ABI7900操作流程

1、ABI7900 操作流程I. 简易上机操作步骤1. 先开计算机，待开机后再将7900HT的电源打开。 2. 开启SDS 软件：双击计算机屏幕上7900软件的icon。 3. 当软件开启之后会出现窗口，窗口下方为状态显示列。此时右下显示Disconnected。 4. 从“File”下选择“New”后会出现一窗口如下: Assay依实验设计选择：AssayApplicationsWhen to use thisAbsolute Quantification (Standard Curve)绝对定量建立标准曲线以得知样品之基因表现量For data collection and data anal

2、ysisRelative Quantification (CT)相对定量以Ct差异代表基因表现量相差之倍数上机for data collectionRelative Quantification (CT) study相对定量以Ct差异代表基因表现量相差之倍数For data analysis: analyze data from relative quantification £10 platesAllelic DiscriminationSNP genotypingFor Post read PCR signal and SNP genotyping analysisContain

3、er 选择适当的Plate，384-或96- well Plate。Template 点选已设好的Template；若无，则选择“Blank Template”。5. 在输入适当参数后，按OK即出现Plate Document如下图: 6. 按下Add Detector，开始设定Detectors（Detectors 代表样品的荧光种类），选择此次所需的Detector，并按下Copy to Plate Document将Detector加入Plate Document后则可按下Done。 如要设定新的Detector ，则可在Detector Manager中按下New选项以设定新的Dete

4、ctor：· Name：代表基因名称。 · Description：可输入简短叙述最多32个字母。 · Reporter：依实际所使用的荧光种类选择。 · Quencher：若为一般的TaqMan Probe选择TAMRA。若为MGB Probe或SYBR Green I 则选“None Fluorescent”。 按“OK”。重复以上步骤设定新的Detectors。设定完成后，点选“Copy to Plate Document”。之后，选Done，所设定的Detector即会加入Plate Document中。7. 圈选Plate Grid中有放样品的

5、well，在Set Up窗口下选定适当的Detector，然后点选Detector列中Use的框框，并在Task栏中选择其种类： Absolute Quantification：“NTC”，“Unknown”，“Standard”，若选择standard 则须输入样品量。· Relative Quantification： “Target”或“Endogenous control”。 · Allelic Discrimination：“Unknown”或 “NTC”。 8. 如要输入样品名称，可在Set Up此窗口编辑样品名称（相同名称者，软件即视为重复样品，会自动计算平均

6、值及标准偏差）。 9. 点选Instrument以设定PCR条件：进入PCR设定之窗口后，可直接更改温度及时间，已可利用“Add Cycle”、“Add Hold”、“Add Step”改变PCR的条件。 注：若样品为SYBR的反应请点选Add Dissociation Stage。10. 所有参数都设定完成后，须先将Plate Document存盘：File menu下点选Save As，输入文件名， File of type点选ABI PRISM SDS Single Plate (*.sds)。 注：若此Plate Document常用，可将其存成“Template”：File menu

7、下点选Save As，输入文件名， File of type点选SDS Template (*.sdt) 格式。11. 在Plate Document中，点选“Instrument”tab，按下Open/Close按键将Instrument Tray从机器送出，将Plate放在Tray上方后，再按一次Open/Close将Plate送入7900。                      

8、;                           Open/Close将样品盘置入方向如下：12. 按” Start”即开始进行PCR及讯号收集。  II. Absolute Quantification 结果分析1. 当讯号收集完成请先确认Analysis Setting中Threshold及Baseline的

9、设定如下图: 可选择 ”Automatic Ct ”由软件来设定Threshold 及Baseline ；或可经 “Manual Ct”来决定Threshold 及Baseline 。2. 按下屏幕上绿色的箭号即开始进行分析，完成后如下图: 3. 上图为Amplification Plot。欲更改纵坐标的显示单位，请在纵坐标处点两下即可进行更改。欲更改Threshold，请将Y轴改成Log以方便找到Geometric phase。4. 欲观察不同形式的结果请点选屏幕上的功能键。 由左至右依序为：· System Raw Data Pane · Multicomponented Data Pane · Amplification P