喉咽清口服液的质量标准的研究

1、喉咽清口服液的质量标准的研究李 果湖南师范大学医学院 2003级药学系摘要：本标准分别从性状、鉴别、检查及含量测定方面进行系统研究,分别进行考查,同时建立并完善控制喉咽清口服液质量的质量标准。性状是考察其外观性状，鉴别则是根据处方中所含药味特征（如：土牛膝、车前草、天名精等）的成分进行鉴别，检查根据用药安全选择了重金属及砷盐的检查，含量测定项则是运用薄层扫描法（采用CS-930薄层扫描仪及CD-60薄层扫描仪，薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，展开剂：环己烷氯仿醋酸乙酯（2058），显色剂：10%硫酸乙醇溶液，显色条件：105加热至斑点显色清晰）根据测定君药土牛膝中的齐墩

2、果酸的含量进行含量项的质量控制并进行方法学研究。经过试验研究证明可行,并能控制本品质量,故建立本含量质量标准。关键词：喉咽清口服液；质量标准；性状；鉴别；检查；含量测定ABSTRACT The which controls the quality of HouyanqingKoufuye in character, identification, check and measuring the contents was established. The experiment of character inspects the character of exterior. The experim

3、ent of identification is using the ingredient which is characteristic. For example, Achyranthes aspera L, Plantago asiatica L, Carpesium and so on. The experiments of check include the check of heavy metal and arsenic salt. The purpose of measuring the contents using the method of TLCS which based o

4、n measuring the contents of radix astragali in monarch drug in a prescription astragalus root is controlling the quality. Following is the TLCS conditions. Instrument: thin layer scanner CS-930 and CD-60.Thin-layer plate: the thin-layer plate of silica gel G using the chemical bond of 0.3 percent so

5、dium carboxymethyl cellulose. Developing agent: normal cyclohexane-trichloromethane - glacial acetic acid(8:1:1). Visualization reagent: 10 percent solution of sulphuric acid ethyl alcohol. The condition of appearance color:105centidegreeheating until the spot appears.According to the characters in

6、the Achyranthes aspera oleanolic acid content of the items in the quality control and research methods In addition, we conduct the research of methodology. This quality standard is feasible by above-mentioned experiments.KEY WORDS HouyanqingKoufuye; quality standard; character; identification; check

7、; measuring the contents第一章 引 言1喉咽清口服液的药理作用喉咽清口服液是我国目前用于内科实火证、耳鼻喉科喉痹类非处方药药品药，其服用安全，无毒副作用，能清热解毒，利咽止痛。用于肺胃实热所致的咽部肿痛，发热，口渴，便秘，以及扁桃体炎、急性咽炎见于上述证候者。特别是近几年临床研究微波凝固加喉咽清口服液治疗肥厚性咽炎，取得了较好的疗效1。对于喉咽清片的质量控制方法已收载于中成药地方标准上升国家标准部分。为了促进其吸收，目前将片剂改为口服液。按照WHO对传统医药必须“安全、有效、稳定、均一、经济”的要求，尽快对中成药的原料、半成品、成品制定明确的定性、定量标准，以适应国内外

8、市场的要求，确保我国中成药产品高标准、高品质、高档次地进入国际市场。本文分别从性状、鉴别、检查及含量测定四个方面对喉咽清口服液进行了质量标准的研究。建立了切实可行的质量标准。2质量研究工作有关的文献资料2.1土牛膝（又名杜牛膝、倒扣草根、粗毛牛膝）本品为植物苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、牛膝A.bidentata B1.野生种的根。产于福建、广西广东、四川、云南、河南等地。秋季采挖，洗净，晒干，生用，亦用鲜品。药化含皂甙（甙元为齐墩果酸）、钾盐。药理（1）煎剂在人体体内显抗肿瘤的治疗作用。（2）粗毛牛膝剂在动物体内能中和白喉杆菌毒素，并有预防白喉的作用。（3）牛膝

