人参皂苷Rg1对慢性脑缺血致痴呆大鼠BDNF及受体TrKB表达的影响

1、 慢性脑缺血是临床上常见的脑损伤之一，是阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）、血管性痴呆（Vascular dementia，VD）和Binswanger（皮层下动脉硬化性脑病）病等多种疾病发展过程中的一个共同病理过程。发病早期以认知功能损害为主要表现，可构成持久或进展性的认知与神经功能障碍的病理生理学基础。 BDNF（脑源性神经营养因子）为神经营养因子家族中的一种，在神经元损伤后再生修复和防止神经细胞退行性变等多方面发挥重要作用。 异常的BDNFmRNA表达可能引起神经元营养不足并进一步带来认知方面的障碍。 人参的主要成分是人参皂苷。人参皂苷Rg1是皂苷的主要成分之一，具

2、有如下作用： 1. 人参皂苷Rg1抗氧化机制. 2. 人参皂苷Rg1抗凋亡机制。 3. 人参皂苷Rg1能够促进Ach（乙酰胆碱）释放，神经末梢重新摄取Ach。 4. 人参皂苷Rg1可以对tau蛋白的过度磷酸化产生影响。 1.研究目标研究目标 本实验通过永久性结扎大鼠双侧颈总动脉（2VO）制作出慢性脑缺血致痴呆的动物模型，经人参皂苷Rg1治疗一至四个月后观察大鼠的行为学变化及海马CA1区、CA3区BDNF（脑源性神经营养因子）及受体TrKB（酪氨酸激酶受体B ）表达的阳性细胞数，探讨人参皂苷Rg1对慢性脑缺血致痴呆大鼠的学习记忆障碍的改善作用。 2.研究内容研究内容 2.1慢性脑缺血的动物模型的

3、制备 2.2学习记忆能力的测定 2.3组织病理学测定 2.4 BDNF(脑源性神经营养因子)及受体TrKB（酪氨酸激酶受体B ）的免疫组织化学测定 2.5 RT-PCR 2.6 western blot（蛋白质印迹 ） 1. 本实验通过永久性结扎双侧颈总动脉（2VO）制作出慢性脑缺血的动物模型。是研究慢性脑缺血致痴呆的理想动物模型。 2. Morris水迷宫法进行大鼠学习记忆功能的行为学测定。定位航行实验：反映动物空间记忆的获得情况。空间探索实验：反映记忆的保持能力。 3. 首次研究了人参皂苷Rg1对认知功能及神经可塑性有重要作用的BDNF-TrKB信号传导通路的影响。1.动物模型制备通过永久

4、性结扎大鼠双侧颈总动脉（2VO）制作出慢性脑缺血的动物模型。假手术组除不结扎、不剪断双侧颈总动脉外，其余过程与手术组及治疗组相同。2.给药方式：Rg1治疗组给予腹腔内注射Rg1（5mg/kg），每天一次，连续注射。正常组、假手术组、模型组给予每日腹腔内注射生理盐水1毫升。3.学习记忆能力的测定利用Morris水迷宫方法检测不同时间点（术后1个月、2个月、3个月、4个月）各组大鼠（正常组、假手术组、模型组、Rg1治疗组）的学习记忆功能；术前各组大鼠先进行训练，测试程序为定位航行试验和空间探索试验。4.组织病理学测定通过HE染色，光镜观察各组大鼠海马CA1区、CA3区的组织病理学变化。 5.免疫组

5、织化学检测 免疫组化染色方法采用免疫组织化学方法连续检测各组、各时间点大鼠海马CA1区、CA3区的BDNF及受体TrKB的表达变化。测定阳性细胞数,进行定性和定量分析。 6. RT-PCR TRIZOL试剂提取取视交叉后4mm处至小脑的脑组织的总RNA，设计BDNF和TrKB特异性引物，用beta-acting作为内参探讨各组织中相关蛋白在mRNA水平的表达情况western blot 视交叉后4mm处至小脑的脑组织的总蛋白，行SDS-PAGE电泳，专膜至硝酸纤维膜，利用BDNF和TrKB特异性抗体，用beta-acting作为内参探讨相关蛋白在蛋白水平的表达情况。计划一年半内完成本项目的研究

6、2013年3月-2013年5月（1）实验动物的选择（2）分组前Morris水迷宫定向航行试验和空间探索试验（3）行2VO术完成慢性脑缺血大鼠的模型制备2013年5月-2013年7月（1）分组后Morris水迷宫定向航行试验和空间探索试验（2）继续饲养至慢性脑缺血后4个月2013年8月-2014年3月处死大鼠取脑组织进行如下检测：（1）组织病理学观察（2）免疫组织化学检测（3）RT-PCR检测和western blot检测2014年4月-2014年6月对实验结果进行分析，对治疗效果进行综合评价，并进一步改进。上述研究进程将根据实际情况进行调整9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3

7、-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:06:28 PM11、人总是珍惜为得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-6202

8、2-3-62022-3-615、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-6 研究工作基础：本项目组的成员长期从事神经病研究工作基础：本项目组的成员长期从事神经病学，内分泌学、生物化学等方面的工作，均具有学，内分泌学、生物化学等方面的工作，均具有硕士学位，能够从各方面为本项目提供了技术与硕士学位，能够从各方面为本项目提供了技术与

9、理论的支持。理论的支持。 现有条件：现有条件：黑龙江省医院和吉林大学第一医院可为本试验提供石蜡切片机、酶联免疫检测仪、放射免疫计数仪、PCR、低温高速离心机、高倍电镜等大型仪器设备，满足本项目实施所需要的人才资源和实验条件。能够保证本实验项目的完成。 实验动物及饲养 2.0万元 普通常规生化试剂 1.5万元 试剂 1.0万元 论文出版费 0.5万元 谢谢谢谢9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。22.3.622.3.6Sunday, March 06, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。*3/6/2022 8:06:28 PM11、人总是珍惜为得到。22.3.6*Mar-226-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。*Sunday, March 06, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。22.3.622.3.6*March 6, 202214