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文档简介

1、精选优质文档-倾情为你奉上 PH示差法测定火棘果花青素含量原理：花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物，广泛存在于植物中的水溶性天然色素。花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。对于一个给定的PH值，在花色苷的4种结构之间存在着平衡：蓝色的醌式（脱水）碱，红色的花烊正离子，无色的甲醇假碱和查尔酮。花色苷在PH值很低时，其溶液呈现最强的红色。随着PH值的增大，花色苷的颜色将褪至无色，最后在高PH值时变成紫色或蓝色。PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。因此在花青素最大

2、吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。原料与仪器原料：火棘果花青素提取液，乙醇95%（AR），盐酸仪器：PHs-3B型酸度计，紫外分光光度计实验步骤：1，火棘果的定性分析 取提取液稀释至一定的体积，用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH，观察提取液在不同PH下的颜色变化。对提取液进行200800nm全波长扫描，绘制光谱图PH1.02.0原液4.59.5溶液颜色2，测定波长的选择取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH（15:85）溶液稀释至一定体积，进行光谱扫描，确定最大吸收波长。紫外可见吸收光谱3，PH示差法中PH的选择 在选定PH时应考虑以下因素：在此两个PH处测定的花

3、青素的吸收值差异应是最显著的；单一PH的轻微变动，对花青素吸光值的影响是极小的；花青素在所处的两个PH下，应是相当稳定的。由于花青素只有在酸性介质中是稳定的，因此只测定PH小于7条件下花青素吸光值的变化。PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH为4.5时，花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。因此选择PH为1.0和4.5。4，平衡时间的确定 因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式，这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡，当PH改变时，动态平衡发生转移，总的趋势是PH降低时，平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动；PH升高时平衡向蓝色醌式移动。一定时间后达到一个新的平衡。因此提取

4、液用缓冲液稀释后，必须静置一段时间，等动态平衡处于稳定后，才能测定吸光值。花青素在缓冲液中的吸光度值与时间的变化关系（= nm）T(min)01020305080110PH1.0buffer A值PH4.5buffer A值结果表明，花青素在缓冲液中的吸光度值随时间变化，在PH1.0 基本稳定，在PH4.5时 基本稳定。所以综合考虑，选择平衡时间为 5，火棘果花青素含量的测定移取浓缩液2ml，用5%HCL-EtOH稀释、定容至100ml，分别移取10ml，用PH1.0和PH4.5的缓冲液稀释至100ml，平衡 min，在波长 处测定吸光值。根据Fuleki T经验公式花青素含量（mg/100g)=TO.D/(avE%1cm ×W ×10);TO.D=A×DV×VF;A=A(pH1.0)-A(pH4

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