9、煎剂或醇提取液对醉犬、猎、兔作静脉注射，均有短暂的降压作用。（4）牛膝煎剂静脉注身于麻醉家兔，有轻微利尿作用，腹腔注身于已用醋酸产生扭转的小鼠呈一定的止痛作用。（5）牛膝煎剂对动物离体肠管有轻度抑制作用。（6）牛膝煎剂和流浸膏对家兔离体子宫不论已孕、末孕都能使之收缩；对收缩无力的小鼠离体子宫则有加强其收缩的作用。药性苦、凉。归肺、脾、肝、膀胱经。药效败毒抗癌、逐淤除痹，消炎利尿。药用（1）败毒抗癌，用于癌瘤积毒，鼻咽癌：土牛膝、野麦、汉防已各30克均用鲜品，水煎3次分服另取灯心草捣碎口含。同时用垂盆草捣烂。继续煺月，可获近期痊愈。宜于未分化癌。食管癌：土牛膝、丹参、黄芪、沙参、党参各9克，黄芩

10、、川贝、鸡内金各6克，金银花15克，白英30克水煎3次分服，每次送去南白药2克。可连服半年，能使症状消失，饭量增加。（2）逐淤除痹，用于淤阻痹痛，淤阻经闭：土牛膝、马鞭草各30克均用鲜品，水煎，调酒服。风湿痹痛：土牛膝12克，续断、木瓜各9克水煎3次分服。（3）消炎利尿，用于炎症尿淋，小儿肺炎：鲜土牛膝500克，捣烂，加适量开水，绞取汁500毫升，隔水蒸0.5小时。1-2岁小儿每次服15毫升；3-5岁20-35毫升，隔4-6小时1次，日2-3次，亦宜于麻疹并发肺炎、流感肺炎及支气管肺炎等。尿淋涩痛：土牛膝、滑石各12克，冬葵子9克水煎3次分服。药量煎剂：9-15克（鲜品倍量，鲜杆同）。外用：适

11、量。孕妇忌用。【别名】倒扣草、倒扣簕、倒钩草、粗毛牛膝、鸡掇鼻、鸡骨癀【来源】为苋科牛膝属植物土牛膝Achyranthes aspera L.，以根（土牛膝）或全草（倒扣草）入药。夏、秋才收，除去茎叶，将根晒干，即为土牛膝；若将全草晒干则为倒扣草。【源形态】一年生或二年生草本，高达1米。茎直立或披散，坚实，具4棱，有分枝，被柔毛，大如膝状，入秋后地上部分变成暗红色。单叶对生，具柄。夏、秋间开淡绿色小花，穗状花序顶生，直立。胞果卵形，长约3毫米。【性味归经】微苦，凉。【功能主治】清热，解毒，利尿。用于感冒发热，扁桃体炎，白喉，流行性腮腺炎，疟疾，风湿性关节炎，泌尿系结石，肾炎水肿。【用法用量】根

12、、全草0.51两。【备注】（1）各地以土牛膝（杜牛膝）为名的异物同名品甚多。牛膝属植物的土牛膝除前种外，尚有：尖叶牛膝Achyranthes japonica Nakai. 柳叶牛膝 Achyranthes longifclia Makino 。红褐粗毛牛膝 Achyranthes aspera L. var. rubrofusca Hook. f.，钝头牛膝 Achyranthes aspera L. var. indica L.A. obtusifolia Lam.及各地野生的牛膝 Achyranthes bidentata Blume等。其有效成分齐墩果酸结构式：2.2马兰草：本品为菊科

13、马兰的全草,马兰草为菊科马兰的全草,异名:紫菊，竹节草，鱼鳅串，灯盏细辛,生长于路边，田野，山坡,全国大部分有分布 味辛平无毒，有凉血，清热，利湿，解毒的功效。疏风，清热解表,可用于治风热外感。马兰草清热利湿,并能导湿热渗于下焦,对湿热下注的痢疾,有明显疗效。2.3车前草：本品为车前科植物车前Plantago asiatica L.或平车前Plantago depressa Willd.的干燥全草。夏季采挖，除去泥沙，晒干。 药化熊果酸、糖类、黄酮类、三萜皂苷类成分【性状】 车前 根丛生，须状。叶基生，具长柄；叶片皱缩，展平后呈卵状椭圆 形或宽卵形，长613cm，宽2.58cm；表面灰绿色或污

