正交实验法优选地黄中梓醇的提取工艺

1、正交实验法优选地黄中梓醇的提取工艺 作者：刘影 杨菁 黄雷 许燕 岳春丽 韦忠民【摘要】 目的优选出地黄中梓醇的最佳提取工艺。方法以梓醇含量为指标，利用 L9（34）正交实验法，以乙醇浓度、提取次数、加醇倍数、提取时间为因素，每个因素取3个水平，进行实验，来确定最佳制备工艺。结果最佳工艺为12倍量95%乙醇提取2次，1 h/次。结论经优化后工艺条件可靠，适合地黄中梓醇的提取工艺的。 【关键词】 地黄； 梓醇； 正交实验Abstract：ObjectiveTo explore an optimum extraction technology of Catalpol from Rehmannia

2、glutinosa Libosch. MethodsUsing catalpol as the index, the effects of alcohol concentration, extraction time, solvent amount and extraction degree on extraction technology were evaluated by orthogonal design.ResultsThe superior technology of catalpol was as follows: 95% alcohol, 1 hour, 12 fold solv

3、ent and extracted 2 times.ConclusionThe optimum extraction process is stable and accurate, and it is suitable for extraction of catalpol from Rehmannia glutinosa Libosch.Key words：Rehmannia glutinosa Libosch； Catalpol； Orthogonal Design 生地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的干燥块根，系常用的补药，临床应用十分广泛。传统医

4、学认为地黄具有滋阴补血、生津的功效。生地黄的主要活性部分是环烯醚萜苷类，而环烯醚萜苷类中含量最高的是梓醇。研究证明梓醇具有降血糖1，预防哮喘病，治疗乙型肝炎病毒感染，对缺血再灌注受损神经元有保护作用2，抗癌3等药理作用。目前梓醇的开发是一个热点，但由于梓醇化学性质不稳定，易受酸碱4等条件影响，这为梓醇的提取增加了难度，本实验对回流提取、超声提取、40温浸3种提取方式及甲醇、乙醇和水的提取溶媒进行了筛选，在此基础上，利用正交实验，以梓醇含量和干浸膏的重量为指标优选出最佳工艺。1 仪器与试药 LC-10vp高效液相色谱仪，日本岛津公司生产；KQ-250B型超声波清洗器，昆山市超声波仪器公司生产；A

5、240型天平，美国梅特勒公司生产；恒温水浴箱 ，北京市永光医疗仪器厂。生地黄，产自河南省武涉县西陶镇，由锦州奥鸿药业有限责任公司质量部照2005年版药典部地黄质量标准检验，符合规定。梓醇对照品，批号110808-200407，购于中国药品生物制品检定所；乙腈，美国Fish公司生产；其余试剂为国产分析纯。2 方法2.1 梓醇的含量测定2.2 提取工艺的优化1 表1 回收率实验结果（略）实验方法：取生地黄样品粉碎，过2号筛，称取9份样品，每份10g，将9份样品分成3组，每组分别加入100 ml水、100 ml95%乙醇、100 ml甲醇，将第1组分别超声提取70 Hz，20 min，第2组回流提取

6、2 h，第3组40温浸6 h，分别过滤取滤液减压浓缩至干，分别加入10 ml水溶解，滤过，取滤液液相检测梓醇含量，并干浸膏的重量。结果见表2。表2 不同提取方法不同溶剂提取后测得干浸膏重量和梓醇含量（略）由表2可见回流提取方法优于其他两种方法，在溶剂方面虽然甲醇的提取率高，但是干浸膏重量大，即杂质含量高，对下一步的纯化带来一定的难度，并且甲醇毒性大，所以最佳的提取方法为乙醇回流提取。表3 因素水平（略）表4 正交实验设计及实验结果（略）表5 方差分析（略）3 讨论 通过对超声提取、室温浸出提取、回流提取3个提取方法的考察得出了回流提取梓醇含量高。在溶剂选择方面分别对水、甲醇、95%乙醇3种溶剂

7、进行了考察，在干浸膏重量上95%乙醇低于其他两个溶剂，分析可能由于大量的糖类、氨基酸等水溶性杂质不能被乙醇提出来的缘故5。这样对后期梓醇的纯化带来很大的方便。在此基础上我们采用了正交实验对不同的乙醇浓度、提取时间、提取次数、提取溶剂倍数。分别选择了3个水平分别进行考察。得出了乙醇浓度对干浸膏和梓醇含量影响较显著。有对地黄中梓醇变化的条件进行研究，结果表明，梓醇溶于水中加热10010 h后，其含量未见明显变化；但在酸、碱条件下极不稳定。因此实验所确定回流提取工艺对梓醇含量不会有影响，而且较适合生产，对梓醇提取的工业化提供了一定的技术参数。【文献】 1 万昌武,张雅丽,桂华珍,等.地黄不同方法提取物制剂降糖作用的实验研究J.贵州医药,2003,27(12):1112.2 李 杨,李丹清,包永明,等.梓醇对缺血再灌注受损伤神经元保护作用的研究J .医学杂志，2005, 15（10）:1454.3 Pungitore C R, AyubM J, Borkowski E J, et al.Inhibition of Taq DNA polymerase by catalpolJ. Cell Mol B