然后再打开袋子，这样可以避免孔中成分的凝结。22. 洗板液应该收集在处理盘中，用10%的家用漂白剂（0.5%次氯酸钠）进行消毒。23. 注

14、意：酸性pH的废液在加漂白剂处理前必须先中和。24. 如果干燥剂上的指示条已经从兰色变成粉红色，不要再使用ELISA板了。25. 不要让结合剂接触到含有叠氮钠的溶液，微量的叠氮钠就会影响结合剂的酶活力。26. 不要让任何反应试剂接触到含有漂白剂的溶液。微量的漂白剂（次氯酸钠）会影响试剂盒内很多试剂的生物活性。自备设备和材料：1 能在450nm读数的酶标仪2 能精确吸取10到200ul的移液器3 多通道移液器，能精确吸取50-200 ul4 适用于多通道移液器的贮液槽5 洗瓶或洗板机6 蒸馏水或去离子水7 1L量筒8 专用于吸血清的移液器9 一次性吸头10. 纸巾11. 实验室用的计时器以便控制

15、温育时间12. 装有消毒剂的废液缸（例：10%的家用漂白剂、0.5%的次氯酸钠）保存条件：1 未开封的试剂盒：保存在2-8°C。2 微孔板条：保存在2-8°C。已开封未用完的微孔板应立即放入原有密封袋中，保存在2-8°C。只要干燥剂上的指示条仍为兰色，密封袋开封后，板条可稳定60天。3 结合剂：保存在2-8°C。不得冻存。4 校正品、阳性和阴性对照：保存在2-8°C。5 TMB：保存在2-8°C。6 浓缩的洗板液（10´）：保存在2-25°C。稀释到1´浓度后在室温（20-25°C）可稳定7天，

16、或在2-8°C可稳定30天。7 样本稀释液：保存在2-8°C。8 终止液：保存在2-25°C。标本采集：1. 建议根据NCCLS的M29号文件来采集标本（接触有传染性疾病的实验 室工作者的防护）。2. 没有已知的试验方法可以完全证明人的血液标本不会导致感染，因此，所有的血液都应视为有潜在的传染性。3 本试验选用的标本为无菌静脉穿刺取得的血液，经新鲜沉降和冷藏获得的血清。不得使用抗凝剂和防腐剂。避免使用溶血、脂血和细菌污染的血清。4 标本在室温保存不得超过8小时。如果8小时内不进行检测，应把血清保存在2-8°C最多48小时。如时间更久，应把标本放在-20&

17、#176;C或更低。不要反复冻融标本以免造成抗体活力降低并影响最终结果。操作步骤：1 将试剂盒组分从贮存条件取出，使其恢复至室温（20-25）。2 确定试验所需微孔板数量。每次试验都应设六个质控品/校正品（一个试剂空白对照、一个阴性对照、三个校正品和一个阳性对照）。每次试验均需设置试剂空白对照。检查软件和酶标仪以确认质控品/校正品的参数。将剩余的板条仍然放入有干燥剂的密封袋中，保存在2-8。样本排列12A空白对照标本3B阴性对照标本4C校正品等等D校正品E校正品F阳性对照G标本1H标本23 按1：21倍数稀释阳性对照、校正品、阴性对照和每个病人的血清样品（例如：10ml血清+200ml样本稀释

18、液，使用前充分混匀）。4 在每个孔内加入100ml稀释过的对照、校正品和样本。保证标本充分混匀。不同的样本使用不同的吸头。5 加入100ml样本稀释液于A1作为试剂空白对照。检查软件和酶标仪以确认试剂空白的参数。6 板条在室温（20-25°C）温育25±5分钟。7 洗板5次。A 手工洗板步骤：a 甩掉孔中的液体。b 在每个孔内加入洗板液，确保孔中无气泡。c 重复a和b步骤，洗板5次。d 甩掉孔中的洗板液，在纸巾上拍干孔中的洗板液。目测微孔中无残留洗板液。把洗板液收集在废液缸中，并在每天实验结束用0.5%次氯酸钠处理。B 自动洗板步骤：如果使用自动洗板机，把洗板溶液体积设置为

19、300-350ml/孔。设置无间隔循环清洗五次。最后将微孔板从洗板机上取下，置于纸巾上拍干。8 每孔中加入100ml结合剂，按照样品加入的顺序以相同的速率和顺序依次加入微孔板中。9 微孔板在室温（20-25°C）温育25±5分钟。10. 按照步骤7进行洗板。11. 每孔中加入100mlTMB，按照样品加入的顺序以相同的速率和顺序依次加入微孔板中。12. 微孔板在室温（20-25°C）温育10-15分钟。13. 每孔加入50ml终止液以终止反应，按照TMB底物溶液加入的顺序以相同的速率和顺序依次加入微孔板中。阳性的标本会从兰色变为黄色。加入终止液后，拍打平板数次以确

