止嗽青果丸中黄芩苷含量的HPLC法测定

1、止嗽青果丸中黄苓甘含量的HPLCt测定【关健词】HPLCS;止嗽青果丸；黄苓昔SimultaneousDeterminationofBaicalininZhishuoqingguopillsbyHPLCZhangXiuli，WangYuhong(ChaoyangInstituteforFoodandDrugControl，Chaoyang，122000)【】Objective：ToestablishanHPLCmethodforthedeterminadtionofBaicalininZhishuoqingguopills.Method:AKromasilC18(4.6mmix250mm5n)

2、columnwasusedwithmethanol-0.2%phosphoricacid(50：50)，Theflowratewas1.0ml?min-1，Thedetectionwavelengthwasset280nm，andthecolumntemparaturewas28；Rusult：BaicalinshowedgoodlinearityintherangeofBaicalinwas0.040440.8088g(r=0.9999),Theaveragerecoveryrateswere99.14%，RSD=0.24%(n=6)；Conclusion：Themethodisaccura

3、tewithagoodreproducibility，andsuitableforqualitycontrolofZhishuoqingguopills。止嗽青果丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十册1，本品为丸剂，主要成分为西青果麻黄苦杏仁、黄芩、石膏等14味药，用于由风寒引起的咳嗽痰盛，胸闷气满，气短作喘，口干舌燥等症。具有宣肺化痰，止咳定喘等作用。由于原标准久未更新，无法控制药品质量，故笔者建立了用高效液相色谱法2-7测定黄芩苷的含量的方法。1 仪器与试药岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器，LCsolution色谱工作站），岛津UV-2550紫外分光光

4、度仪，黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200815）；止嗽青果丸（批号：130311，130312，130511）甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。2 实验方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为KromasilC18（4.6mm<250mm5以m）;流动相为甲醇-0.2%磷酸（50:50）;流量1.0mL?min-1;柱温为28C；检测波长280nm；,进本量为10以l;理论板数按黄芩苷计算不低于4000。2.2 对照品溶液的制备取黄芩苷对照品经五氧化二磷减压干燥18小时，精密称取10.11mg置50ml容量瓶中，力口70浓醇30ml超声使溶解，再加70

5、%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1ml至10ml容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含黄苓音20.22以g的对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约0.4g，精称，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50ml，称定重量，超声处理（260HZ，30W）30分钟，放至室温，再称定重量，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液经0.45以m微孔滤膜滤过即得供试品溶液。2.4 阴性对照溶液的制备取缺黄芩的阴性对照样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。2.5 方法专属性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各1

6、0皿，按“2.1”色谱条件注入液相色谱仪，依照“2.1”色谱条件进行测定。结果黄芩苷峰形对称，其它杂质无干扰，见图1。2.6 线性关系考察分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液（20.22以g?g-1）1",5"，10皿，15"，20*,注入液相色谱仪。按照“2.1”色谱条件进行测定测定峰面积，以对照品进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行线性回归处理，得黄芩苷回归方程为Y=3342208X-15731，r=0.9999。黄芩苷在0.040440.8088以g范围内呈良好的线性关系。2.7 精密度试验精密吸取浓度为20.22以g?g-1的黄苓昔对照品溶液，连续进样6次，每

7、次10",测定黄苓音平均峰面积为1342484,RS肪0.21%,表明该方法精密度良好。2.8 重复性试验取批号为130311的供试品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定。黄芩苷的平均含量为4.3938mg?ml-1,RS防0.73%。表明该方法有良好的重复性。2.9 稳定性试验分别精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6,8,12,24h进样10皿，按供试液项下测定黄苓甘，统计结果表明，黄苓昔峰面积的RS肪0.32%。表明本品在24h内是稳定的。2.10 加样回收率试验称取已知含量的供试品（批号：130311，黄芩苷含量4.3938mg?g-1）6份，每份0.2g

8、，精密称定，分别加入对照品0.8800mg，按“2.3”项制备，进行含量测定，计算回收率。结果平均回收率为99.14%,RSM0.24%。结果表明，本法具有良好的加样回收率。见表1。2.11 样品测定取三批样品，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积分值，按外标法计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。3 讨论3.1 检测波长的选择：取2.2项下的对照品溶液，以相应的溶剂为空白，在200400nm范围内进行光谱扫描，结果显示黄苓音在210nm与280nm有最大吸收，由于在210nm有末端吸收，所以选280nm为黄苓音的测定波长.3.2 提取溶剂的选择；在提取样品主成分时分别采用50%乙醇、

9、70%乙醇与乙醇作为溶剂，对三种溶剂的提取率进行比较，结果表明用70%乙醇作为溶剂提取率最高。3.3 提取方式的选择：，采用70%的乙醇对样品进行浸渍过夜提取法、加热回流提取与超声提取法进行了对比，结果显示超声法提取法提取率明显高于浸渍法与加热回流提取法，而且节省时间，故采用超声法进行提取。3.4 色谱柱的选择：分别考察KromasilC18(4.6mm<250mm5m)色谱柱与SunFireTMC18(4.6mm<250mm5m)色谱柱对主成分的分离情况，结果表明KromasilC18(4.6mmx250mm5以m)色谱柱对黄苓昔白分离效果优于SunFireTMC18(4.6mmx250mm5m)色谱柱，故选用KromasilC18(4.6mmx250mm5m)色谱柱。3.5 流动相的选择：参照中国药典黄芩药