牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物不同穴位注射对神经病理性疼痛大鼠的疗效比较.docx

1、doi:10.3969/j.issn,1006-9852.2014.08.006牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物不同穴位注射对神经病理性疼痛大鼠的疗效比较薛纯纯I李夏I谢磊I蔡剑峰2谷桢I王开强心（,上海中医药大学附属市中医医院疼痛科，上海200071；2嘉善县中医医院骨伤科，嘉善314100）摘要目的：比较不同穴位注射牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物(神经妥乐平)治疗大鼠神经病理性疼痛的疗效.方法：构建L脊神经结扎(spinalnerveligation,SNL)模型大鼠，将成功模型随机分为5组(=10),分别为SNL组、神经妥乐平+Ls“夹眷”穴组、神经妥乐平+匚“环跳”穴组、神经妥乐平+L,

2、“委中”穴组及神经妥乐平+匚“足三里”穴组，于穴位注射0d、Id、3d、5d、7d、10d、14d测定大鼠双足50%机械编足反应阈值.结果：神经妥乐平注射四个不同的穴位均有较好的镇痛作用，四个穴位镇痛强度之间无显著差异.结论：在本实验条件下，“委中”、“环跳”、“足三里”、L/夹脊”穴注射神经妥乐平治疗神经病理性疼痛均有较好的镇痛疗效.关键词牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物；穴位；脊神经结扎；神经病理性疼痛COMPARISONOFTHEANALGESICEFFECTSOFNEUROTROPINATDIFFERENTACUPOINTSINNEUROPATHICPAINRATSXUEChun-Chu

3、n*,LIXia1,XIELei1,CAIJian-Feng2,GUZhen',WANGKai-Qiang,A(PainManagementCenter,ShanghaiHospitalofTCM,ShanghaiUniversityofTCM,Shanghai200071;勺iashanHospitalofTCM,Zhejiang314100)AbstractObjective：Tocomparetheanalgesiceffectsofneurotropinatdifferentacupointsinneuropathicpainrats.Methods:ToestablishL5

4、spinalnerveligationmodelrats,fiftySDratswererandomlyassignedtofivegroupsn=10):SNLgroup,NTP+Ls"Jiaji”pointgroup,NTP+Ls"Huantiao"pointgroup,NTP+Ls"Weizhong”pointgroup,NTP+L5"Zusanli”pointgroup.Mechanicalallodyniawasrepresentedby50%pawwithdrawalthresholdfollowingacupoint-inject

5、ion(0,1,3,5,7,10,14d).Results:Afteracupoint-injcctiontreatment,allthe4acupointshadanalgesiceffectonneuropathicpainratmodel.Therewasnosignificantdifferenceamongthe4acupointgroupsconcerningthelong-lastinganalgesiceffect.Conclusions:Resultsofthepresentstudydemonstratethatneurotropinacupoint-injectiontr

6、eatmenthasasignificantanalgesiceffect,with“Weizhong”，"Huantiao",“Zusanli”，L5"Jiaji”acupoints.KeywordsNeurotropin;Acupoint;SNL;Neuropathicpain神经病理性疼痛是由外周或中枢躯体感觉系统的损伤或疾病而引起的一种顽固性疼痛综合征，以自发性痛、痛觉过敏和痛觉超敏为特征，其患病率高达6.0%7.0%，临床常见的神经病理性疼痛有三叉神经痛、带状疱疹后、脊髓外伤或脑中风后疼痛等。目前对该类疼痛虽有药物、神经阻滞、神经毁损、手术减压、骨髓电刺

7、激等多种治疗方法,但都无确切疗效，旦操作复杂，并发症多，费用昂贵,所以，寻找一种安全、有效的治疗神经病理性疼痛方法具有十分重要的意义。通讯作者kqw67牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物（神经妥乐平）由于具有镇痛、营芥神经、参与神经修复、免疫调节等药理作用，旦非麻醉性、非消炎镇痛性、无成瘾性，已广泛应用于临床°%但其临床应用多以肌肉注射或静脉滴注为主，本研究通过构建L,脊神经结扎模型，不同穴位注射神经妥乐平，观察其对神经病理性疼痛大鼠的作用及比较不同穴位的疗效，为临床应用提供-定的理论依据。方法1. 实验动物清洁级成年雄性SpragueDawley大鼠，重量220250g,由上海斯莱克动

8、物中心提供，动物许可证号：SCXK(沪)20120002。饲养于上海中医药大学附属市中医医院动物房，动物分笼饲养，室温保持在23±2C和50%60%的湿度，1212h白天-黑夜循环照明。所有实验步骤都尽量减轻动物的痛苦并按照有关实验动物的使用原则操作。实验动物在以上环境中适应一周后进行实验。2. 肯神经结扎模型的制备及动物分组动物在10%水合氯醛(300mg/kg)麻醉满意后，剃毛、固定、消毒、铺巾，以项兢突间隙为中心,取后背正中切口，长约4cm。切开皮肤、皮下组织，钝性分离椎旁肌，以拉钩牵开，咬除左侧L,椎板和关节突，暴戟左侧L,神经根和背根神经节，用50号mersilk丝线紧结扎

