肠道内病原hl(实验三)

1、实验三实验三肠道肠道内及组织内病原内及组织内病原实验目的实验目的 掌握肠道致病菌与非致病菌的常用鉴掌握肠道致病菌与非致病菌的常用鉴别方法。别方法。 学习组织内及血液内病原的检查方法学习组织内及血液内病原的检查方法 了解肠道杆菌的生化反应。了解肠道杆菌的生化反应。 学习分区划线接种法。学习分区划线接种法。实验内容实验内容 大肠杆菌、痢疾杆菌的大肠杆菌、痢疾杆菌的EMBEMB、SSSS培养基的培养基的接种。接种。 溶血现象示教：完全溶血及不完全溶血现象溶血现象示教：完全溶血及不完全溶血现象 咽拭试验咽拭试验 血浆凝固酶试验：玻片法血浆凝固酶试验：玻片法 抗抗“O”试验试验实验原理实验原理 EMBE

2、MB、SSSS培养基鉴别肠道致病菌及非致培养基鉴别肠道致病菌及非致病菌的原理。病菌的原理。EMBEMB（伊红美兰培养基）：（伊红美兰培养基）： 蛋白胨蛋白胨 乳糖乳糖 磷酸氢二钾磷酸氢二钾 琼脂琼脂 2%2%伊红伊红Y Y溶液溶液（酸性染料（酸性染料指示剂）指示剂） 0.65%0.65%美蓝溶液美蓝溶液（碱性染料）（碱性染料） EMBEMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）平板（伊红美蓝琼脂培养基） 原理：原理： 细菌细菌 乳糖乳糖 产酸：伊红美蓝产酸：伊红美蓝 紫黑紫黑/ /紫红紫红 结果：结果： 非致病菌非致病菌 致病菌致病菌分解分解菌落变黑，有金属光泽菌落变黑，有金属光泽菌落无色、半透明菌落无色

3、、半透明肠道致病菌与非致病菌肠道致病菌与非致病菌在在EMBEMB培养基上的生长培养基上的生长SSSS培养基：培养基：蛋白胨蛋白胨 乳糖乳糖柠檬酸钠柠檬酸钠 硫代硫酸钠硫代硫酸钠 10%10%柠檬酸铁柠檬酸铁溶液溶液 1%1%中性红溶液（酸性指示剂）中性红溶液（酸性指示剂） 0.1%0.1%煌绿溶液煌绿溶液SSSS平板平板-分离肠道致病菌的强选择培养基分离肠道致病菌的强选择培养基原理：原理：1.1.胆盐、枸橼酸钠、煌绿胆盐、枸橼酸钠、煌绿： 抑制肠道非致病菌抑制肠道非致病菌2.2.乳糖、中性红乳糖、中性红（pH6.8-8.0pH6.8-8.0，红，红橙黄）橙黄） ： 致病菌不分解乳糖，但分解蛋白

4、胨产生致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质碱性物质菌落淡黄色；菌落淡黄色； 大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。致致 病病 菌菌: :小小, ,无色无色, ,半透明半透明非致病菌非致病菌: :大大, ,红色红色实验材料实验材料 每组四块培养基：两块每组四块培养基：两块EMBEMB、两块、两块SSSS培养基培养基 大肠杆菌、痢疾杆菌斜面培养物大肠杆菌、痢疾杆菌斜面培养物 接种环接种环 酒精灯酒精灯实验步骤实验步骤 将大肠杆菌以分区划线的方式分别接种至将大肠杆菌以分区划线的方式分别接种至EMBEMB、SS SS 培养基上。培养基上。 将痢疾杆菌以分区划线的方式分别接种至将痢疾杆菌以分区划线的方式分别接种至EMBEMB、SS SS 培养基上。培养基上。 将接种好的培养基置入将接种好的培养基置入3737培养箱培养培养箱培养2424小时。小时。 记录并分析结果。记录并分析结果。l分区划线法分区划线法 （得到单个菌落做纯培养）（得到单个菌落做纯培养）肠道杆菌的生化反应肠道杆菌的生化反应细菌细菌葡萄糖葡萄糖甘露醇甘露醇乳糖乳糖靛基质靛基质硫化氢硫化氢动力动力痢疾痢疾杆菌杆菌/伤寒伤寒杆菌杆菌大肠大肠杆菌杆菌伤寒葡萄糖甘露醇乳糖靛基质硫化氢动 力大肠大肠葡萄糖甘露醇乳糖靛基质硫化氢动 力四、抗四、抗“O”实验实验： 1、实验原理、实验原理