冠心病患者血浆MBL含量测定及分析

1、冠心病患者血浆MBL含量测定及分析        【摘要】  目的:测定冠心病患者与健康对照者血浆中MBL含量,分析其变化情况,从固有免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹静脉血,健康对照者60例,采用ELISA法对血浆中MBL含量进行检测。结果:100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900g/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056g/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P<001,差别

2、有统计学意义。结论:冠心病组血浆MBL水平高于健康对照组,二者均值比较差别有统计学意义,血浆MBL参与了冠心病的发生、发展过程。    【关键词】  冠心病;MBL;ELISA;含量    【ABSTRACT】  Objective:The main purpose of this study is to measure the MBL level in plasma with coronary heart disease and try to analyze the possible mechanism of C

3、HDs development from the view of innate immune.Methods:100 blood samples of CHD patients and 60 that of health controls were collected and tested by ELISA.Results:The plasma level of MBL were 3900g/L, SD 3209 in cases, while 2056g/L,SD 1824 in controls. The plasma level of MBL in cases is higher tha

4、n that of controls (t=4071, P<001).Conclusion:The plasma level of MBL is higher in CHD patients than that in controls.    【KEY WORDS】  CHD; MBL;ELISA;Plasma level    冠心病(coronary heart disease,CHD)是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势1。其病因和发病机制尚未完全

5、阐明,近年来,冠心病发病的炎症学说越来越得到重视2,对一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin,MBL)是一种兼有调理素和直接激活补体功能的免疫分子,参与构成抗感染的第一道防线3。国外有些学者报道MBL与动脉粥样硬化发生、发展有关47,但国内尚无报道,因此本研究主要测定冠心病患者血浆中MBL含量,并对其变化进行分析,从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制,为其辅助诊断和治疗提供资料。    1  材料与方法    11  实验材料 

6、60;  主要设备:低温冰柜(thermo,美国);酶标仪(Star fax 2100,美国);普通高速离心机(TGL168,上海)    主要试剂:MBL ELISA试剂盒(北京现代高达生物技术有限责任公司)    12  实验方法    121  标本的收集:空腹静脉血标本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。    冠心病(CHD)组:共100例,为河北北方学院附属第一医院20049200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年龄45

7、70岁,平均(6041±9443)岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断,符合WHO冠心病诊断标准。    健康对照组:60例,为来院进行健康体检者,男性32例,女28例,年龄4371岁,平均(6027±7198)岁,病例无冠心病症状、体征,超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。    122  标本的处理    取1ml全血放入15ml离心管中,5000转/min离心5min,分离血浆,-86保存,供测定血浆MBL含量。 &

8、#160;  123  血浆中MBL含量测定    按MBL ELISA试剂盒说明书,基本操作如下:    标本及试剂准备:冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜(-86)中取出,溶解并恢复至室温,离心(3500转/min 5min)。取上清2l,用标本稀释液对标本进行200倍稀释(加入398l标本稀释液PBS+005%BSA),混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。    操作步骤:    取100l稀释标本加入酶标板中,同时做对照,第一孔加100l稀释液

9、作空白,第二孔向后依次加含MBL不同浓度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的标准液各100l,标准孔均作复空;    置37水浴1h;    将板中的液体弃去,每孔加入150l洗板液进行清洗,室温静置3min,弃去洗板液,反复3遍;    清洗后,每孔加入100l酶标记的MBL抗体,37 1h,使酶标抗体与标本充分结合。    清洗,操作同 ;    清洗后,每孔加入底物A、B各50l,室温避光15min。每孔加入终止液50l

10、,轻轻混匀20s;     用酶标仪比色  测定波长为450nm,参考波长为620nm。在20min内完成。    2  结果    用SPSS 130软件进行统计分析,冠心病组、健康对照组血浆MBL含量的比较,采用两样本均数比较的t检验。    100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900g/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056g/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P

11、<001,差别有统计学意义,见表1。表1  冠心病组与对照组MBL含量水平比较    3  讨论    人类血清MBL浓度主要受结构基因外显子1密码子点突变的影响和启动子区多态性的调控811。国外已有一些MBL基因与冠心病的相关性研究46,但对血浆MBL浓度与冠心病的相关性研究很少,只有冰岛的一份前瞻性研究报告7:高浓度的血浆MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率较低,提示MBL可能与清除动脉粥样硬化因素有关。雷克雅未克Landspitali大学的瓦尔迪马森(Helgi Valdim

12、arsson)和同事分析了当地的研究资料,共纳入了1967年以后的近2万参试者。在对其中987名70岁参试者的横断面研究中,作者发现,MBL水平高(>1000mg/L)与水平低相比,心肌梗塞风险下降36%(P<0001)。为证实此结论,研究者对另一个有1309名中年人的人群进行了前瞻性分析。结果发现MBL水平高和心肌梗塞风险减弱有关联的迹象,但不如前一横断面分析中的那样强烈,对总人群、吸烟者或高血压病人也没达到统计学意义。但这次分析证实,高水平MBL对糖尿病人(P=002)或高胆固醇血症病人(P=0004)与心肌梗塞风险大为减小有关。鉴于上述在糖尿病人中的结论“测量MBL可用于心性

13、风险的辅助评估,也可能帮助评估预防治疗的需要”,本研究发现,100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900g/L;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056g/L。经t检验,t=4071,P<001,二者均值比较差别有统计学意义,说明血浆MBL可能参与冠心病的发生、发展,但具体作用及机制还有待进一步研究。    参考文献    1  杨功焕,王俊芳,万霞,等.影响中国人群疾病死亡因素的定量分析J.中华流行病学杂志,2005,26(12):934938    2  Gran

14、 K.Inflammation,Atherosclerosis,and Coronary Artery DiseaseNJ.Engl J Med,2005,352:16851695    3  Takahashi K,Ezekowitz RA. The role of the mannose binding lectin in innate immunityJ.Clin Infect Dis,2005,41(7):440444    4  Aittoniemi J,Fan YM,Laaksonen R,et al.

15、The effect of mannanbinding lectin variant alleles on coronary artery reactivity in healthy young menJ.Int J Cardiol.,2004,97(2):317318    5  Robert A,Hegele C.Mannosebinding Lectin Gene Variation and Cardiovascular Disease in Canadian InuitJ.Clin Chem,1999,45:1283  

16、60; 6  Fiane AE,Ueland T,Simonsen S,et al.Low mannosebinding lectin and increased complement activation correlate to allograft vasculopathy,ischaemia,and rejection after human heart transplantationJ.Eur Heart J,2005,26(16):16601665    7  Saedis S,Oskar O O,Thor A,et al.Manna

17、n binding lectin as an adjunct to risk assessment for myocardial infarction in individuals with enhanced riskJ.J Exp Med,2005,201:117125    8  贾天军,李萍,张庶民,等.汉、蒙古族人MBL基因ExonI 54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究J.中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(2):115119    9  Kilpatrick DC.Mannanbinding lectin and its role in innate immunityJ.Transfus Med,2002,12(6):335352    10Toralf B, Willemijn B,Nannette B, et al.Functional Consequences of Genetic Variation across the Entire MBL2 Locus: Possible Identification of 3SNPs That Could Modify Circulating Levels of MBLJ.Bl