第八章动物实验基本操作

1、第八章第八章 动物实验操作技术动物实验操作技术 第一节 实验动物的抓取与固定 第二节 实验动物的麻醉 第三节 实验动物给药途径和方法 第四节 实验动物采血方法 第一节 实验动物的抓取与固定 一、大鼠小鼠 二、豚鼠 三、家兔 四、犬大鼠的手法捉拿大、小鼠的固定二、豚鼠的捉拿和固定三、家兔的捉拿和固定 四、犬的捉拿家兔手术台固定第二节 实验动物的麻醉 一些动物实验，特别是手术等实验，为减少动物的挣扎、保持安静和便于操作，常对动物采用必要的麻醉。由于动物种属间的差异，所采用的麻醉方法和选用的麻醉剂亦有不同。 一、常用的麻醉剂 氨基甲酸已酯戊巴比妥钠乙醚（一）挥发性麻醉剂 包括乙醚、氯仿等。 优点：其

2、麻醉量和致死量差距大，所以安全度也很大，动物麻醉深度容易掌握，而且麻后苏醒较快。 缺点：对局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液体分泌增多，容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉时必需有人照看，以防麻醉过深而出现上述情况。（二）非挥发性麻醉剂 包括苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛等。 优点：使用方便，一次给药可维持较长的麻醉 时间，麻醉过程较平衡，动物无明显挣 扎现象。 缺点：苏醒较慢。 氨基甲酸乙酯特点：药性温和安全度大多数动物均可使用。 有致癌作用不能用于肿瘤有关的实验;有时可降低血压。 动物 给药途径 剂量 浓度 给药量 维持时间 （g/kg) ml/kg

3、 犬猫兔 腹腔静脉 0.751.0 25 34 24h豚鼠 肌肉 1.35 20 7.0 大小鼠 腹腔 1.52.0 20 10戊巴比妥钠动物 给药途径 剂量 浓度 给药量 维持时间 （mg/kg) ml/kg犬猫兔 静脉 30 3 1.0 24h 腹腔 4050 3 1.41.7 豚鼠 腹腔 4050 2 2.02.5 大小鼠 腹腔 45 2 2.3特点：短效麻醉剂，对动物的循环和呼吸无显著影响。（三）中药麻醉剂 动物实验时有时也用到像洋金花和氢溴酸东莨菪碱等中药麻醉剂，但由于其作用不够稳定，而且常需加佐剂麻醉效果才理想，故在使用过程中不能得到普及。 二、动物的麻醉方法 （一）全身麻醉 1.

4、 吸入法 操作：用乙醚浸湿棉球或纱布，迅速转入密闭容器使其挥发，然后把待麻醉动物投入，约隔46分钟即可麻醉，麻醉后应立即取出。给药过程中如发现动物的角膜反射消失，瞳孔突然放大，应立即停止麻醉。可先注射阿托品预防窒息。2. 腹腔和静脉给药麻醉法 非挥发性麻醉剂可用作腹腔和静脉注射麻醉，操作简便，是实验室最常采用的方法之一。 腹腔给药麻醉多用于大小鼠和豚鼠，较大的动物如兔、犬、猴等则多用静脉给药进行麻醉。由于各麻醉剂的作用长短以及毒性的差别。所以在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度和注射量。 （二）局部麻醉 1. 猫的局部麻醉一般应用0.51.0%盐酸普鲁卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%盐酸可卡因

5、。 2. 兔在眼球手术时，可于结膜囊滴入0.02%盐酸可卡因溶液，数秒钟即可出现麻醉。 3. 犬的局部麻醉用0.51%盐酸普鲁卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%盐酸可卡因。 三、三、 麻醉注意事项麻醉注意事项 1、动物麻醉前禁食1012h,不少于5h 2、虚弱和过于肥胖的动物给药剂量应低于标准量 3、静脉注射麻醉剂应注意缓慢达到所需要的麻醉深度 则停止给药 4、注意实验动物保温。做慢性实验时，麻醉剂在注射前 应加热至动物体温水平。 猫为38.61.0，兔为38.41.0， 大鼠为39.30.5 第三节第三节 实验动物给药方法实验动物给药方法 在动物实验中为了观察药物对机体功能、代谢、形态的作

6、用需要将药物注入到动物的体内。一般根据动物种类和药物剂型确定给药的方法。一、给药方法一、给药方法 （一）（一）皮下注射皮下注射动物 注射部位 注射量犬猫 大腿外侧 2 ml豚鼠 大腿内侧或小腹部 1ml大小鼠 侧下腹部 0.4ml/1ml（二）皮内注射（二）皮内注射（三）肌肉注射（三）肌肉注射动物 注射部位 注射量 犬 臀部 25ml家兔 大腿外侧 0.51.0ml(2ml)豚鼠 大腿外侧 0.20.5ml 大鼠 大腿外侧 0.20.5ml小鼠 大腿外侧 0.10.2ml(1ml)（四）（四）腹腔注射腹腔注射 注射部位左下腹部1/3处 小鼠0.10.2ml 大鼠13ml 豚鼠25ml 家兔51

