微生物室室内项目操作

1、微生物室室内质控沈阳医学院奉天医院检验科王宇微生物操作程序接种接种培养培养鉴定鉴定药敏药敏何谓临床微生物学检验质量控制? 临床微生物学检验的质量控制是保证细菌的直接涂片、培养、鉴定、药敏试验及血清学试验等的准确性,避免因操作变化导致检验结果错误,造成误诊。当前临床细菌检验主要是定性试验,以手工操作为主,采用自动化仪器少,加之研究对象是活的细菌,会受各种因素影响,因此必须控制各个环节的可变因素,使细菌检验保持在稳定水平。微生物学检验的室内质量控制主要包括哪几个方面?1对细菌检验人员的要求;2操作手册;3仪器设备的功能监测;4培养基的质量控制;5试剂、染色液及抗血清的质量控制;6标本检验的质量控制

2、;7标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制 临床微生物室仪器设备的质量控制标准? 临床微生物室需要借助很多仪器设备对细菌进行培养、保存和鉴定,对这些仪器设备是否处于正常运行状态需要进行质量控制。 微生物室常用仪器质量标准 设备 控制标准 允许范围 高压灭菌器 121 121 孵育箱 35 1 温箱 37 土0.5 冰箱 4 土2 低温冰箱 -20 5 CO2 5%-10% 10% 培养基的质量控制包括哪些方面?1配制记录:应注明培养基原料的开封日期、储存条件、有效期、有否受潮结块等。在配制每批培养基时应作配制记录,内容包括培养基的名称、数量、配方、灭菌、分装、贴标签、配制日期、有效期等;2培

3、养基外观的检查:观察颜色和透明度是否正常,液体培养基是否澄清,固体培养基是否干裂及细菌生长,pH是否在规定的土0.2之内;3无菌试验:凡以无菌手续分装的培养基均应在35培养24h,无菌生长者方可使用;4性能试验:对所制备的各种培养基须用适当的标准菌株进行预测,符合要求者方可使用。 常用固体培养基的质量控制标准有哪些? 培养基 质控菌株 鉴定标准营养琼脂 福氏志贺菌ATCC12022 中度到大量生长血琼脂 金黄色葡萄球菌ATCC25923 中度到大量生长 化脓性链球菌ATCC19615 生长,-溶血 肺炎链球菌ATCC6305 生长,-溶血 大肠埃希菌ATCC25922 生长巧克力琼脂 淋病奈瑟

4、菌ATCC43069 生长 脑膜炎奈瑟氏菌ATCC13090 生长 流感嗜血杆菌ATCC10211 生长麦康凯琼脂 大肠埃希菌ATCC25922 生长,无色菌落 伤寒沙门菌ATCC14028 生长,红色菌落SS琼脂 伤寒沙门菌ATCC14028 生长,无色菌落 福氏志贺菌ATCC12022 生长,无色菌落沙保罗琼脂 白色念珠菌ATCC10231 生长 大肠埃希菌ATCC25922 部分或完全抑制 临床微生物实验室所用试剂、染色液质量控制的要求? (1)微生物实验室所用各种试剂和染色液配制好后,应标明试剂或染色液的名称、配制日期、失效日期和配制者。 (2)每配一批试剂或染色液均应做质控试验。包括

5、已知阳性和已知阴性标准菌株的测试符合要求方可使用。 (3)根据试剂或染色液本身的稳定性和使用频数定期核查核对,对较稳定的试剂如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测核对,凡不稳定的试剂如氧化酶试验用的盐酸四甲基(或二甲基)对苯二胺溶液或触酶试验用H202溶液,每天使用时均应检测,合格后才能使用。 (4)对不稳定的试剂要注意保存方法,如三氯化铁试剂避光保存,氧化酶试剂应避光低温保存。此外,触酶试剂、血浆、各种生物制品应置4冰箱保存。使用细菌诊断血清应注意什么? 细菌诊断血清对鉴定确认细菌种类是一种很重要的试剂,其有效质量保证是关键。为此,对使用的诊断血清应有一套严格的管理措施。具体注意事项如下: (