9、J神经用生理盐水冲洗伤口，充分止血，用40vicryl可吸收缝线逐层、间断缝合肌肉筋膜、皮下组织和皮肤，缝合后庆大客素肌肉注射以预防感染，术后所有动物均采用单笼饲养，室温维持在23±2.C,自然照明，自由饮水和摄食。术后第1天开始行为学检测，至造模后第7天,筛选造模成功大鼠，后将成功模型按随机数字表法分成五组，SNL组、神经妥乐平+J“央育”穴组、神经妥乐平+“环跳”穴组、神经妥乐平+“委中"穴组、神经妥乐平+“足三里”穴组。于神经妥乐平穴位注射后0d、Id、3d、5d、7d、10d、14d测定大鼠双足50%机械缩足反应阈值。3. 测定双足50%缩足反应阈值(pawwith

10、drawalthreshold.PWT)行为学测试时间固定在8:0012:00,测试人员不知道手术分组情况。第-阶段筛选成功模型行为学测试时间为术前Id、术后Id、3d、5d、7d；第二阶段为成功模型进行神经妥乐平干预，分别于注射0d、3d、5d、7d、10d、14d测定大鼠双足痛阑。将大鼠置于底为5mmX5mm的金属丝网眼垫的透明有机玻璃箱中，适应15min左右，用一系列标准化vonFrey纤维(美国Stoeling公司)刺激大鼠后肢足底中部，使之稍成S形，持续68s,待其安静后按照Dixon介绍的UpandDown方法测定机械痛阈。经典的von-Frey纤毛，折力分别为0.4、1.4、2.

11、0、4.0、6.0、8.0、15.0g。从2.0g开始，将von-Frey纤毛垂直刺向大鼠后爪足底皮肤，稍用力，直至其弯曲成S形，避开足垫，依据大鼠有无缩足反射，再更换下一折力或上一折力纤毛，每次持续时间最长不超过8s,测试相邻间隔时间为10s。记录大鼠对不同折力纤毛的-系列反应。若大鼠出现快速的缩足反射或舔足反应，则记为阳性反应，以“x”表示，若无反应，则视为阴性反应，以“。”表示，可得到一串以“。”或“x”组合的序列，以出现“x"的前一次“o"作为起点，选择包括该起点的6次连续刺激反应，如“oxoxoo”，作为推算50%缩足反应阚值(pawwithdrawalthres

12、hold>PWT)的关键序列，推算公式50%PWT(g)=(10Xf+K6)/10000,其中，Xf为序列中纹后一根von-Frey纤毛的对数值；k为根据测量所得“x”、“。”序列查表后得到的值，8为各个纤毛力度取对数后的均差，在此约等于0.244o由公式推算50%PWT会出现大于15.0g或小于0.4g的值，但仍以15.0g或0.4g作为最大或最小的机械痛阈值。若在2.00.4g力度范围的刺激均为阳性反应，50%PWT记为0.4g;若在2.015.0g范围力度的刺激均为阴性反应，50%PWT记为15.0g。健侧机械痛阕的测定时间均在术侧机械痛阈测定完后的15min进行，术前若大鼠右足5

13、0%PWTW4.0g,该只大鼠亦排除在实验之外。实验前一周每日将大鼠置于实验观察箱30min使之适应。4. 药物干预造模7d后，将大鼠固定在自制的塑料桶内，背部、双后肢和尾部暴露在外，用神经妥乐平(neurotropin,H本脏器制药株式会社生产，进口注册证号：针剂X20010023,规格：每支3ml中含有3.6个ncurotropin单位(NU)疗程)分别于大鼠双侧"央脊"穴(匚，平嘲醺关节,脊正中线旁开0.5cm)、“委中”穴(膝关节背面正中)、“环跳”穴(股骨大转子与最后愀椎棘突连线中外1/3处)和“足三里”穴(胫骨前结节旁开5mm)注射0.1ml,每门1次，7天1疗

14、程，共2疗程。5. 统计学方法采用SPSS18.0统计软件包进行统计分析，计量资料以均数土标准差(x±SZ?)表示，各组重复测量的痛阙之间的差异采用至夏测底资料的方差分析，同一时间点的蛆间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果1. SNL模型的成功建立术前两组大鼠双足50%PWT均无明显差异，术后SNL组大鼠健侧与正常大鼠健侧相比在统计学上无显著差异，术后SNL组大鼠术侧与正常大鼠术侧相比，其50%PWT于术后Id显著下降（PV0.01）,低于术前基础值的50%以上，并在观察期内均维持在较低水平（PV0.01,见图1）,证明已成功建立神经病理性疼痛模型。2

