建立Alzheimer氏病动物模型方法的研究进展

1、建立Alzheimer氏病动物模型方法的研究进展                 关键词：Alzheimer氏病动物模型进展 摘要AD型痴呆占老年性痴呆50%以上，严重危害着老年人的健康。国内外许多学者进行了大量有关AD的研究，特别是近年关于AD疾病的研究日益受到国内外学者高度重视。建立一个可靠的模型是研究该病的关键。迄今为止尚无一个公认理想的AD模型，本文综述了六十年代以来有关AD模型建立方法的研究进展状况，阐明了各种方法的优缺点。

2、随着人口老龄化的发展，老年性疾患已成为一个明显影响人类健康突出的问题，其中老年性痴呆（Seniledementia,SD）是最常见的老年性疾病之一，它和恶性肿瘤、心脑血管意外并列为导致老年人死亡的三大疾病。据国外报道，SD患病率占老年人群4-5%，其中半数以上为Alzheimer氏病（简称AD）。国内报道，我国老年性痴呆患病率为4.36%，其中AD患者占2.8%1。AD是一种原发变性型老年性痴呆，其特点是发病年龄较早，多在65岁以前，故又称作早老年性痴呆，病程进展缓慢，主要表现为近期记忆力明显减退，在神经化学方面，往往多种神经递质系统受损。 自1906年德国神经病理学家AloisAlzheim

3、er发现AD以来，许多科学工作者进行了近一个世纪的潜心探究,从形态学、神经生物学和临床研究等方面做了大量工作，在AD的病理改变、发病机制及治疗等方面都取得了可喜的成绩。关于AD病因有下述多种学说：遗传学说2；微量元素学说，其中提出最多的是铝和硅3-4；神经递质学说，AD患者神经递质活动改变主要在海马、基底前脑核及大脑新皮质区。多数学者认为主要与乙酰胆碱能系统改变有关，其次为5-羟色氨能系统等5-6；免疫反应学说，可能是独立因素，也可能是与感染、遗传和环境中毒相关的继发因素，并提出与白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等有关7-8；慢病毒学说9；雌激素水平下降10。对上述病因学

4、说，诸多学者互有辗段闹姨醄建立Alzheimer氏病动物模型方法的研究进展 椋形抟恢氯鲜丁?临床上AD患者主要表现为大脑认知功能障碍，如健忘、记忆力和空间辨别能力减退以及反应迟钝等。关于AD的病理机制，目前较为明确的是：基底前脑核群内乙酰胆碱（ACh）能神经元的变性和丢失；患者脑内形成神经原纤维缠结；新皮质和海马结构内出现大量的淀粉样沉积，其数量的多寡与AD的严重程度呈正相关11。近年已从淀粉样沉积核心中分离和鉴别出一种肽类物质，称为-淀粉样肽（-AP或/A4蛋白）。-AP是-淀粉样前体蛋白（-APP）的病理性裂解产物，正常情况下不表达，在正常老年人有极少量的表达。（4）脑内形成AMY斑块。这

5、一病理改变是Trojanowski等人的最新发现，其与神经原纤维缠结、淀粉样沉积一起为AD病人的三大特征性病理改变12。由于AD疾病严重危害着老年人的健康，同时也给家庭和社会带来巨大的财政负担，因而，关于AD疾病的研究日益受到国内外学者高度重视。建立一个可靠的AD动物模型是研究AD的重要环节。有关AD动物模型建立的方法较多，各有利弊，本文将有关方法比较综术如下。 1化学损伤 1.1神经毒氨基酸损毁基底大细胞核（nucleusbasalismagnocellularis,NBM） 1980年Ben-An、1985年Sofroniew等分别报道用兴奋性神经毒氨基酸，如红藻氨酸（KA）、鹅膏蕈氨酸（

6、IBD）、使君子氨酸（QUIS）、N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）注入大鼠NBM，以损毁大鼠NBM建立痴呆模型13-15，随后国内外一些科研工作者采用上述方法建立了AD模型，并在此基础上进行了关于AD的一系列研究。1987年Dunnett等人用这四种神经毒氨基酸同时进行对比实验，结果表明使君子氨基酸特异性最高，对非胆碱能神经元损伤最小；KA对非胆碱能神经元损伤最大，且毒性作用是其它三种的2-3倍。使君子氨酸毒性作用相对缓和，剂量较易掌握，动物死亡率低，模型建立成功率高，因素基优于其它三种16。我们采用红藻氨酸进行实验证实了其毒性作用较强，很难掌握用量，动物易死亡，这与Dunnett等人的实

