非小细胞肺癌耐药相关基因表达对化疗的影响(正文)

1、非小细胞肺癌耐药相关基因表达对化疗的影响130021吉林省人民医院肿瘤科 郭洪斌 李惠娟 刘意 白晓龙 王娟 葛寒冰长春市工农大路1183号【摘要】目的 探讨非小细胞肺癌耐药相关基因表达对化疗的影响。方法 应用免疫组化SP 法检测化疗前肺癌组织标本中P-gp、GST-、Topo表达，应用NP方案进行化疗，观察患者的疗效，分析肺癌相关耐药基因与化疗疗效的关系。结果P-gp、GST-、Topo在NSCLC中的表达分别是61.0%、75.6%、68.3%，在鳞癌中的表达高于腺癌，在低分化性NSCLC中的表达高于中高分化的NSCLC。本组有效率39.0%，腺癌的有效率高于鳞癌，中高分化的NSCLC化疗

2、疗效高于低分化NSCLC。结论NSCLC耐药是多途径、多基因参与的过程；耐药相关因子阴性的NSCLC化疗有效率高于耐药相关因子阳性的NSCLC，耐药因子的检测对NSCLC的化疗疗效、预后的评估具有指导意义。关键词 非小细胞肺癌 多药耐药 P-糖蛋白 谷胱甘-S-转移酶- DNA拓扑异构酶 化疗Relationship between chemotherapy respond and expression of resistance related genes in Non-small Cell Lung Cancer Guo Hong-Bin，Li Hui-Juan, Liu Yi, Bai

3、Xiao-Long, Wang Juan Department of Oncology, The Peoples Hospital of Jilin Province, Changchun 130021,China Abstract Objective: To investigate the effect of expression of resistance related genes on chemotherapy respond in Non-small Cell Lung Cancer. Methods: Expression of P-glycoprotein(P-gp), Glut

4、athione S transferases-(GST-) and DNA-Topoisomerase(Topo) in Non-small Cell Lung Cancer tissue from untreated 41 cases was measured by immunohistochemistry technique. These patients were treated by Vinorelbine (NVB) 25mg/m2, Cisplatin (DDP) 60mg/ m2. Results: the positive rates of P-gp, GST-and Topo

5、 was 61.0%, 75.6%、68.3%，respectively. The expression of resistance related genes were more in squamous carcinoma compared with adenocarcinoma. In poorly differentiated NSCLC theses were more than in well or /and moderately differentiated NSCLC. Respond rate was 39.0%. Respond rate of adencarcinoma w

6、as more than squamous carcinoma. In NSCLC the respond rate was more in well or /and moderately than in poorly differentiated differentiated. Conclusion: Multidrug resistance of NSCLC is a process involved in polygenes and multiple pathways. The respond rate is more in negative of resistance related

7、genes compared with positive of resistance related genes. It is helpful to the judgment of chemotherapeutics effects and prognosis examination of resistance related genes in NSCLC. Key words Non-small cell lung cancer Multidrug resistance P-glycoprotein Glutathione S transferases- DNA-Topoisomerase

8、Chemotherapy 化疗是非小细胞肺癌（NSCLC）综合治疗手段之一，在恶性肿瘤的化疗过程中，肿瘤细胞产生多药耐药（multi-drugs resistance, MDR）是普遍存在的1、2,化疗失败的主要原因是MDR3。我们从2002年7月2003年12月对41例NSCLC 患者的P-gp（P-糖蛋白 P-glycoprotein）、GST-(谷胱甘-S-转移酶-，Glutathione S transferases-)、Topo(DNA拓扑异构酶，DNA-Topoisomerase)表达和化疗效果之间的关系进行了研究，结果如下。1.资料与方法1.1入选标准 年龄1872岁，经过病理证

9、实为NSCLC，全部病例是丧失或拒绝手术的a期初治患者, KPS70，预计生存期3个月，临床上有可供客观测量的指标（CT或X线），无严重的心、肝、肾功能障碍。1.2一般资料 入选患者41例，其中男24例，女17例，年龄28-70(58.8±11.4 中位年龄59.5)岁，腺癌24例(中高分化13例，低11例)，鳞癌17例 (中高分化9例，低分化8例)，标本来源于41例患者的支气管镜所取病理标本，均以石蜡包埋。1.3试剂 鼠抗人P-gp、GST-、Topo基因单克隆抗体购自北京中山生物有限公司，一抗为小鼠抗人耐药基因单克隆抗体，显色免疫组化应用SP法，二抗（SA-HRP）上标辣根过氧化

10、物酶，底物选择DAB。染色步骤按试剂盒说明进行。1.4方法 测定41例NSCLC的P-gp、GST-、Topo表达。应用NP方案化疗，盖诺（NVB）和顺铂（DDP）为连云港豪森制药有限公司产品。NVB25mg/m2第1、8d静脉滴注，DDP60mg/m2第12d静脉滴注,同时水化、支持对症治疗，21d为1周期，每例患者至完成3个周期。1.5判断标准 耐药因子阳性判定标准：细胞膜/或细胞浆、核呈黄色显色，为P-gp、GST-、Topo阳性，随机记数5个高倍视野(记数200个细胞)，按染色细胞数量及着色强度分为：，阳性细胞数1%；+，阳性细胞数1%50%；+，阳性细胞数50%75%；+，阳性细胞数

