细菌生理生化试验

1、实验一 细菌的单孢分离微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。 细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。一：细菌的培养特征包括：在固体培养基上观察菌落大小、形态、颜色（色

2、素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。1、琼脂平皿上的生长表现观察并记录不同的菌落：大小、形状、边缘、表面性状、隆起度、颜色、透明度、硬度、溶血等。2、观察琼脂斜面上的生长表现：菌苔的颜色及茂盛情况。3、观察半固体琼脂的生长现象：绒毛状、线状等。二：细菌的培养特征1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起 9.凸起 10.垫状

3、60;11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷发状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状 36.蹼

4、状 37.膜状实验二 细菌的生理生化试验实验九  细菌的生理生化试验 1  目的 1.1  了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理 1.2  掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法 2  原理 各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分

5、类鉴定中仍有很大作用。 3  材料 3.1  菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种 3.2  培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖） 3.3  试剂 ：40NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。 3.4

6、  器具：超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。4  流程：糖发酵试验V-P试验甲基红试验吲哚试验 5  步骤 (一)    糖类发酵试验 1 目的：了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法 2 原理: 3 材料 3.2菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种 3.

7、培养基 葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管   流程 发酵液试管标记接种培养观察记录 5  步骤                       5.1  试管标记             

8、60;                          图9-1 糖发酵产气     取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各        不产气； 产气 4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠

9、杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。                                              

10、0; 5.2  接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。 5.3  观察记录 与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“”表示。 （二）

11、0;乙酰甲基甲醇试验(VP试验) 1 目的 了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法 2 原理 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。 3 材料 3.1 菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus&#

12、160;subtilis）的斜面菌种 3.2 培养基 葡萄糖蛋白胨培养液的试管  流程 培养液试管标记接种培养观察记录 5 步骤 5.1  标记试管 取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 5.2  接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37恒温箱中，培养2448h。 5.3  观察记录 取出以上试管，振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名，分别加入35ml以上对应管中的培养液，再加入40NaOH溶液10

13、20滴，并用牙签挑入约0.51mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37“”“”表示）。 注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。 （三）  1 目的 了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法 2 原理 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 3 材料 3.1 菌种 同VP试验 3.2 培养基 同VP试验 4  流程 培养液指示剂

14、观察记录结果 5  步骤 “”或“”表示。 （四）吲哚试验 1 目的 掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法 2 原理 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。 3 材料 3.1菌种 测试菌株 3.2培养基 蛋白胨水培养基 3.3试剂 二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。  4流程 标记试管接种培养观察记录 5步骤 5.1  试管标记 取装有蛋白胨水培养液的试管5支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 5.2  接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第5管作空白对照