20、保样品完全混合。14. 将微孔板置于450nm波长下读取每个孔的光密度值，以空白试剂作对照。应在加入终止液30分钟内读取数据。质量控制：1 每次试验中，校正品都要重复3次。同时包括一个试剂空白对照、阴性对照、阳性对照。2 计算3个校正品的平均值。如果有一个值超过平均值的15%，则剔除后计算另两个孔的平均值。3 校正品的平均OD值和阳性对照、阴性对照的值应在以下范围：OD值范围阴性对照£ 0.250校正品³0.300阳性对照³0.500A. 阴性对照的OD值除以校正品的平均OD值应£ 0.9B. 阳性对照的OD值除以校正品的平均OD值应³1.25

21、C. 如果不符合上述要求，认为本次试验无效应重复试验。4 阳性对照和阴性对照用来监控试剂的情况，并不能保证Cutoff值的准确性。5 根据要求还可以加入其他对照。6 本质量控制参照NCCLS的C24号文件：定性测试的统计学质量控制。结果判断：A 计算：1 校正因子阳性对照的cutoff值由生产者确定，并与校正品有关。校正因子（CF）可以帮助你判断阳性标本的域值，纠正每次实验中细微的读数变化。校正因子的确定应决定于不同批的试剂盒的不同组分，并打印在试剂盒的组分表中。2 Cutoff值用校正因子乘以校正品的平均值即获得Cutoff值。3参考值或OD比率每个标本都要计算参考值或OD比率，方法是它们的

22、OD值除以步骤2中得来的cutoff值。例如：校正品的平均OD值=0.793校正因子（CF）=0.25Cutoff值=0.793´0.25=0.198未知标本的OD值=0.432标本的参考值或OD比率=0.432/0.198=2.18B 说明：参考值或OD比率按如下判断：参考值或OD比率阴性样本0.90可疑样本0.91-1.09阳性样本1.101 OD比率0.90表明没有检测到弓形虫IgM抗体。阴性结果表明近期或以前未感染过弓形虫。这样的个体怀疑为早期感染者，早期感染阶段如果标本采集时间过早，则可能检测不到IgM抗体。如果怀疑该患者为早期感染者，应该在7天内再次采集该个体的标本，并将

23、新采集的标本与前面的标本同时重复试验。2OD比率1.10则表明IgM抗体阳性。该结果表明该个体为感染或近期感染弓形虫。检测到高于Cutoff值的结果的数值，并不表明抗体存在的数量。3 样本的OD比率如果在以下范围内（0.91-1.09），应该重复试验。如果重复实验的结果相同，该个体的标本应该在7天内重新采集并与前面的标本重复实验。如果第二次的结果仍在上述范围内（或阴性），两个标本均应做弓形虫IgG抗体检测试验。如果第一个标本，或两个标本结果为IgG抗体阳性，很可能是早期感染过病源虫，在IgG存在的情况下，残留IgM被检测。如果两个标本检测IgG时均为阴性，很可能是早期感染患者。按照临床要求，应

24、该采集另一标本并同时与第一标本同时试验，或者二者选一。抗弓形虫IgM抗体抗弓形虫IgG抗体报告/注释阴性阴性患者可能还没有感染弓形虫或不是急性感染期。如果症状持续，则在三周内提交一份新的标本进行检测。阴性阳性该结果不能判断患者是否感染了弓形虫。患者很可能有该病史，可能在一年前感染过弓形虫。阴性可疑采集新的标本进一步试验。患者可能没有急性感染弓形虫，也不能确定患者以前是否感染过弓形虫。可疑阴性采集新的标本重新检测弓形虫IgM抗体。这个结果不能确定患者是否急性感染了弓形虫。显示患者以前未感染过弓形虫。如果新采集的标本检测 IgM抗体的结果是阳性或仍为可疑，样本应送至弓形虫检测经验丰富的标准实验室做