14、绿色，具明显弧形脉57条；先端钝或短尖，基部宽楔形，全缘或有不规则波状浅齿。穗状花序数条，花茎长。蒴果盖裂，萼宿存。气微香，味微苦。 平车前 主根直而长。叶刀较狭，长椭圆形或椭圆状披针形，长514cm,宽23cm。 【鉴别】 本品叶的表面观：车前 上、下表皮细胞类长方形，上表皮细胞具角质线纹。气孔不定式，副卫细胞34个。腺毛头部2细胞，椭圆形，柄单细胞。非腺毛少见，25细胞，长100320m，壁稍厚，微具疣状突起。平车前 非腺毛37细胞，长350900m。 【检查】 总灰分 不得过16.0（附录 K）。 【炮制】 除去杂质，洗净，切段，晒干。 【性味与归经】 甘，寒。归肝、肾、肺、小肠经。 【

15、功能与主治】 清热利尿，祛痰，凉血，解毒。用于水肿尿少，热淋涩痛，暑湿泻痢，痰热咳嗽，吐血衄血，痈肿疮毒。 【用法与用量】 930g；鲜品3060g,煎服或捣汁服。外用鲜品适量，捣敷患处。 【贮藏】 置通风干燥处。2.4天名精(CarpesiumabrotanoidesL.)为菊科植物,又名野烟，野叶子烟，鹤虱，臭草，癞蛤蟆草等，其带根全草在苗族，白族，土家族等少数民族供药用,其味苦,性辛,凉,有小毒，具有清热解毒,止咳平喘,散阏止痛等功效,主治小儿肺炎，疟疾，腹泻，疮痈肿毒，跌打损伤，咳喘痰多，痢疾，胸肋疼痛，毒蛇咬伤等症，其果实为中药的鹤虱，始载于5神农本草经6,列为上品"其味苦

16、，辛,性平"具有驱虫功能,主治蛔虫病，绦虫病，蛲虫病，虫积腹痛第二章 仪器与试药2.1仪器：CS-930薄层扫描仪及CD-60薄层扫描仪2.2试药土牛膝对照药材：中国药品生物制品检定所提供马兰草对照药材：中国药品生物制品检定所提供天名精对照药材：中国药品生物制品检定所提供齐墩果酸对照品：中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用批号110709-200304。去离子水，化学试剂均分析纯，喉咽清口服液由湖南时代阳光有限公司零陵制药厂制备第三章 方法与结果3质量研究工作的试验资料3.1性状研究根据样品外观性状描述。本品为棕褐色的液体；味甜、微苦，具清凉感3.2鉴别研究3.2.1土牛膝的薄层

17、鉴别研究取喉咽清口服液20ml，置分液漏斗中，加乙醚振摇提取2次，每次5ml，弃去乙醚液，水溶液用正丁醇10ml振摇提取，分取正丁醇液，浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取土牛膝对照药材5g，加水适量，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，放冷，同法制成对照药材溶液。再取除土牛膝外的其余处方量药材，按制备工艺的方法制成阴性样品，按上述方法制成缺土牛膝的阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯乙醇（41）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸乙醇溶液（取香草醛3g，加乙醇100ml，再加硫酸1ml，摇

18、匀），在105烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺土牛膝的阴性溶液无干扰，故收入质量标准正文中。结果见照片。1阴性2土牛膝对照药材3样品（批号：060414）4样品（批号：060414）图1土牛膝薄层鉴别 3.2.2马兰草的薄层鉴别研究按原标准中展开剂石油醚（60-90）-苯-醋酸乙酯-甲酸-水（10101011）进行试验，分离效果好，但因苯毒性太大，故对展开剂进行了修改，将苯换成毒性相对较小的甲苯分离效果同样好，试验如下:取喉咽清口服液20ml，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取

19、马兰草对照药材3g，加水适量，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，放冷，同法制成对照药材溶液。再取除马兰草外的其余处方量药材，按制备工艺的方法制成阴性样品，按上述方法制成缺马兰草的阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90）-甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（10101011）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。缺马兰草的阴性溶液无干扰，故收入质量标准正文中。结果见彩照。1阴性2马兰草对照药材3样品（批