6、1)用于诊断的各种抗血清购入时应记录收到日期。观察抗血清的透明度与色泽,如有混浊或絮状沉淀,表示已被污染不能使用。 (2)使用各种抗血清时都应注意其效价和有效期,使用时先用已知阳性及阴性菌株检查是否符合标准。 (3)使用期间每3个月用标准菌株检测其敏感性及特异性。 (4)各种诊断血清均应置冰箱中4保存。 标准菌株应具备的条件及来源。 标准菌株必须是形态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株。实验结果重复性好,极少发生变异,可用Bergey细菌鉴定手册提供的典型特征来对照。 标准菌株可由专门机构供应,如美国典型菌种保藏中心ATCC (American Type Culture Coll

7、ection)、我国卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心。 标准菌株的保存方法有几种?各有什么特点? 标准菌株保存方法:为了保持标准菌株的最大活性,避免和减少细菌变异的机会可采用以下方法保存: (1)冷冻干燥法:应用冷冻干燥机冻干菌种的方法是最理想的保存方法。可保持活性和生物学特性不变,但手续繁琐。菌种保存中心均采用此法。 (2)冰冻保存法:此法较简单,将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中,置液氮或-4冰箱保存,但细菌经多次转种,性状可能发生变异。 (3)培养基保存法:是最简易方便的方法,但易发生变异,有以下几种方法:1普通琼脂斜面保存法:适于一般细菌的保存,置4冰箱可保存1个月;2血琼脂斜面保

8、存法:适于链球菌和肺炎链球菌,可半月移种一次。脑膜炎奈瑟氏菌应用巧克力斜面,若加液体石蜡,可延长保存期。3鸡蛋斜面保存法:适于保存含Vi抗原的沙门菌及其他含表面抗原的细菌。保存期1个月,加液体石蜡可保存3-6个月;4半固体穿刺法:穿刺培养基并加液体石蜡,置4冰箱可保存3-6个月。药敏实验的质量控制有哪几个环节? 药敏实验质控的主要环节是: (1)培养基应选择水解酪蛋白琼脂,即Muller-Hinton(MH)培养基。要求pH为7.2-7.4,平板厚度为4mm。每批新的培养基须用质控菌株检测,合格方可使用。 (2)抗菌药物纸片含量准确、合理使用和保存。 (3)菌量以麦氏管校正。 (4)以质控菌株

9、来控制测定方法的准确性和精密度。指出分别用于药敏试验质控的细菌 金黄色葡萄球菌ATCC25923:用于葡萄球菌和肠球菌; 大肠埃希菌ATCC25922:用于肠杆菌科细菌和弧菌; 铜绿假单胞菌ATCC27853:用于铜绿假单胞菌和不动杆菌; 肺炎链球菌ATCC49619:用于肺炎链球菌和其他链球菌; 流感嗜血杆菌ATCC49274、ATCC49766:两株分别用于流感嗜血杆菌不同的抗生素; 淋病奈瑟菌ATCC4926:用于淋病奈瑟菌; 大肠埃希菌ATCC35218:用于加酶抑制剂抗生素药敏质控。什么是抑菌环质控范围? 质控菌株对定量含药纸片显示一定大小的抑菌环,其环的大小用某数值范围来表示,即质

10、控结果可能出现的最小和最大抑菌环直径。此界限范围有95%的可信性。抑菌环不允许超过界限范围中间值上下二个标准差。一组质控结果的抑菌环均值应接近上下限的中间值。影响药敏试验扩散法的因素有哪些? (1)培养基:1培养基的组成;2培养基的pH、厚度及保存。 (2)抗菌药物纸片:1药物纸片的制备;2药物纸片的质控;3药物纸片的保存。 (3)菌液的浓度。 (4)纸片放入时间的控制。 (5)培养条件、温度及时间。 (6)阅读结果时,对不典型的结果必须重复试验来确定,如乙型溶血性链球菌A群对青霉素G应是敏感的,如是耐药则为不典型结果。临床微生物学检验室间质量评价的检查项目有哪些? (1)仪器设备检查：1各类仪器操作卡;2高压灭菌器的生物和化学控制指标;3温度控制图使用及校正记录;4保养及维修;5清洁度;6损坏记录。 (2)培养基、试剂、诊断血清的检查： 1配置方法、步骤、及注意点,配制日期,性能试验、配制者、标记及记录;2培养基:外观的清晰度、干燥、龟裂、pH是否符合要求,无菌试验,使用标准菌株检测结果的记录,各类培养基的储存条件及方法,培养基的有效期;3诊断血清:各类诊断血清的效价、有效期、定期使用监控菌株试验敏感性及特异性的结果和保存