25、进一步的试验。可疑阳性采集新的标本重新检测弓形虫IgM抗体。不能确定患者是否急性感染或已感染弓形虫。患者可能以前感染过弓形虫。如果新采集的标本IgM抗体检测结果仍为可疑或阳性，样本应送至弓形虫检测经验丰富的标准实验室做进一步的试验。可疑可疑采集新的标本做进一步试验。不能确定患者是急性感染还是已经感染了弓形虫。如果新采集的标本IgM抗体检测结果为可疑或阳性，样本应送至弓形虫检测经验丰富的标准实验室做进一步试验。阳性阴性采集新的标本进一步试验。患者可能急性感染，也可能没有急性感染弓形虫，因为弓形虫IgG抗体检测是阴性的，可能标本采集时间过早。采集新的标本用不同的弓形虫IgM检测方法重新检测，如果新

26、标本的检测结果仍为阳性，标本应送至弓形虫检测经验丰富的标准实验室做进一步的试验。阳性阳性患者可能感染，也可能没有急性感染弓形虫。采集新的标本做进一步试验。因弓形虫IgG抗体检测阳性，很可能患者急性感染了弓形虫。新采集的标本应该再重复一次。如果新采集的标本IgM和IgG抗体结果检测仍为阳性，标本应送至弓形虫检测经验丰富的标准实验室做进一步的试验。阳性可疑不能确定患者是否急性感染了弓形虫。采集新的标本做进一步的试验。患者以前是否感染过弓形虫不能确定。可能标本采集时间过早。新采集的标本用不同的弓形虫IgM检测方法重新检测。如果新标本弓形虫抗体的检测IgM仍为阳性，而IgG结果为阳性/阴性/不确定，标

27、本应送至弓形虫诊断检测经验丰富的标准实验室做进一步的试验。方法的限制性：1 宙斯公司弓形虫IgM ELISA 诊断试剂盒的实验结果不能作为唯一的诊断依据，试验结果应结合临床评价和其他诊断方法结果进行综合判断。2 一些病人早期感染了弓形虫，其IgM抗体的低水平会保持一年左右（1）。弓形虫IgG特异抗体的检测在评价这些病人的血清学诊断中有一定的价值。3 弓形虫感染的初级阶段，标本采集如果时间过早，可能会导致检测不到IgM抗体（4）。有一些病人，感染病源虫三周IgM特异抗体检测，结果可能会转为阴性（1）。那么检测这些病人的弓形虫IgG特异抗体，在血清学诊断中有一定的价值。4 弓形虫IgM 特异抗体在

28、患有免疫缺陷或先天性弓形虫病的病人体内可能检测不到（2）。5 在自然发生的能够检测到弓形虫IgM抗体病例里，可能会伴随IgG抗体阳性，也可能不会，这已有相关报导（21，22）。这时不能确认是刺激物还是自然生产的抗弓形虫的IgM抗体。6 感染了EB病毒的病人体内会存在异型的IgM抗体，用本试剂盒检测时可能会出现假阳性的结果。7 弓形虫IgG抗体可以与IgM竞争同抗体结合位点结合，从而导致假阴性结果。类风湿因子（IgM）如果与弓形虫IgG同时存在，会导致假阳性结果。吸收温育步骤功能上将会去除标本中99% 以上的IgG，因此会明显降低假阳性或假阴性结果的可能性。8 患有自身免疫疾病的患者会发生弓形虫

29、抗体假阳性的结果（23）。9 宙斯公司弓形虫IgM ELISA检测还不能应用到新生儿标本的检测上。10.弓形虫IgM检测阴性结果，不能排除免疫缺陷病人急性感染的可能性。患有免疫缺陷病人的标本，弓形虫IgG抗体检测一般较低，而IgM抗体检测不到（24）。11.由于在美国感染弓形虫引起的IgM抗体数量明显很少，因此以下特征值可能在不同的实验室并没有代表性。12.抗弓形虫IgM抗体之类的物质数量非常少，因此实验的阳性结果属于假阳性的可能性越来越大，而降低了阳性的预期值。期望值：弓形虫IgM抗体的量在症状将要发生和刚刚发生时会急剧升高，并在一个月内达到一个顶峰浓度（1，4）。大多数病人在4-6个月内，

30、抗体的量就会降到较低水平（4）。有一些病人在感染8个月到1年内均可检测到IgM特异性抗体（1，11）。作为比较研究的部分资料，检测了131例无症状的普通标本，统计结果列于表3和表4。研究进展：比较研究：宙斯公司生产的弓形虫IgM ELISA检测系统与市售其他公司的用ELISA方法检测弓形虫IgM抗体的产品进行了两个比较研究。第一个研究：试验血清标本共为157个，26个阳性标本来自于弓形虫病标准实验室，131个阴性标本为美国东南部献血者血清标本。标准实验室弓形虫标本中IgM抗体的存在判断主要基于该实验室Sabin-Feldman染色阳性的结果。弓形虫IgM捕获ELISA方法和临床诊断方法不一致的

