第十一章 流式细胞技术与流式细胞仪习题

1、第十一章 流式细胞技术与流式细胞仪习题参考答案一、名词解释1流式细胞仪：是以激光为光源，集流体力学、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学和单克隆抗体等技术为一体的新型高科技仪器。2流式细胞术：应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。3狭缝扫描流式细胞仪：被检细胞直径大于激光光斑直径，当细胞通过光束时，细胞各部分被依次先后扫描，得到一维的细胞轮廓组方图，可计算出细胞直径大小、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息的流式细胞仪。4测量区：鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光

2、束垂直相交，相交点称为测量区。5. 样品流：将特异荧光染料染色的单细胞悬液放人样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动所形成的流束称为样品流。6鞘液流：流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕样品流的流束称为鞘液流。7侧向角散射： 侧向角散射是指与激光束正交900方向的散射光信号。8延迟时间：由细胞通过测量区到小水滴分离的时间大约为几十毫秒，这个时间称为延迟时间。9荧光灵敏度：以能检测到最少的异硫氰酸荧光素分子来表示，即微球上最少标有多少个FITC分子时刚好能被检测到，即为荧光灵敏度。10分选收获率：指被分出的细胞占原来溶液中该细胞

3、的百分比。11分选速度：分选速度指每秒可提取所要细胞的个数。12分选纯度：分选纯度指要分选的目的细胞占分选出细胞的百分比。13长通滤光片：能使特定波长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过的滤光片称为长通滤光片。14短通滤光片：与长通滤光片相反，特定波长以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回。15带通滤光片：带通滤光片允许一定波长范围内的光通过，一般滤光片上有两个数值，一个为允许通过波长的中心值，另一个为允许通过光波段的范围。如BP500/50表示其允许475nm525nm波长的光通过。16细胞自发荧光：细胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号，称为细胞自发荧光。17零分辨率的流式系统：一般

4、流式细胞仪的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数，不能对细胞形态以亚细胞形态进行分辨，所以称之为零分辨率的流式系统。 二、选择题【A型题】1B 2B 3B 4A 5C 6C 7A8A 9C 10B 11C 12A 13D 14E 15D 16C 17A 18E 19A 20D 21B 22E 23C 24B 25E 26D 27B 28E 29A 【X型题】1ABCE 2ACE 3ABCD 4ABCDE 5AD 6BCDE 7AD 8AC 9ABCDE 10ACE11ABC 12ABE 13BC 14BD 15ABD 16CE 17CDE 18BCD

5、E 19ABCD 20ABCD21ABCE 22ABDE 23ABCD三、简答题1简述流式细胞仪生物学颗粒分析原理。答：经特异荧光染料染色后的样品沿流动室的轴心向下流动，流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液的鞘液流，鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，与水平方向的激光束垂直相交。染色的细胞受激光照射后发出荧光，这些信号分别被光电倍增管接收，经过计算机储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性质等物理和生化指标。2简述流式细胞仪细胞分选原理。答：当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以

6、特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内，不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的。3流式细胞仪依据什么进行分类? 各类型有什么特点?答：流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和科研型。临床型只有分析功能，没有分选功能，仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。科研型既有分析功能又有分选功能，可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并可将单个或指定个数的细胞分选到特定的容器里，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究。流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞

7、仪和狭缝扫描流式细胞仪。前者的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数，不能对细胞形态和亚细胞形态进行分辨。狭缝扫描流式细胞仪是一种高分辨率的检测仪器，被检细胞直径大于激光光斑直径，细胞通过光束时各部分被依次扫描，根据荧光信号的先后，就可得到一维的细胞轮廓组方图，可计算出细胞直径大小、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息。4流式细胞仪主要应用在哪些领域？答：流式细胞仪主要有下面的应用领域：免疫学、血液学、细胞生物学、肿瘤学、AIDS病检测、自身免疫性疾病相关HLA抗原的分析和药物学。5流式细胞仪的基本结构由哪几部分组成？答：流式细胞仪的结构可分为流动

8、室及液流驱动系统，激光光源及光束成形系统，光学系统，信号检测与存贮、显示、分析系统，细胞分选系统等五个部分。6简述流式细胞仪的液流系统的功能。答：流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环包。鞘液流是一种稳定流动的液体，操作人员无法随意改变其流动的速度，样品流在鞘流的环包下形成流体动力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。7简述流式细胞仪的流动室的作用。答：流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个孔径为430m×180m的长方形孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，这种流动室的光学特性良好，流速较慢，因而细

9、胞受照时间长，可收集的细胞信号光通量大，配上广角收集透镜，可获得很高的检测灵敏度和测量精度。8流式细胞仪的光源有什么特点？答：激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，所以激光是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞的快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为1s左右，且细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。9流式细胞仪的光学系统组成和各种滤光片的作用是什么?答：流式细胞仪的光学系统是由若干组透镜、滤光片和小孔组成，它们分别将不同波长的荧光信号送入不同的电子探测器。滤光片分三类，主要作用是：长通滤光片使特定波

10、长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过；短通滤光片使特定波长以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回；带通滤光片允许一定波长范围内的光通过。10流式细胞仪所检测的信号有哪些？这些信号所代表的意义和作用是什么？答：流式细胞仪所检测的信号有散射光和荧光信号。散射光信号：散射光分为前向角散射和侧向角散射，两个参数组合，可区分经裂解红细胞处理后外周血白细胞中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个细胞群体，或在未进行裂解红细胞处理的全血样品中找出血小板和红细胞等细胞群体。荧光信号：一种是细胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号，另一种是经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号，通过对这类荧光信号的检

11、测和定量分析能了解所研究细胞的存在和定量。11简述流式细胞仪信号的测量方式和校正方法。答：流式细胞仪信号的测量方式和校正方法分三类：（1）荧光信号线性测量和对数测量主要由电子线路完成；（2）荧光信号的面积的面积是采用对荧光光通量进行积分测量，一般对DNA倍体测量时采用面积，荧光信号的宽度常用来区分双连体细胞；（3）光谱重叠的校正采用双激光立体光路技术的四色FCM系统。12流式细胞仪分选器的组成和细胞分选原理是什么？答：细胞分选器由水滴形成、分选逻辑电路、水滴充电及偏转三部分组成。通过压电晶体的振动使自喷孔喷出的流束形成水滴，分选逻辑电路根据分选细胞的参数，给含有此参数的细胞液滴充电，充电的液滴经过电极偏转板时，依所带电荷不同而偏向不同的电极板，在电极的下方放置收集容器，便可得到要分选的细胞。13流式细胞仪的主要性能指标有哪些?答：流式细胞仪的主要性能指标有：荧光测量灵敏度；仪器的分辨率；前向角散射光检测灵敏度；分析速度；分选指标。14流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及哪几个方面？答：主要涉及下述三个方面：光路与流路校正：主要目的在于确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的CV值；PMT校准：采用质控品进行PMT校准，必要时进行电压补偿，以便仪器检测灵敏度不会因PMT的放大功率降低而改变；绝对