20、号：060414）4样品（批号：060414）图2马兰草薄层鉴别3.2.3天名精的薄层鉴别研究同样将原标准中展开剂苯换成甲苯进行试验，分离效果好，试验如下:取喉咽清口服液20ml，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取天名精对照药材1g，加水适量，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，放冷，同法制成对照药材溶液。再取除马兰草外的其余处方量药材，按制备工艺的方法制成阴性样品，按上述方法制成缺天名精的阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-

21、乙醇（91）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液（取香草醛3g，加乙醇100ml，再加硫酸2ml，摇匀），在105烘约7分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺天名精的阴性溶液无干扰，故收入质量标准正文中。结果见彩照。1阴性2天名精对照药材3样品（批号：060414）4样品（批号：060414）图3天名精薄层鉴别 3.3检查研究3.3.1依照中国药典2005版进行相对密度检查3.3.2 依照中国药典2005版PH值3.4含量测定研究本品君药为土牛膝，主含齐墩果酸，含量测定用的齐墩果酸对照品(由中检所提供用于测含量 )。经参照中国药典2005版一部齐墩果酸

22、含量测定方法，采用TLCS法测定本品中黄芪甲苷的含量，并进行方法学研究。按规定本品含齐墩果酸（C10H48O8），不得少于。方法学考察结果表明，其方法可行，含量方法学考察试验及结果如下：层析条件及扫描条件选择薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板展开剂：将原片剂标准中的氯仿换成毒性相对较小的二氯甲烷：环己烷二氯甲烷醋酸乙酯（2058）显色剂：10%硫酸乙醇溶液显色条件：105烘57分钟至斑点显色清晰供试品溶液的制备精密量取本品25ml，置分液漏斗中，用正丁醇提取6次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇30ml与盐酸3ml使溶解，置水浴上加热回流1小时，提取液回收乙醇至

23、无醇味，加水30ml，移至分液漏斗中，用石油醚（60-90）振摇提取6次，每次20ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解，转移至5ml量瓶中，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品约5.00mg置10ml量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度即得（每1ml中含0.500mg）。3.4.5测定法照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录VI B）试验，精密吸取上述供试品溶液3l与6l，对照品溶液2l与4l，分别交叉点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷二氯甲烷醋酸乙酯（2058）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇

24、溶液，在105烘57分钟，至斑点显色清晰，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板,周围用胶布固定, 照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录VI B）进行扫描,波长:S=520nm,R=700nm,测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值。1，2供试品溶液4l3，4对照品溶液3l5，6供试品溶液2l7，8对照品溶液6l图4喉咽清口服液含量测定3.4.6线性关系考察精密吸取浓度为0.500 mg/ml的齐墩果酸对照品溶液1、2、3、4、6、7l，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述色谱条件扫描测定，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，见图2.5，回归方程为：y=2186.8x+113.6

25、6，r=0.9999。结果见表2.1，齐墩果酸的浓度在0.5083.556g范围内具良好的线性关系。表2.1 线性关系考察结果表浓度（g）0.5081.0161.5242.0323.0483.556峰面积值1226.5522344.6343428.1574549.0366817.2417866.3153.4.7精密度试验取同一份供试品溶液5l,点于同一硅胶G薄层板上5次,按上述色谱条件进行测定同板精密度;再取同一份供试品溶液,分别点于不同的五块硅胶G薄层板上,按上述色谱条件测定异板精密度。其结果见表2.2。表2.2 精密度试验结果表同板峰面积3525.9963445.4643535.63135

26、56.1993497.364RSD（%）1.24异板含量（mg/支）0.013860.014240.013740.013770.01326RSD（%）2.78结果表明，本法精密度好。3.4.8稳定性试验按上述色谱条件进行测定,从显色后开始,对同一斑点每隔30分钟扫描一次，结果见表2.3。表2.3 稳定性试验结果时间（min）0306090120峰面积3380.5253468.7273455.0223468.6933461.579RSD（%）1.09结果表明，测定斑点在显色后120分钟内，峰面积基本稳定。3.4.9重现性试验取同一批样品（040410批）,按上述含量测定方法测定5次，结果见表2.

