人民教育出版生物选修三11《DN重组技术的基本工具》随堂练习

1、1.下列对基因工程的理解，正确的是()可按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的工程对基因进行人为删减或增添某些碱基是体外进行的人为的基因重组在实验室内，利用相关的酶和原料合成DNA主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术在DNA分子水平上进行操作一旦成功，便可遗传ABC D解析：选C。基因工程是对现有基因的剪切和重组，并没有对基因进行改造，也不是要合成新的DNA。2.(2012·成都七中高二检测)下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，正确的是()A限制性内切酶只能识别6个或8个脱氧核苷酸组成的序列B限制性内切酶的活性受温度的影响C限制性内切酶能识别和切割RNAD限制性内切酶只能从原核

2、生物中提取解析：选B。限制性内切酶能够识别并切割双链DNA上特定的核苷酸序列，多数限制性内切酶能够识别6个核苷酸组成的序列，少数可以识别4、5或者8个核苷酸组成的序列。限制性内切酶的化学本质是蛋白质，活性受温度影响。限制性内切酶主要从原核生物中获得，同时在某些真核生物细胞内也存在，例如酵母菌3.下列关于DNA连接酶的理解正确的是()A其化学本质是蛋白质BDNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键C它不能被反复使用D在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶解析：选A。DNA连接酶的化学本质是蛋白质。它只可以恢复双链DNA片段间的磷酸二酯键，氢键是分子间的静电吸引力，不需要酶的催化形成。DN

3、A聚合酶只能将单个核苷酸加到已有DNA片段上，仅在DNA复制时使用。无论何种酶都是催化剂，不作为反应物，可被反复使用。4.基因工程的运输工具载体，必须具备的条件之一及理由是()A能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选解析：选A。本题考查载体必须具备的条件和理由，条件与理由必须相符。作为载体要携带目的基因进入受体细胞并使之表达，必须能够在宿主细胞内稳定地保存并大量复制，以便通过复制提供大量的目的基因，所以A项是正确的。载体要具有某些标

4、记基因，是为了判断目的基因是否进入了受体细胞，从而进行受体细胞的筛选。载体要具有多个限制酶切点，则是为了便于与外源基因连接。5.(2012·西安铁一中高二检测)质粒是基因工程中最常用的载体，它存在于许多细菌体内，某细菌质粒上的标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，如图所示，外源基因在质粒中可插入的位置有a、b、c点。某同学根据实验现象对其插入的位点进行分析，其中分析正确的是()实验推论实验现象在含青霉素培养基上生长情况在含四环素培养基上生长情况目的基因插入位置A能生长能生长aB不能生长能生长bC

5、能生长不能生长cD不能生长不能生长c解析：选B。a、b两处分别破坏了抗四环素基因、抗青霉素基因，则在含有四环素、青霉素的培养基上不能生长。6.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：(1)一个图1所示的质粒分子经Sma切割前后，分别含有_个游离的磷酸基团。(2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越_(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma切割，原因是_。(4)与只使用EcoR相比较，使用BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA优点在于可以防止_。(5)为了获取重组质粒，将切割

6、后的质粒与目的基因片段混合，并加入_酶(6)现使用BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，并经拼接获得的重组质粒进行再次酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1、2中标示的酶切位点及表所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。采用BamH和Hind酶切，得到_种DNA片段采用EcoR和Hind酶切，得到_种DNA片段。解析：(1)该质粒为环状DNA，经Sma切割前，不含有游离的磷酸基团，经Sma切割后形成平末端，含有2个游离的磷酸基团。(2)Sma识别的是CCCGGG序列，在C与G之间切割，Sma酶切位点越多，也就是CG碱基对越多，C与G之间的氢键(3个)比A与T之间的

7、氢键(2个)数量多，其含量越多，质粒的热稳定性越高。(3)据图1可知，Sma切割位点在抗生素抗性基因(标记基因)中，据图2可知，Sma切割位点在目的基因中，因此使用Sma切割会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因。(4)用同一种限制酶处理质粒和外源DNA，再用DNA连接酶连接时，往往会有三种连接形式：目的基因质粒、目的基因目的基因(环化)、质粒质粒(环化)，后两种是我们不需要的，因而要进行筛选。用两种限制酶处理质粒和外源DNA，因形成的末端不同可避免上述情况的发生(5)连接质粒与目的基因的工具酶是DNA连接酶(6)分析由BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，并经拼接获得的重组质粒，这两种酶的识别序列仍然完整存在，如再用BamH和Hind两种限制酶进行酶切时，可再度被切开，形成2种DNA片段；而EcoR 的识别序列在原质粒中存在并没有破坏，同时切下的目的基因中还存在1个EcoR的识别序列，因此在重组质粒中存在2个EcoR的识别序列，如用EcoR和Hind酶切，可得到3种DNA片段。答案：(1)0、2(2)高(3)Sma会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(5)DNA连接(6)231限制性核