7、0ml 犬515ml （五）静脉注射（五）静脉注射大小鼠的尾静脉注射家兔耳部血管家兔的耳缘静脉注射耳外缘静脉耳中央动脉静脉注射给药剂量静脉注射给药剂量小鼠大鼠豚鼠家兔犬0.20.5ml12ml15ml310ml515ml（六）经口给药（六）经口给药 各种动物一次灌胃能耐受的最大容积:小鼠为0.51.0ml，大鼠为47ml，豚鼠为47ml，家兔为80150ml，犬为200500ml。二、实验动物用药量的确定及计算方法二、实验动物用药量的确定及计算方法 按照人与实验动物的体表面积比例计算 （一）人体表面积计算 人体表面积（m2） = 0.0061身高（cm）+0.0128体重(kg)0.1529

8、例：某人身高168cm，体重55kg，试计算其体表面积。解0.0061168+0.012855.0.1529=1.576m2中国人平均身高：男1.70m 女1.59m, 体重：男67.7kg 女59.6kg（二）动物体表面积计算A（体表面积，以m2计算）=KW（体重，以g计算）2/3 10000K值 人小鼠大鼠豚鼠家兔猫犬猴10.69.19.19.810.19.811.211.8 计算公式 A人/A动物B人/B动物A:体表面积（m2） B:药量 （重量） 人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表 小鼠(20g) 大鼠(200g) 豚鼠(400g) 家兔(

9、1.5kg) 猫(2.0kg) 猴(4.0kg) 狗(12kg) 人(70kg) 人(70kg) 0.00260.018 0.031 0.07 0.078 0.16 0.821.0 第四节第四节 实验动物采血方法实验动物采血方法 实验研究中，经常要采集实验动物的血液和尿液进行常规检查或某些生物化学分析，故必须掌握血液和尿液的正确采集、分离和保存的操作技术。采血量 采血部位 动物品种 最少量血 尾静脉耳静脉眼底静脉丛腹壁静脉冠、脚蹼皮下静脉 大鼠、小鼠兔、犬、猫、猪、绵羊兔、大鼠、小鼠青蛙、蟾蜍 鸡、鸭、鹅 最中量血 后肢外侧皮下小隐静脉前肢内侧皮下头静脉耳中央动脉颈静脉心脏断头翼下静脉颈动脉

10、犬、猴、猫犬、猴、猫兔犬、猫、兔豚鼠、大鼠、小鼠大鼠、小鼠鸡、鸭、鸽、鹅鸡、鸭、鸽、鹅 最大量血 股动脉、颈动脉心脏颈静脉 摘眼球 犬、猴、猫、兔犬、猴、猫、兔马、牛、山羊、绵羊 大鼠、小鼠 不同动物采血部位与采血量的关系 常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量 动物品种 最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠 0.20.3大 鼠12豚 鼠510家 兔1040犬50200猴1560一、大、小鼠采血法 1. 剪尾采血 2. 鼠尾刺血法 每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.30.5ml。 3. 眼眶静脉丛采血 体重2025g的小鼠每次可采血 0.20.3m

11、l；体重200300g大鼠每次可采血0.51.0ml。内眼角 4. 心脏采血 5. 颈动静脉采血6、摘眼球采血二、家兔采血法 1. 耳静脉采血2. 耳中央动脉采血3. 心脏采血4. 后肢胫部皮下静脉采血5. 股静脉、颈静脉取血 三、采血注意事项 1、采血室内光线充足，温度适宜。 2、采血部位采血用具应消毒。 3、盛放血液的器具应清洁干燥。 4、如果血液需要抗凝应预先在盛放血液的容器内加入抗凝剂。 5、采血后应注意采血部位的止血、消毒。四、几种常用血液抗凝剂的配制及使用力法 （一）肝素 （二）草酸盐合剂 （三）氟化钠（一）肝素 1、作用机理 抑制凝血酶的活力，阻止血小板凝聚 2、使用方法 （1）

12、纯品肝素10mg能抗凝65ml125ml的血液。 （2）用1%肝素生理盐水溶液制作肝素试管。 （3）动物全身抗凝 大鼠 3.0mg/kg w 家兔10mg/kg w 犬 5.0mg/kg w 肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可采用素。（二）草酸盐合剂 配制：称取草酸铵1.2g、草酸钾0.8g、福尔马林0.1ml，用蒸馏水加至100ml。 1、作用机理 能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子 2、使用方法 制作草酸盐合剂试管 草酸盐合剂不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。（三）氟化钠 作用机理：使钙沉淀而达到抗凝目的。 使用方法：每ml血加6mg氟化钠可达到抗凝目的。 若为防止糖酵解或防止微生物繁殖，则每ml血需加0.5ml福尔马林即能达到保存的目的。氟化钠和草酸一样可以五、血清与血浆的制备 （一）血清的分离与制备 取血后，应尽快地分离血清否则易溶血。 过程： 血液静置1h 放置4 过夜 1500rpm离心30分钟 吸取上部清亮的的血清 冷冻保存 （二）血浆的制备 采血时，使用肝素抗凝，充分混合，以3000rpm4000