针灸血清”对乳腺癌MCF

1、针灸血清”对乳腺癌MCF               作者：李岩 郭刚 李彬 史秀芳  【摘要】目的：观察针灸对乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：针灸刺激雌性Wistar大鼠双侧足三里、三阴交、内关穴，抽取大鼠“针灸血清”分别与MCF7细胞混合培养，分为电针组、艾灸组和对照组。MTT法检测细胞生长情况，72h后流式细胞技术检测细胞凋亡率及Fas表达率。结果：MCF7细胞Fas表达率明显增高，72h达57.70%；MCF7细胞生长受到明显抑制，12h、2

2、4h、72h抑制率分别达17.55%、24.71%和31.85%；作用72h后的细胞凋亡率分别为1.07%、8.72%、10.18%,与艾灸组相近，均明显高于对照组（P0.05）。结论：“针灸血清”作用于MCF7细胞可能通过增加Fas的表达率来诱导细胞凋亡。   【关键词】针刺灸法乳腺肿瘤细胞凋亡细胞周期   The effect of acupunctural and moxibustional therapy on the apoptosis of breast cell MCF7   【ABSTRACT】Objective:To

3、 observe the effect on the apoptosis of breast cancer cell MCF7 with acupunctural and moxibustional therapy.Methods:Zusanli and Sanyinjiao neiguan in both sides of female Wistar mice were acupunctured and moxibusted.MCF7 cell was cultirated with the serum.To detecte the cytoxicity with MTT,and detec

4、te the apoptosic rate and Fas expression rate with flow cytometry after 72 hours.Results:The Fas expression was obviously increased upto 57.70% after 72h.The proliferation of MCF7 was inhibited remarkably.The inhibition rate were 17.55%,24.71% and 31.85% after 12h,24h and 72h.The apoptosic rate were

5、 8.72% and 10.18% after 72h,remarkably higher than the control group(P0.05).Conclusion:Acupunctural and moxibustional serum could increase Fas expression rate to inhibit proliferation of MCF7 cell and induce its apoptosis.   【KEY WORDS】AcupunctureMoxibustionBreast NeoplasmsApoptosisCell cy

6、cle   乳腺癌在我国的发病率不断增高，寻找有效的治疗方法具有深远的意义1。针灸在一定程度上能抑制肿瘤的生长，对恶性肿瘤具有一定的治疗作用，可缓解临床症状，减轻放、化疗后的副反应，改善机体免疫功能，提高患者的生活质量。针灸腧穴而采集的“针灸血清”是近年来针灸研究中提出的一种新的研究思路和方法。本文通过应用针灸血清培养乳腺癌细胞MCF7，观察针灸对乳腺癌细胞凋亡情况及细胞周期的影响，为寻找针灸治疗乳腺癌的途径和方案以及为探讨针灸抑瘤机制提供线索。   1  材料与方法   1.1  材料  乳腺癌细胞株M

7、CF7由山东中医药大学细胞室提供。雌性Wistar大鼠30只，体重250g左右，由山东大学医学院动物实验室提供。RPMI1640购自美国GIBCO公司，新生小牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所，二甲基亚砜分析纯购自北京亚太精细化工公司，MTT购自SIGMA公司，Fas、异硫氢酸荧光素（FITC）标记的单克隆抗体IgG1及免疫阴性对照品IgG1FITC均为美国Pharmingen公司产品，由北京岳泰生物公司提供。FACScan型流式细胞仪为美国BD公司产品。   1.2  方法       &

8、#160;     2  结  果   2.1  针灸对细胞抑制率的影响  见表1。由表1可见，针灸大鼠血清对乳腺癌MCF7细胞的抑制率呈时间依赖性，电针组和艾灸组均能明显抑制MCF7细胞增殖（P0.05），但电针组的抑制率高于艾灸组（P0.05）。表1  3组血清在不同时间段对MCF7细胞的抑制率（略）2.2  针灸对细胞凋亡和细胞周期变化的影响  见图13，表2。各血清作用72h后，直方图中均可见G0/G1期峰前的亚二倍体峰即凋亡峰，代表凋亡细胞群，以峰值高低代表凋亡细胞

9、的比例。图1、2、3显示对照组、艾灸组和电针组的凋亡率分别为1.07%、8.72%、10.18%。由表2可以看出，各血清作用72h后，S期和G2/M期细胞数均明显减少（P0.05），对照组、艾灸组和电针组的凋亡率分别为1.07%、8.72%、10.18(P0.05)。针刺和艾灸都能抑制MCF7细胞增殖，且两者差异没有统计学意义（P0.05）。由表3可以看出，电针组和艾灸组大鼠血清对Fas的表达率明显高于对照组（P0.05），但电针组与艾灸组对Fas表达率的影响差异无统计学意义（P0.05）。表2  3组MCF7细胞血清作用72h后细胞周期变化（略）表3  3组血清作用72h

10、后MCF7细胞Fas表达3  讨  论   诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一种新的思路，而且治疗肿瘤的有效性主要表现在肿瘤细胞生长抑制和/或诱导凋亡2，3。本实验表明“针灸血清”能抑制乳腺癌MCF7细胞生长。“针灸血清”是近年来针灸研究中提出的一种新的研究方法，是指从针灸处理后的人或动物体上采集到的血清，作为效应物质加入到另一个反应系统中，同在体或离体器官组织、细胞或分子靶目标接触，通过它们的功能或形态学的改变，直接地观察针灸处理后的效应4，5。“针灸血清”研究方法可归纳为离体实验和在体实验两大类。本实验针灸大鼠血清离体作用于人的肿瘤细胞株，结果发现，针灸

11、刺激Wistar大鼠双侧足三里、三阴交、内关穴后的大鼠“针灸血清”能使MCF7细胞抑制率升高，说明可以抑制体外肿瘤细胞生长。与正常对照组比较，MCF7细胞S期和G2M期百分率均明显降低，说明针灸血清能影响乳腺癌MCF7细胞增殖，抑制其生长。细胞凋亡在肿瘤发生、发展、转化和治疗过程中具有重要意义，许多抗肿瘤药物是通过诱导细胞凋亡而发挥作用的。本实验研究显示，针灸刺激大鼠双侧足三里、三阴交、内关穴，此大鼠“针灸血清”能诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡。其机制可能是针灸腧穴后，通过某种内在的生理调节机制，引起血清中Fas的表达率增高，从而诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡，发挥抑制肿瘤的作用。针灸疗法能促使经络畅

12、通，气血调和，改善机体免疫功能，可产生不同程度的类药性作用。从这个角度讲，似可把针灸穴位比喻为“药物”，不具备药的外在形态却具有药的某种作用实质，这是针灸疗法最本质的特征之一。“针灸血清”可直接观察其功能或实验物形态学的改变，有利于拓宽针灸研究的领域，推动针灸作用及其机理研究，寻求一条治疗恶性肿瘤的独特道路。   参  考  文  献   1唐汉钧.乳腺癌的中医临床与实验研究J.中医药学刊，2003，21（2）：168172.   2Elsmer E Williamson EA Zangand C,et al.Novel the rapeutic approach ligands for PPARa and retinoid receptors induce apoptosos in bcl2 positive human breast cancer cellsJ.Breast Cancer Res Treat,200