第八章蛋白质和氨基酸的测定_第1页
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1、凯氏定氮法凯氏定氮法杜马斯法杜马斯法福林酚法福林酚法染色法染色法 蛋白质含量蛋白质含量 换算系数换算系数 蛋或肉蛋或肉 16.0 6.25 牛牛 奶奶 15.7 6.38 小小 麦麦 18.76 5.33 玉玉 米米 17.70 5.56 燕燕 麦麦 18.66 5.36 大大 豆豆 18.12 5.52 大大 米米 19.34 5.17 6.25=6.25=6.38=5.952NH2(CH2) 2COOH+13H2SO4 (NH4) 2SO4+6CO2+12SO2+16H2O加硫酸钾加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点作为增温剂，提高溶液沸点加氧化剂加氧化剂 加速有机物氧化速度加速有机物氧化速

2、度= NH3 +H2O用用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定 指示剂：混合指示剂（甲基红指示剂：混合指示剂（甲基红溴甲基酚绿）溴甲基酚绿） 指示剂指示剂 红色红色 绿色绿色 红色红色 （酸）（酸） （碱）（碱） （酸）（酸）反应式为：反应式为： NHNH3 3+H+H3 3BOBO3 3=NH=NH4 4+ +H+H2 2BOBO3 3- - H H2 2BOBO3 3- -+H+H+ +=H=H3 3BOBO3 3 用过量的用过量的 H2SO4 或或 HCl 标准溶液吸收，再标准溶液吸收，再用用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液。标准溶液滴定过剩的酸液。量量NaOH

3、NaOH少少1000W%100K)(CMVVN21NH2CONHCONH2 + NH3NH2CONH2 + NH2CONH2150160双缩脲双缩脲能和硫酸铜的碱性能和硫酸铜的碱性溶液生成溶液生成紫色络和物紫色络和物。紫色络和物。紫色络和物。 取两组测定的取两组测定的A A540值的平均值，即值的平均值，即A A540540为纵坐标，蛋白质为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。浓度为横坐标，绘制标准曲线。2 2、样品测定、样品测定取取4 4支试管分成两组，按下表平行操作：支试管分成两组，按下表平行操作：%100(%)cNY固体样品蛋白质的含量(1)(1)在碱性条件下，蛋白质与铜离子作用生成蛋白质在碱性条件下，蛋白质与铜离子作用生成蛋白质铜铜络合物。络合物。(2)(2)此络合物将试剂磷钼酸此络合物将试剂磷钼酸磷钨酸磷钨酸( (olinolin试剂试剂) )还原，还原，混合物深蓝色混合物深蓝色( (磷钼蓝和磷钨蓝混合物磷钼蓝和磷钨蓝混合物) ) 。总氮量总氮量蛋白氮蛋白氮总氮量总氮量蛋白氮蛋白氮凯式定氮装置凯式定氮装置分光光度计分光光度计高温装置、高温装置、GCGC分光光度计分光光度计浓硫酸浓硫酸用量较少用量较少不需要不需要福林福林- -酚试剂酚试剂长长简单快速简单快速3min3min简单快速简单快速染色法染色法紫外

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