高效液相色谱法测定甘草酸二铵注射液中有关物质

1、高效液相色谱法测定甘草酸二铵注射液中有关物质         【论文关键词】  甘草酸二铵；注射液；有关物质；高效液相色谱法【论文摘要】  目的  建立高效液相色谱检测甘草酸二铵注射液中有关物质。  方法  选用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液或磷酸盐缓冲溶液乙腈（62：38）；对其配比可用梯度法改变配比，使其理论塔板数不低于3000。流速1.0ml/min，进样量10ul。  结果  在该色谱条件下，甘草酸二铵注射液分离良好。结论 

2、; 本法灵敏、准确、简便，可作为甘草酸二铵注射液有关物质的检测方法。 甘草酸二铵  是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的与皮质醇类似饿非特异性的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，可减少肝细胞的水肿、坏死。本研究采用HPLC法1一，二，建立了甘草酸二铵注射液中有关物质的测定方法。1  实验材料1 药品和试剂仪器:SP8800型高效液相色谱仪（美国Spectra-physics公司）  色谱柱：Kromasil C18(250×4.6mm,5µm)试剂:磷酸（分析纯）新乡市化学试剂厂; 乙腈(色谱纯)TEDIA company

3、.INC USA； 盐酸（药用级）湖南尔康制药有限公司；  氢氧化钠（药用级） 湖南尔康制药有限公司；甘草酸二铵对照品 中国药品生物制品检验所；  供试品（自制，批号：080714），纯化水 自制。 2方法与结果：2.1检测波长的选择：因紫外最大吸收波长为252nm，并根据其含量测定时选用的波长252nm，仍选此波长作为液相的检测波长。2.2色谱条件：选用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液或磷酸盐缓冲溶液乙腈（62：38）；对其配比可用梯度法改变配比，使其塔板数不低于3000。流速1.0ml/min，进样量10ul。3系统适用性试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加水至

4、刻度，制成1mg/ml(或0.5mg/ml，以出峰情况定)的溶液，进样10ul，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，实现主峰与杂质峰完全分离或达到基线分离，并且理论塔板数不低于3000。结果：样品(批号：080714)的主峰与杂质能够完全分离，理论塔板数为9802；有关物质为4.8%。4专属性试验4.1 酸破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L盐酸溶液5ml，放置2小时后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml中和，再加水至刻度，作为酸破坏溶液。4.2 碱破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，放置2小时后，加盐酸溶液1mol/L 5ml中和，再

5、加水至刻度，作为碱破坏溶液。4.3 氧化破坏试验：取本品5ml于25ml容量瓶中，加30%双氧水溶液1ml，放置2小时后，置水浴80加热1小时除去剩余的双氧水，再加水至刻度，作为氧化破坏溶液。4.4 高温破坏试验：取样品于110加热2小时后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作为高温破坏溶液。4.5 光照破坏试验：取样品于紫外灯下365nm波长光照4小时后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作为光照破坏溶液。取以上5种溶液，分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。分析结果。要求：各杂质峰与主成份峰分离效果良好。    &

6、#160;    结果：各杂质峰与主成份峰分离效果良好；其中各项试验的有关物质为专属性试验总有关物质%最大杂质%次大杂质%原样品4.82.70.98酸破坏试验5.32.40.95碱破坏试验5.02.50.98氧化破坏试验4.42.40.96高温破坏试验4.22.30.96光照破坏试验4.32.30.926最小检测限：取本品，按浓度稀释法进样分析（分别按10、100、1000、10000、100000倍稀释），测定色谱系统基线。以信噪比为3：1时的进样量为检测限。计算得本条件下的甘草酸二铵的检测限。结果：测得最小检测限为：1.5ng/ml。7精密度试验：取甘草酸二铵

7、对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释至约0.1mg/ml的溶液，进样10l，重复进样5次，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.46%，表明该溶液进样精密度良好。 8稳定性试验：取本品，制成1mg/ml的溶液，每隔2小时测定1次，考察甘草酸二铵注射液12小时的稳定性，要求：RSD2%。结果：其总有关物质RSD为1.2%，最大杂质RSD为0.83%，次大杂质为1.6%，其表明稳定性良好。9有关物质的测定  精密称取本品适量，用水稀释制成每1ml中约含1mg溶液，作为供试品溶液。精密称取供试品溶液适量，用水稀释成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液10ul注入液相色谱

8、仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%-25%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液主峰面积（10%）；其中供试品溶液色谱图中最大杂质峰面积不得大于对照品溶液主峰面积的2/5（4%，次大杂质峰面积不得大于对照品溶液主峰面积的1/4(2.5%).10讨论（1）本试验采用HPLC法测定甘草酸二铵注射液中的有关物质，操作简便、快速，测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。（2）在流动相的选择比较了乙腈-水系统、乙腈-磷酸溶液系统等，发现甘草酸二铵与有关物质不能很好地分离，且色谱图中主成分峰有明显的脱尾现象，方法不合理。后来试加入磷酸盐缓冲液，结果能使甘草酸二铵与有关物质达到良好的分离，并消除了主峰脱尾现象。（3）在主药的稀释溶剂选择上，考虑到甘草酸二铵易溶于水，比较了用流动相和水作