27、6。表2.4 重现性试验结果表含量（mg/支）0.013280.014890.013920.014140.01435RSD（%）4.18结果表明：本法重复性较好，平均含量为0.01412mg/支，即0.01412mg/10ml。3.4.10回收率试验精密量取已知含量0.01412mg/10ml（0.01412mg/支，批号：040410）供试品约100ml,分别精密加入齐墩果酸对照品溶液（0.00164mg/ml）80ml，即0.805mg。按含量测定项下的方法测定含量，结果见表2.7。表2.7 回收率测定结果表编号取样量（ml）样品中齐墩果酸含量（mg）添加齐墩果酸量（mg）实测齐墩果酸总量

28、（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）199.210.14010.13120.267398.5397.630.92298.710.13940.13120.264797.82399.380.14030.13120.262196.54499.620.14070.13120.263496.87598.470.13900.13120.265998.41结果表明，本方法加样回收率好（样品点样量均为1.5g，均在线性范围以内）。3.4.11样品的含量测定按拟定的含量测定方法测定十批样品中齐墩果酸的含量，结果见表2.8。表2.8样品含量测定结果表批号060410060412060414060416

29、060601含量（mg/支）0.0230.0250.0230.0240.024批号060603060605061122061124061126含量（mg/支）0.0270.0280.0240.0250.027上述十批样品含量均大于0.01412mg/支，规定本品中黄芪甲苷含量不得少于0.01412mg/支。3.4.12药材的含量测定取土牛膝粗粉1.5g,按上述含量测定方法,测定三批药材中齐墩果酸的含量，结果见表2.9。表2.9 药材含量测定结果表编号123含量（%）0.0400.0410.046上述结果表明，三批药材含量结果均符合中国药典规定（不少于0.040%）。第四章 讨论建立分别从性状、

30、鉴别、检查及含量测定方面来控制喉咽清口服液质量的质量标准。性状是考察其外观性状，鉴别则是根据所含特征药味（如：土牛膝、马兰草、天名精等）成分进行鉴别，检查选择了相对密度及PH值的检查，含量测定项则是运用薄层扫描法根据测定君药土牛膝中的齐墩果酸的含量进行含量项的质量控制。经过试验证明本质量标准具有可行性。鉴别项中我们尝试将苯换成毒性相对较低的甲苯，结果有轻微乳化，过一段时间后乳化层减少；并把含量测定项中三氯甲烷更换成毒性较低的二氯甲烷，效果较理想。此外，研究表明，中药土牛膝中的齐墩果酸有护肝、解肝毒，抗胃溃疡，降糖、降脂，对心血管，抗癌等作用，是土牛膝的重要生理活性成分，因此齐墩果酸常作为土牛膝

31、的定性定量指标。在含量测定项下，我们还想做进一步地摸索，以寻求一种更科学、更合理的方法。目前，常用的定量测定土牛膝中齐墩果酸的方法有薄层扫描法、高效液相色谱法（一般采用反相色谱，但检测方式有蒸发光散射法（ELSD）和紫外法（UV），还有报道使用、薄层色谱-分光光度法、比色法、紫外分光光度法，2005年版中国药典采用薄层扫描法进行测定。本课题本来计划在测定含量项下主采用薄层扫描法并对高效液相色谱法的可行性进行摸索。但由于实习时间有限、成药中成分并存分离不开使得在目前运用其他方法进行含量测定的难度大大加大等等原因，对于喉咽清口服液的含量测定项，我们仍采用的是双波长薄层扫描法。有机会有条件的话，我们

32、应该还将继续探索其齐墩果酸的含量测定方法，为今后土牛膝及其复方制剂中的齐墩果酸含量测定提供依据。结 论采用TLC法可鉴别出与土牛膝、马兰草、天名精对应的斑点；采用双波长薄层扫描法测定齐墩果酸的含量，齐墩果酸在0.5083.556g范围内具良好的线性关系（r = 0. 9999）。平均回收率为97.63，RSD=0.92（n=5）。所建立的质量标准简便可行、重复性好，可以用来评价喉咽清口服液的质量。参考文献1邓云,陶自珍,黄世凡等.微波凝固加喉咽清口服液治疗肥厚性咽炎J中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志2003,(01):39-402陈发奎.常用中草药有效成分含量测定M.北京:人民卫生出版社,1997

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