31、标本，用市售产品弓形虫IgM IFA检测系统检测，以上研究的实验结果见表1、2、3、4：表一宙斯公司弓形虫IgM ELISA相对灵敏度92.2%（26/28）相对特异性100%（122/122）相对符合率98.7%（148/150）*用一种或两种ELISA方法检测出的7个可疑阳性标本不列入上述计算。表二 弓形虫标准实验室提供的标本（n=26）Zeus 弓形虫 IgM ELISA+-±总计市售弓形虫IgM ELISA(捕获)+251026-0000±0000 总计26相对灵敏度=96.2（25/26）注：请注意“相关性”指的是本方法的实验结果与同类方法相比较。而不是方法与疾病

32、的相关性。表三 常规献血者标本（n=131）宙斯公司弓形虫 IgM ELISA试剂盒+-±总计市售弓形虫IgM ELISA(捕获)+1（a）10(b#177;07(c)07 总计131(a)-IFA检测阳性(b)-不一致结果-参看表四(c)-可疑结果，排除计算。表四、分析不一致献血者结果样品编号宙斯弓形虫IgM ELISA市售弓形虫IgM ELISA市售IFA 2249（p）*65（p）87（p）123（p）124（p）128（p）129（p）130（p）132（p）* 参照染色反应对弓形虫抗体是非特异的。我们用宙斯公司弓形虫IgM检测系统对这些无症状的、

33、正常人群分析的结果为，相对特异性100%（113/113）。基于以上研究结果，宙斯公司弓形虫IgM检测试剂盒相对灵敏度、相对特异性和符合率总结见表一。第二个研究为选用可能含有弓形虫特异IgM抗体的未知样品（n=19）进行检测。研究结果总结见表五。表五 未知样品评价Zeus 弓形虫 IgM ELISA+-±总计市售弓形虫IgM ELISA(捕获)+152*017-0202±0000 总 计19*IFA 阳性相对灵敏度=82.2%（15/17）相对特异性=100.0%（2/2）置信度百分比=89.5%（17/19）重复性：为了评估检验过程的intra-assay和inter-a

34、ssay，我们对6个样本的强阳性、弱阳性、阴性的OD比范围进行检测。将每个样本复制8份，在3个连续工作日中对其进行检测。计算每个样本的平均OD比和CV值。数据显示如下：Intra-Assay（N=8）Inter-assay（N=3）血清样本 一次检测 二次检测 三次检测平均比 CV平均比CV平均比CV平均比CV1HP4.893.5%4.176.2%5.513.2%4.864.3%2HP4.108.3%4.686.7%5.024.5%4.606.5%3MP2.078.7%2.422.5%2.729.6%2.406.9%4LP1.6014.6%1.6613.6%1.9915.3%1.7514.5%

35、5N0.2079.6%0.17711.1%0.20616.9%0.19712.5%6N0.10512.8%0.07427.2%0.0932.6%0.0912.2%交叉实验：该试验是为了评价类风湿因子（RF）、EBV-IgM和抗核抗体（ANA）的干扰。含有EBV-IgM抗体的9个标本（IFA滴度范围在1：10到1：5120）、RF阳性的33个标本（乳胶凝集滴度范围在1：20到1：640），分别用本试剂盒检测，结果均为阴性。有一例标本TOXO IgG强阳性（ELISA比率为8.006）及类风湿因子强阳性（1：160），用本试剂盒在IgG吸收以前，IgM的检测结果为弱至中等阳性（ELISA比率为1：

36、822）。在IgG吸收以后，IgM的ELISA检测结果接近于阴性（ELISA比率为0.160）。48个ANA标本用本试剂盒检测，46个结果为阴性。两个阳性标本中其中之一表现为杂色，滴度为 1：1280，另一个标本表现为核内模式（1：160）和抗高尔基活性（1：80）。这些试验结果表明，RF、EBV-IgM和ANA对本试剂盒的干扰是非常小的。简明步骤：1. 稀释血清1：212. 每孔加稀释过的血清100ml3. 温育20-30分钟4. 洗板5. 每孔加结合剂100ml6. 温育20-30分钟7. 洗板8. 每孔加TMB 100ml9. 温育10-15分钟10. 每孔加终止液50ml11. 读数参

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