几种常用的染色方法

1、几种常用的几种常用的染色方法染色方法1美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经12min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。2革兰氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经 12min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用 13min，水洗。（3）加 95酒精于抹片上脱色，约 30s-1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染 10-30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加

2、热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经 35min，水洗。（2）用 3盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约 1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色 1min，水洗，用 1美蓝染色液复染约 20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。4瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些， 或看情况补充滴加， 经 13min， 加约与染液等量的中性蒸馏水或 PBS液，

3、轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约 3min 左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2） 另一方法抹片自然干燥后， 按涂抹点大小， 盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色 3-5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。5姬姆萨染色法（1）于 5ml 新煮过的中性蒸馏水中滴加 510 滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸

4、中，染色 30min，或者染色数小时至 24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。6克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制美蓝溶液美蓝1g，95酒精 10ml，蒸馏水 100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。碱性复红溶液碱性复红0.03g，95酒精 1ml，蒸馏水 99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。水洗，以碱性复红溶液复染1530s。水洗后、吸干、镜检。染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。7.结晶紫福尔马林荚膜染色法（1）染色配制结晶紫福尔马林染色液结晶紫

5、 10g，福尔马林溶液 100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。碱性复红溶液见前：克利特氏荚膜染色法（2）染色法涂片用结晶紫福尔马林染色液染色 0.51min。水洗后，以碱性复红染色液复染1530s。水洗、吸干、镜检。染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。8.番红染色液荚膜染色法（1）染液配制番红（或沙黄）0.7g，95酒精 20ml，蒸馏水 15ml。将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。（2）染色法涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。水洗、吸干、镜检。染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。9.赫斯氏荚膜染色法（1）染色液配制龙胆紫酒精溶液龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水

6、95ml。硫酸铜水溶液硫酸铜20g，蒸馏水 100ml。（2）染色法涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。10安沙尼氏荚膜染色法（1）染色液配制1结晶紫水溶液。20硫酸铜水溶液。（2）染色法将涂片在空气中自然干燥。以1结晶紫水溶液染色2min（不必加热），再以20硫酸铜代水冲洗染液。吸干、镜检。染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。11苗列尔氏芽孢染色法（1）染色液配制媒染液5铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml）染色液石炭酸复红液脱色液2硫酸液（纯硫酸2ml，

7、加蒸馏水98ml）复染液 碱性美蓝（2）染色法涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色10min，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染色（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱色剂脱色10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。结果：芽孢呈红色，菌体呈蓝色。12孔雀绿沙黄芽孢染色法（1）染色液5孔雀绿液，0.5沙黄液。（2）染色法涂片火焰固定，加 5孔雀绿液微微加温染色 30s1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染 30s，水洗，干燥后镜检。结果：芽孢呈绿色，菌体其它部分呈淡红色。13李富逊氏鞭毛染色法（1）染色液配制5钾明矾水溶液 10ml，20鞣酸水溶液 10ml，1碱

8、性复红酒杯精溶液 10ml。将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存 1 周，复染液可用下列染液：美蓝 0.1g，硼砂 0.5g，蒸馏水 100ml。（2）染色法所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。菌液最好用1016h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自

9、成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。将上述染液滴加于涂片上，染1015min，染色时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染色。轻轻地水洗12min。在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红色。如需复染色， 则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后， 染色10min， 用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝色，鞭毛呈红色。良好的鞭毛染色涂片，应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。14过碘酸锡夫氏真菌染色法（1） 染色液配制甲液：1过碘酸液乙液： 碱性复红0.1g，95乙醇 5ml，蒸馏水 95ml丙液：亚硫酸氢锌 1g，酒石酸 0.5g，蒸馏水 100ml丁液：1.2

10、2饱和苦味酸液（2）染色法将标本在甲液中染10min，水洗后再用乙液染23min，置丙液中染3040min，至玻片呈淡红色为合适，水洗1min，再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明，树胶封固后镜检。结果：真菌组织染色鲜红色。15中国蓝真菌染色法（1）染色液纯石炭酸 20ml，乳酸 20ml，甘油 40ml，蒸馏水 20ml。将上述成分混合，加温溶解后加入中国蓝 0.05g，混合振荡即成。（2）染色法先将染色液加在载玻片上，将培养物被检样放在玻片上的染色液中，涂匀后覆盖盖玻片，微加温后镜检。16黑色素螺旋体染色法（1）染色液配制黑色素 5g，蒸馏水 50ml。混合加热使其溶解，在溶液中