当归补血汤对高尿酸血症大鼠血管内皮细胞功能的影响

1、当归补血汤对高尿酸血症大鼠血管内皮细胞功能的影响                            作者：李亚芹，刘文敏，孙学江【摘要】  目的观察当归补血汤能否通过降低尿酸而改善大鼠血管内皮细胞功能。方法将40只大鼠随机分成对照组、模型组、组(低、中、高)剂量，模型组给予高尿酸饮食，对照组给予普通饮食，治疗组给予高尿酸饮食

2、的同时给予当归补血汤治疗(低、中、高)3个治疗剂量;14 d后分别测定各组大鼠血管内皮细胞所分泌的一氧化氮(NO)和一氧化氮和酶(NOS)含量，同时测定血清中尿酸含量、治疗组与模型组比较，观察各项指标有无统计学意义。结果与对照组相比：高尿酸血症组大鼠内皮细胞产生的NO，NOS均减少，有统计学意义(P<0.05)。治疗组与模型组相比较：给予当归补血汤治疗后血清尿酸水平降低，同时血管内皮细胞分泌的NO和NOS含量升高，其中中剂量组与模型组相比有显著的统计学意义(P<0.05)，低剂量和高剂量组与模型组相比无统计学意义。结论当归补血汤可以通过降低尿酸而改善血管内皮细胞功能。从而治疗冠心病

3、。 【关键词】  当归补血汤; 高尿酸血症; 内皮细胞功能当归补血汤源于金代李杲的内外伤辨惑论 ·景伤胃气论，全方由黄芪和当归按51组成，是传统的补气养血的代表方剂，主治劳倦内伤，气弱血虚，阳浮外越。在临床上用于劳累性心绞痛和心肌梗塞后正虚邪恶，气血双亏，心失所养等症1。该方应用广泛，但关于它对尿酸水平的影响的研究很少，本实验通过给予高尿酸血症大鼠当归补血汤治疗，一方面观察其对尿酸水平的影响，另一方面观察其对血管内皮细胞功能的影响。1 材料与方法1.1 实验动物Wistar 大鼠60只，雌雄各半，体重(250±10)g，由河北医科大学实验动物中心提供。合格证编号8

4、05108。1.2 实验药品腺嘌呤(Adenine)，批号H65821购自南京建成生物制品有限公司 ，乙胺丁醇片(Ethambutol),批号T08B524，购自杭州民生药业集团有限公司。当归补血汤，当归黄芪为51，由河北保定古城医药生产 。试剂盒均购自南京建成生物制品有限公司。1.3 实验仪器 双功能水浴恒温振荡器(型号：SHA-BA 产地：金坛市杰瑞尔电器有限公司);漩涡混匀器(型号IKA-MSZ 产地： IKA Works Guangzhou);低速台式离心机(型号 TDL-5-A,产地：上海安亭仪器厂);501-A型超级恒温器(产地：上海,实验仪器厂有限公司);Stat-Fax-210

5、0酶标仪(产地：Awareness technologying.);高速冷冻离心机(型号 GL-16G-型 产地：上海安亭科学仪器厂)。1.4 动物模型的制备高尿酸血症动物模型的建立采用腺嘌呤+乙胺丁醇法， 腺嘌呤100 mg·kg-1·d-1+乙胺丁醇250 mg·kg-1·d-1，溶于2 ml生理盐水中灌胃1次/d，共7 d，此种方法制造的模型尿酸水平稳定升高，乙胺丁醇的应用增加了尿酸在体内的蓄积2。2 方法将实验动物随机分成5组，对照组与模型组，治疗组(低、中、高3个治疗组)，各组动物均为雌雄各半。首先自由饮食1周，然后对照组给予普通饮食，模型组给

6、予高尿酸饮食，治疗组给予除高尿酸饮食外，同时给予当归补血汤，低、中、高3个剂量分别按3.0，6.0，12g/kg/d给予大鼠灌胃，1次/d，14 d后处死大鼠，腹主动脉取血，高速离心后取血清进行检测，同时留取主动脉血管内皮细胞，孵育后检测一氧化氮及一氧化氮合酶。2.1 检测指标及方法分别检测对照组、模型组与治疗组中血清尿酸水平，看造模是否成功，同时看当归补血汤对尿酸的影响。检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，看组织抗氧化情况及损伤的程度。取主动脉留取血管内皮细胞，检测一氧化氮(NO)的水平和一氧化氮合酶(NOS)的活性，各项指标的测定均采用酶联免疫吸附法，试剂盒均购自南

7、京建成生物制品有限公司，具体操作步骤见试剂盒说明书。2.2 统计学方法数据以(±s)表示，采用F检验，q检验，t检验，检验水准a=0.05。1         3 结果表1 对照组、模型组与组血清尿酸水平的比较对照组vs模型组，P<0.001;模型组vs低剂量组，P<0.001;中剂量vs模型组，P<0.001;高剂量vs模型组，P<0.001;低剂量vs中剂量，P<0.05;中剂量vs高剂量，P<0.05图1 各组血清尿酸水平柱状图以上结果表明，当归补血汤对降低血尿酸

