抗炎止痛口服液对佐剂诱导性关节炎治疗作用的研究

1、抗炎止痛口服液对佐剂诱导性关节炎治疗作用的研究                作者：马玉琛，段斐，孟明，郭晓燕，寇素茹，马幼敏【摘要】  目的研究抗炎止痛口服液对AIA的治疗效果。方法采用弗氏完全佐剂造模，对6组采用不同药物和剂量的大鼠进行治疗观察。结果抗炎止痛口服液中小剂量组在体重、脾指数、病理检测方面与正常组无差别，同模型组有显着性差别。结论抗炎止痛口服液对AIA有良好的治疗效果。 【关键词】  抗炎止痛口服液； 诱导性关节炎； 胸

2、腺指数； 脾指数； 关节肿近年来，应用中医中药治疗类风湿关节炎的研究越来越多， 以经验方为依据，制成便于服用的剂型，也是临床上经常采用的方法。通过广泛的临床观察发现，中西医结合疗法不仅可以提高临床疗效，而且能够减轻西药的毒副反应，因而也是应用较普遍的方法。   本实验应用大鼠佐剂诱导性关节炎（adjuvant induce arthritis, AIA ）模型，研究中药抗炎止痛口服液对AIA的治疗效果。1  器材与方法1  动物健康SD大鼠，雄性，体重150180 g。（购自河北医科大学实验动物中心）动物级别：SPF；动物许可证号608139。购入本实验

3、室的动物室适应性饲料2 d，然后进行造模实验。2  药物与试剂抗炎止痛口服液，由252医院药剂科提供，批号20040922，常温保存。雷公藤多苷片，100 mg/片，湖南省株州市制药厂生产，研成粉末溶于水，4冰箱保存。卡介苗冻干粉，卫生部北京生物制品研究所，批号2006 05。 液体石蜡，中国上海宝山县化工厂生产，批号050817。羊毛脂，北京市昌平石鹰化工厂生产，批号061127。3  仪器与设备自制的大鼠足容积测量仪1 。 电子秤及电子天平。石蜡切片机，日本莱卡。4  模型制作2将液体石蜡、羊毛脂按21的比例混合均匀，高压灭菌后4°C保存，使用时加入

4、卡介苗（10 mg/ml）配制成弗氏完全佐剂（CFA），充分研磨混匀乳化后，取0.1 ml注射于大鼠左后足垫皮内致敏，正常对照组注射0.1 ml生理盐水。在造模后17，39 d分别测量大鼠的体重及足跖肿胀度，39 d断头处死大鼠，收集血清，取材脾脏、胸腺、致炎侧踝关节、进行指标检测。5  分组及给药方法  SD大鼠60只。随机分为正常对照组、AIA模型组、雷公藤阳性药组及抗炎止痛口服液大、中、小剂量组，每组10只。造模后18 d开始每天上午8：0010：00灌胃给药，正常组和AA模型组给予生理盐水，每天每只大鼠2 ml；雷公藤组每天20 mg/kg；中药抗炎止痛口服液组大剂

5、量每天60 g/kg，中剂量每天30 g/kg（相当于人临床用药量的10倍），小剂量每天15 g/kg；连续给药21 d。6  观察项目及检测方法6.1  AA大鼠的体重、脏器指数、足跖肿胀度的测定在致炎后17 d和39 d分别测量AA大鼠的体重和致炎侧足跖肿胀度（容积排水法）3，并用正常组对照，致炎39 d取脾脏和胸腺称量，计算脏器指数（计算公式：脾指数=平均脾重量/平均体重）。6.2  足爪容积的测定 致炎前测量每只大鼠的后足体积，致炎后2，5，10，17，39 d测量大鼠致炎侧后足爪肿胀度（容积排水法）。6.3  组织病理学检测于致炎第3

6、9天断头处死大鼠，立即分离后肢致炎侧病变关节，10%甲醛固定，EDTA脱钙，乙醇逐级脱水，常规包埋，切片，苏木素-伊红（HE）染色，并进行组织学评价和拍照，同时以相同±s方法取正常大鼠相同关节部位作为对照。6.4  统计学处理  数据均用±s表示，采用SPSS进行统计学分析，组间比较行单因素方差分析( one-way ANOVA)，用最小显着差法( least significant difference,LSD )作两两比较，以P0.05为差异有显着性。         2

7、  结果2.1  各组大鼠体重变化比较 结果见表1。 AIA模型组大鼠从致炎后第2周起体重增长缓慢，第17天和第39天体重明显低于同期饲养的正常组大鼠（P0.05），与雷公藤阳性药组接近，而抗炎止痛口服液治疗中、小剂量组大鼠体重与正常组比较，差异无显着性（P0.05），大剂量组大鼠体重减轻。表1  各组大鼠体重变化比较（略）2.2 各组大鼠胸腺、脾脏指数变化比较见表2。AIA模型组大鼠39 d的胸腺、脾脏指数明显高于正常组（P0.05），雷公藤治疗组, 抗炎止痛口服液大剂量组大鼠的胸腺、脾脏指数明显低于AIA组大鼠(P0.05)。抗炎止痛口服液中剂量治疗