11、75%4。以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。疗效判定按WHO标准分为：完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）、进展（PD）。1.6统计学方法 应用x2检验。2.结果免疫组化检测显示P-gp、GST-主要表达在胞膜和/或胞浆，Topo主要表达在细胞核，三种耐药相关基因与病理类型及分化程度的关系见表-1。低分化NSCLC 与中高分化NSCLC 比较P-gp 、Topo差别有显著性意义（P-gp x2=7.99 P0.01， Topox2=5.73 0.05P 0.01）。P-gp、GST-和Topo在腺癌与鳞癌中的表达比较差别无显著性意义（P-gp：x2=1.11，p0.05

12、；GST-：x2=0.78，p0.05；Topo：x2=2.65，p0.05）。低分化腺癌 GST-和Topo表达与中高分化腺癌间差别具有显著性意义（GST- x2=3.93 0.05P 0.01 ，Topox2=4.67 0.05P 0.01 ）。 低分化鳞癌P-gp与中高分化间差别具有显著性意义（x2=6.03 0.05P 0.01）。化疗疗效见表-2。本组41例患者的有效率（RR%）为39.0%，腺癌和鳞癌、中高分化NSCLC 和低分化NSCLC、腺癌中的中高分化和低分化、鳞癌中的中高分化和低分化的有效率比较（x2=0.15、x2=2.46、x2=1.77、x2=0.66）差别无显著性意

13、义。化疗疗效与P-pg GST- Topo-的关系见表-3。3.讨论化疗是恶性肿瘤治疗的重要手段之一，肿瘤细胞一旦对一种化疗药物产生耐药，对其他许多结构不同、作用机制不同的化疗药物也产生耐药，即MDR5，NSCLC耐药机制复杂，由多种机制相互制约、相互作用产生。P-gp是一种双向泵，由ATP提供能量将药物泵出细胞而使细胞内药物浓度降低6。GST-是肿瘤细胞和正常组织中最常见的同功酶，与细胞内解毒密切相关，在许多耐药细胞系中较高水平表达7。Topo是DNA复制、转录必需的酶，化疗药物通过该酶与DNA双链形成复合物，引起DNA损伤，导致肿瘤细胞凋亡，当该酶减少、活性降低，复合物形成减少而产生耐药8

14、、9。本组P-gp、GST-、Topo在NSCLC中表达不同；不同类型NSCLC P-gp、GST-、Topo表达程度不同；同一类型的肺癌分化程度不同P-gp、GST-、Topo的表达程度也不同，低分化NSCLC P-gp Topo显著高于中高分化NSCLC（x2=7.99 P0.01，x2=5.73 0.05P 0.01）；低分化腺癌的GST-、Topo表达显著高于中高分化腺癌（x2=3.93 0.05P 0.01，x2=4.67 0.05P 0.01）；低分化鳞癌的P-gp表达显著高于中高分化鳞癌（x2=6.03 0.05P 0.01）。 耐药基因阴性的NSCLC化疗有效率69.2%，阳性

15、NSCLC有效率 25%（x2=21.98，P0.01）；耐药因子阴性腺癌化疗有效率60.7%，阳性腺癌化疗有效率29.6%差异高度显著（x2=6.75 P0.01）；药因子阴性鳞癌化疗有效率90.9%，药因子阳性腺癌化疗有效率20%差异高度显著（x2=18.86 P0.01）。化疗有效并不仅仅发生在耐药因子阴性的NSCLC，在耐药因子阳性的NSCLC也存在有效反应，但是耐药因子阴性化疗有效高于阳性，具有高度显著差异；从临床化疗看NSCLC有效率（RR%）为 39.0%，腺癌的RR 41.7%，鳞癌 35.3%1013，与不论耐药因子阴性还是阳性的病例数化疗有效率之和相同。总之，我们认为：NS

16、CLC耐药是多途径、多基因参与的过程；低分化NSCLC耐药相关基因表达高于高中分化NSCLC，耐药相关因子阴性的NSCLC化疗有效率高于耐药相关因子阳性的NSCLC，耐药因子的检测对NSCLC的化疗疗效、预后的评估具有指导意义。参考文献1Bellamy WT. Pglycoproteins and multidrug resistance. Ann Rev Pharmcol toxcol J.1996,36:161183.2Pastan I, Gottesman MM,Lovelace UK,et al. Aretrovirus carrying an MDR CDNA confers mul

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18、 for prediction of response to chemotherapy and prognoses in advanced ovarian carcinomaJ.J Natl Cancer Inst, 1995,87(16):12301237.5Biedler JI. Genetic aspects of multidrug resistance J. Cancer, 1992, 70(6suppl): 1799-1809.6Rothenberg M, Ling V. Multidrug resistance: molecular biology and clinical re

19、levance J. J Natl Cancer Inst, 1989, 81 (12): 907-910.7Daniel V. Glutathione-s-stransferases structre and regulation of expression J.Crit Rev Biochem Mol Biol, 1993,28(3):173-207.8Boldogh I, ramana CV,Chen ZP,et al. Regulation of expression of the DNA repair gene O6-methyguanime-DNA methyltransferas

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