8、水平有明显的疗效，低、中、高剂量组均有疗效。表2 各组血管内皮细胞分泌的NO、TNOS、iNOS水平的比较NO水平的统计学分析表明：模型组 vs对照组，P<0.01;模型组vs低剂量组，P>0.05;模型组vs中剂量组，P<0.05;模型组vs高剂量，P>0.05;低剂量vs中剂量，P<0.05;中剂量vs高剂量，P>0.05;TNOS及iNOS水平的统计学分析表明：模型组 vs对照组，P<0.05;模型组vs低剂量组，P>0.05;模型组vs中剂量，P<0.05;模型组vs高剂量，P>0.05;低剂量vs中剂量，P<0.01;

9、中剂量vs高剂量，P>0.05上述结果表明，高尿酸水平可以减低内皮功能，当归补血汤可以减低尿酸水平，从而改善内皮功能，其最合适的剂量为中剂量，低剂量和高剂量对内皮功能也有改善作用，但无显著性意义。4 讨论本实验结果表明，对高尿酸血症造成的血管内皮细胞功能的影响，本实验体现为血管内皮细胞分泌的NO水平及NOS活性的降低，治疗组分别给予当归补血汤(低、中、高)剂量治疗，14 d后分别观察血清尿酸水平及NO水平和NOS活性。通过统计学分析得出如下结论：与模型组相比，3种剂量组对血尿酸水平均有降低作用，但低剂量组和高剂量组对于尿酸水平的影响无统计学意义(P>0.05)，只有中剂量组有明显的

10、降低血尿酸水平的作用，有统计学意义(P<0.05)。同样，当归补血汤对于血管内皮细胞功能的影响，与模型组相比，观察NO水平和NOS活性，3个剂量组均有效，经治疗后其中中剂量组NO水平和NOS活性均增高，与模型组相比有统计学意义(P<0.05)，低剂量组和高剂量组也有升高NO水平和TNOS活性的作用，但与模型组相比无统计学意义(P>0.05)。 通过上述实验结果可以看出，当归补血汤有降低血尿酸的作用，并且通过降低血清尿酸水平可以改善血管内皮功能，3个剂量中，中剂量是最合适的治疗剂量。当归补血汤组方简单，黄芪当归可灵活配伍，达到益气补血活血的目的，疗效确切。临床上关于当归补血汤的

11、研究很多，雷燕等3研究表明，当归补血汤具有增加缺血心肌微血管密度和促进血管生成因子表达的作用，使血管密度增加，可能与其一起活血作用有关。而雷燕等4的临沂研究表明，当归补血汤有促进血管内皮细胞增殖的作用，其机制尚不明确。黄水清等5的研究表明，对于高脂血症及动脉粥样硬化家兔给予当归补血汤治疗后，当归补血汤具有较好地降低总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的作用，而且还可以通过调整血脂，使家兔动脉粥硬化的脂质斑块面积缩小，故有抗动脉粥样硬化的作用。动脉粥样硬化和高脂饲料喂养的动物血中超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化物酶的活性降低，而相应的过氧化脂质丙二醛(MDA)却升高6，给予当归补血汤治疗后，血清中MDA

12、明显降低，而SOD活力有明显的提高，SOD的提高对过氧化脂质MDA的清除有较大的作用，故SOD的升高和MDA的降低是当归补血汤的抗动脉粥样硬化的机制之一。本实验研究表明了当归补血汤可以通过降低水平而达到改善血管内皮细胞功能的作用。其机制可能与下列方面有关：尿酸可以阻滞细胞外过氧化氢对SOD的降解，SOD是维护内皮细胞 和血管功能的关键酶，可以催化过氧化氢和超氧阳离子反应，从而阻止NO的灭活，维护NO的浓度和维护内皮细胞的功能。所以尿酸增高可以导致血清中SOD降低7，而降低了尿酸水平就可以改善血管内皮细胞功能，这些作用可能与其益气活血作用有关。当归补血汤降低尿酸及改善血管内皮细胞功能的作用疗效肯

13、定，其机理复杂，有待进一步探讨。【】  1 张莹雯 谢 丹.当归补血汤对糖尿病大鼠肾组织的保护作用J.中成药，2005，27(1 ) ：75.2 谭 宁.高尿酸血症动物模型的研究进展J.医学理论与实践，2003，16(8)：896.3 雷 燕，王培利，林 燕.当归补血汤对实验性心肌梗死衰老大鼠缺血心肌的促血管生成作用J.中医基础医学杂志，2005，11(12)：123.4 雷 燕，高 清.当归补血汤促血管内皮细胞增殖作用的研究J.中国中西医结合杂志，2003，23(10)：753.5 黄水清，王 斌，王 剑.当归补血汤抗家兔动脉粥样硬化形成的实验研究J.北京中医药大学学报，2005，28(5)：38.6 Lankin VZ, Vikhert AM,