8、组大鼠的胸腺指数和脾脏指数，与正常组比较，差异无显着性（P0.05）。表2  各组大鼠致炎39 d胸腺及脾脏指数变化比较（略）2.3 各组大鼠致炎侧踝关节肿胀度比较 结果见表3。AIA大鼠致炎后15h，致炎侧足肿胀达高峰，表现为早期的炎症反应，持续23 d逐渐减轻，78 d后再度肿胀，继发病变于致炎后10天左右出现，表现为对侧和前足肿胀，且进行性加重，大鼠行动不便，体重下降，表现类似人类RA4。各实验组大鼠于致敏后2，5，10，17，28，39 d，用容积排水法测量致炎侧踝关节肿胀度（结果见表3）。AIA模型组足肿胀度明显高于正常组（P0.01）。雷公藤治疗组及抗炎止痛口服

9、液大、中剂量治疗组大鼠足肿胀度明显低于AIA模型组（P0.01）。表3  致炎前后各实验组大鼠关节肿胀度比较（略）2.4   各组大鼠致炎侧踝关节肿胀度比较 镜检结果显示，在正常大鼠的关节滑膜组织，可见12层滑膜细胞，滑膜下有成熟滑膜组织。细胞排列整齐，关节面光滑无渗出物。 致炎39 d，AIA大鼠关节滑膜增生，呈绒毛状排列紊乱，可向关节腔内突出，部分滑膜剥脱缺失，并有大量炎性细胞浸润，软组织明显水肿。 抗炎止痛口服液治疗组和雷公藤治疗组大鼠关节滑膜增生，只有少许剥脱，组织水肿较轻，并见少量炎细胞浸润。3  讨论   类风湿

10、性关节炎（RA）是一个以累及周围关节为主的多系统炎症性的自身免疫病，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一3。因此对RA的研究一直是个热点问题。类风湿性关节炎的基本病理改变是滑膜炎。急性期：初期滑膜表现为红肿渗出（可引起关节积液）和细胞浸润。慢性期：滑膜炎继续进行，滑膜肥厚，形成许多绒毛样突起。最后软骨表面的肉芽组织纤维化，使上下关节面互相融合，形成纤维性关节强硬。关节附近的骨骼呈脱钙和骨质疏松，肌肉和皮肤都萎缩。关节本身畸形或脱位。   中医认为RA属于痹证，是由风、寒、湿、热等外邪乘袭引起。经络痹阻，可致血淤痰积；内外合邪则可耗损正气，化毒坏血，蚀筋腐骨，治疗当以

11、祛邪通痹、活血化痰、散结解毒为根本法则。   抗炎止痛口服液是国家卫生部、人事部、中医药管理局第3批全国名老中医师带徒专家252医院马玉琛主任根据多年临床经验，对传统经方加减而成，符合RA上述病机和治则，有肯定的临床疗效。动物实验证明，抗炎止痛口服液能够减轻AIA大鼠足踝关节肿胀度，下调胸腺指数和脾脏指数，减轻关节滑膜增生和炎性病变，具有明显的治疗作用。阳性药物雷公藤有明显的抗AIA功效，其抑制大鼠关节肿胀，抑制炎症反应的功效十分肯定。在本实验中发现，雷公藤用药大鼠局部关节病变减轻，足肿胀度明显低于AIA模型组大鼠，关节病理学切片显示滑膜增生明显少于AIA模型组大鼠， 炎性

12、细胞浸润及血管翼生成等也明显少于AIA模型组大鼠。但动物全身状态不良，大鼠体重明显低于正常对照组大鼠，且一般生存状态不佳，活动减少，精神萎靡，消瘦，脱毛，甚至腹泻。抗炎止痛口服液没有雷公藤样强烈的毒副反应，不仅各剂量治疗组大鼠有不同程度症状改善，而且还表现出补养功效。各用药组大鼠体重没有减轻，进食量及活动度均未见减少，且皮毛光滑，精神状态良好，尤其是中剂量治疗组大鼠。故在以后进一步的机理研究实验中，抗炎止痛口服液的用药剂量选定中、小剂量为好。【参考文献】  1徐叔云，卞如濂，陈 修.药理学实验方法，第2版M.北京：人民卫生出版社，1991：716.2Ma Dong-lai,Li Jun,Chen Min-zhu,et,al.Inducement of adjuvant arthritis rats and study of their disorder immune functionJ. Chin J of experimental clinical immunology. 1995，7（3）：13.3叶任高.内科学M.北京：人民卫生出版社，2001：897.4Kuniak T, Karen AH, Robert AR, at al. Induction of arthritis with monoclonal