细菌转化实验原理和操作步骤_第1页
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文档简介

1、细菌转化试验原理和操作步骤转化（ transformation ）是指一段同源或异源的 DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学争辩和基因工程不行缺少的重要技术。关键词：细菌转化细菌转化一 试验目的 1 以 pGLO 质粒转化大肠杆菌为例，学习转化的基本原理及方法。2 验证 DNA 是遗传物质，加深对中心法则的理解。 二试验原理 转化（ transformation ）是指一段同源或异源的 DNA 转入受体细胞并得到表达的水平基因的转移过程，是现代分子生物学争辩和基因工程不行缺少的重要技术。目前常用的转化方法有 CaCl 2 法 ( 化学转化法 ) 和电转化法。本试

2、验是用 pGLO 细菌转化试剂盒中供应的 pGLO 质粒来转化大肠杆菌，所用方法为 CaCl 2 转化法。pGLO 质粒：pGLO 质粒上主要含有两个基因，一个为编码绿色荧光蛋白 (GFP) 的基因，一个为抗生素氨苄青霉素抗性基因。此外，该质粒还整合有一个特殊的参与受体细胞中绿色荧光蛋白表达的基因调控体系，转化细胞中的绿色荧光蛋白基因只有在培育基中存在阿拉伯糖时才能启动表达。转化子细胞将在不含阿拉伯糖的培育基上呈白色而在含阿拉伯糖的培育基上显绿色荧光，这种荧光在长波紫外灯下即可观看到。三 试验材料受体菌： E.coli K12 HB101质粒： pGLO plasmid转化液（ CaCl2 ）

3、氨苄青霉素（ amp ）阿拉伯糖（ ara ）培育基：固体 LB 、液体 LB接种环、移液器等四 试验步骤1. 预备平板： 每组： 1 块 LB 平板， 2 块 LB/amp 平板， 1 块 LB/amp/ara 平板2. 预备感受态细胞：用 250 l 无菌水或转化液悬浮试剂盒中供应的大肠杆菌菌粉，此即感受态细胞。3. 活化受体细胞：挑取 1 环 E.coli K12 HB101 菌液，于 LB 培育基上 37 活化 16-24h 。4. 转化： 1） 在两只无菌离心管上分别标记 +DNA, -DNA 。2） 在上述两管中分别加入250 l 转化液。3) 快速置于冰上。4） 各挑取活化好的受体菌的一个单菌落，悬浮于两管转化液中。5） 在标有 +DNA 的管中加入一环质粒 DNA ，而标有 -DNA 的管中不加。6） 将上述两管于冰上放置 10min 。7） 在预备好的培育基底部如左图。8 ）两只小管放入 42 水浴中处理 50 秒，再快速放于冰上 2 min 。9 ）在两只小管中分别加入 250 l LB- 肉汤。10 ）从 +DNA 小管中分别吸取 100 l 滴加在两个标有 +DNA 的平板上，从 -DNA 小管中分别吸取 100 l 滴加在两个标有 -DNA 的平板上。11 ）用无菌接种环将滴加的液体均匀涂布在平板上。1

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