15、. 神经妥乐平注射不同穴位的镇痛作用神经妥乐平不同穴位注射后，各组与SNL组相比，随着时间的延长，痛阈逐渐增加，并于注射后第7d、10d、14d有统计学差异（Pvo.05）,不同的穴位组痛阈无明显差异（见图2）:SNL纽大鼠健侧后足痛阈与术前基础值比，7d14d（相当于术后14d21d）有统计学差异（P<0.05）,其余穴位组各组大鼠健侧后足痛阕之间无显著性差异（见图3）。 SNLZusanliJiajiWeizhong-Huantiao6)iMd%og图2神经妥乐平注射不同穴位对大就术侧机械性痛故的镇痛效应与SNL组术倒相比，P<0.05Fig.2Comparisonofanal

16、gesicefleetsofncurotropinatdificrcntacupointsinneuropathicpain.*P<0.05indicatesasignificantdiflerencccomparedwithSNLgroupipsilateral.IMd%og6)！Mn_%oln神经妥乐平是用牛痘病毒疫苗接种于家兔皮肤使其产生免疫和炎症反应的皮肤组织经过提取和纯controlgroupipsilateralcontrolgroupcontralateralSNLgroupipsilateralSNLgroupcontralateralTime(d)-SNLWeizhon

17、gZusanliHuantiao* Jiaji图3神经妥乐平注射不同穴位对大鼠健侧机械性痛敏的作用与SNL组健侧相比.P<0.05Fig.3Analgesiceffectsofneurotropinoncontralateralsideafteripsilateral(SNLside)injection.*P<0.05indicatesasignificantdiflerencccomparedwithSNLgroup.图1成功模型筛选，术后7天内正常大版和SNL模型大鼠双侧足底50%缩足阕值的变化°与正'常组相比，叩<0.01.Fig.1Compariso

18、nofpawmechanicalwithdrawalthreshold7daysafterLsspinalnerveligation.*P<0.01indicatesasignificantdiflerencecomparedwithcontrolgrouprats.化得到的一种非蛋白生物活性物质。以往的实验已证实神经妥乐平镇痛作用不仅有中枢镇痛机制的参与还有外周机制发挥独特的镇痛作用，5,o中枢镇痛机制主要为中枢通过调节5一羟色胺能（5-HT）系统及去甲肾上腺素能系统a?受体的功能，激活下行性疼痛抑制系统；其外周镇痛机制为抑制缓激肽释放缓解化学性刺激，减轻局部组织及神经根的水肿达到镇痛

19、作用闽。目前穴位注射主要应用于消化系统、神经系统、免疫系统等，研究发现应用华佗夹脊穴穴位注射治疗外伤性脊髓损伤获得较好的临床疗效；另外，足三里及牌俞穴位注射复方当归注射液可以改善功能性消化不良患者的症状同。穴位注射是将穴位、针刺、药物的多至作用结合起来的特殊针灸疗法本实验用神经妥乐平作用于不同的穴位，结果表明4个穴位均有较好的镇痛作用。从解剖学的角度来看，夹脊穴对应的是相应骨神经的后根(L5),环跳穴深部为坐骨神经干，委中穴下为胫神经，足三里穴下为腓肠外侧皮神经，穴位卜-的感受器以肌梭为主。研究表明四穴位特异性的产生机制主要是与神经支配的节段有关。以上四穴中，委中和环跳主要作用于坐骨神经的神经

20、干及其分支，直接刺激神经干，夹脊穴作用的是相应节段的脊神经后支，而足三里主要作用的感受器以肌梭为主，主治偏重于胃肠道消化系统，这可能是足三里穴镇痛效果相对较弱的原因。此外，研究中还发现SNL组在第】0d及14d大鼠健侧痛阈有所下降，即所谓的“镜像痛”现象，当周围神经损伤后，疼痛不仅从受伤区域被感知，而且在损伤部位外一定距离的区域也被感知最新研究认为与卫星胶质细胞有关但是神经妥乐平治疗后健侧痛阈均未出现下降，反过来也证明神经妥乐平穴位注射可有效的预防“镜像痛”的出现,至于其机制仍不明晰，还有待进一步研究。本实验中仅仅观察了神经妥乐平对SNL模型行为学的改变，并未进一步探讨其镇痛机制是本实验的缺点

21、，我们将进一步完善此方面的研究。参考文献1 TsudaM,MatsushitaK,InoueK.Neuropathicpain.NihonYakurigakuZasshi,2014,143:215216.2 CostiganM,ScholzJ,WoolfCJ.Neuropathicpain:amaladaptiveresponseofthenervoussystemtodamage.AnnuRevNeurosci,2009,32:132.3 DannoD,KawabataK,TachibanaH.Threecasesofnummularheadacheeffectivelytreatedwit

22、hNeurotropin(®).InternMed,2013,52:493495.4 SaitoY,FukumuraS,SaitoT,etal.Effectofneurotropinonchronicheadachesinchildren.NoToHattatsu,2012,44:477481.5 ObataH,SaitoS,KoizukaS,etal.Themonoaminc-mediatedantiallodyniceffectsofintrathecallyadministeredmilnacipran,aserotoninnoradrenalinereuptakeinhibitor,inaratmodelofneuropathicpain.AnesthAnalg,2005,100:1406-1410.6 KudoT,KushikataT,KudoM,etal.Antinociceptiveeffectsofneurotropininaratmodelofcentralneuropathicpain:DSP-