7、验结果是一致的。总的来看这些神经毒氨基酸都可导致NBM的胆碱能神经元变性和减少，继而引进相应大脑新皮质区的胆碱能纤维减少，细胞变性与死亡，胆碱能的标志酶ChAT和AChE含量下降，学习记忆行为减退，所以可以用来建立AD的模型。但有以下几个缺陷：无神经炎斑及神经纤维缠结的组织病理学改变17；神经毒氨基酸对非胆碱能神经元也有影响；ChAT的活性在海马末受影响；据报道神经毒氨基酸对乙酰胆碱系统的损伤可逆转18；业已证明AD病的基底核胆碱能神经元的丧失是逆行性引起的，即继发于大脑皮层的病理变化。1993年在第23届美国神经科学年会上Dunbar等也提出此种方法关非为AD的理想模型19。 1.2AF64

8、A（Ethylcholinemustardaziridiniumion） AF64A是一种特异的突触前胆碱毒。Mantione等人用AF64A注射入小鼠侧脑室进行其神经毒性的研究，发现AF64A可引起小鼠乙酰胆碱能系统的特异性损伤。如果用AF64A直接向大鼠背海马内注射，其对胆碱能神经系统的毒性较注入侧脑室强20。另有实验报道用AF64A直接向NBM注射，造成胆碱能功能损害来建立AD模型21。用AF64A制做的AD模型表现为胆碱能系统和记忆功能损害，但不影响非胆碱能神经元，这点优于兴奋性神经毒氨基酸。然而，用此方法也不出现老年斑和神经原纤维缠结形成的组织病理学改变。 1.3192IgG-Sap

9、orin 近年Lappi和Gary等人用192IgG-Saporin向大鼠侧脑室有前脑基底区注射进行有关AD的研究22-23。192IgG-Saporin是一种抗神经免疫毒。用其向大鼠脑内NBM注射，可选择性损害与基底前脑核有关的乙酰胆碱系统，如内侧隔区、斜角带，同时出现记忆减退的表现，但仍然不能出现AD所特有的其它组织病理学改变。 1.4喹啉酸（Quinolinicacid,QUIN） 喹啉酸是一种兴奋性神经毒素。1995年宋前流等人用其注入海马CAI区，通过其选择性破坏谷氨酸（Glu）能神经元，拟制成Glu能损毁的AD模型。本模型的制做是基于Maragos提出的AD-Glu假说24。喹啉酸

10、为Glu类似物，是脑内潜在的内源性兴奋性毒素25，当以较高浓度应用于细胞时，产生与海人酸和鹅膏蕈氨酸相似的病理和生化改变，实验表明，其可引起大鼠空间辨别能力和学习记忆障碍。但是它能否导致其它组织病理学改变未见文献报道。 1.5东莨菪碱（Scopolamine） 东莨菪碱是一种抗胆碱能药。东莨菪碱可阻断大脑皮层中的乙酰胆碱受体的结合位点，从而引起胆碱能系统功能障碍。Caulfield等将东莨菪碱注入小鼠、大鼠、猴等哺乳动物的侧脑室进行了有关乙酰胆碱功能及AD方面的研究26。与神经毒氨基酸和AF64A比较，此方法建立的AD模型主要是出现与AD一致的记忆、认知功能障碍，有关AD特有的组织病理学改变是

11、否发生未见文献报道：据文献提示东莨菪碱引起的胆碱能功能损害可逆转，而AD是一种慢性、进行性不可逆转的神经性疾病。所以用此方法不能完全模拟出AD的各种特征。 1.6铝元素中毒 正常人脑组织铝的含量1.8±0.8g/g（干重）或1.22g/g（湿重），正常大鼠脑内铝含量为1.1g/g（干重）27-28。已被公认，铝在体内一些部位的异常蓄积可产生毒性作用。早在1937年Scherp和Church就提出铝可引起神经元退化的看法28。1965年Klatzo和Terry等提出铝中毒可能与AD发病有关，他发现AD病人与铝中毒病人脑中均可见NFT3。此后1973年Crapper等人提出铝可能是神经毒素，他们给猫脑内直接注射铝盐，发现铝具有神经毒素样作用，导致神经纤维变性4。国内有学者采用给大鼠或小鼠腹腔注射及口服铝盐建立AD模