微生物免疫学实验报告

1、WORD格式授课进度第周，第次课2 学时授课日期年月日授课题目(教学章、 节细菌的形态学检查一或主题 )专业资料整理WORD格式教学目标教学重点教学难点教学方法教学手段讨论、思考题、作业学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。熟悉细菌的特殊构造。油镜的观察和使用油镜的观察和使用请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：实

2、物，多媒体， 投影，影像， CAI 课件， PPT，标本，挂图，模型，其他实验报告专业资料整理WORD格式参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病原生物学与免疫学实验及学习指导【M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式1 实验内容：2 显微镜油镜的使用与保护。3 细菌的形态与构造的观察。4 实验目的：5 学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。6 进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。7 熟悉细菌的特殊构造。8 实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的根本形态标本、细菌的特

3、殊构造标本。4 实验方法：(1) 显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精细局部，是观察细菌最重要的工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，防止损坏。1 识别油镜： 95、 100、 HI、 OeL。2 对光：自然光用平面反光镜， 人工光用凹面反光镜； 先用低倍镜对光， 次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。3、调节焦距：选一X细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。用左

4、眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。4、显微镜的保护：所有的光学局部构造都不能用手指、普通布擦拭， 用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。显微镜的光学局部应防止日光直射。防止接触强酸、强硷、氯仿、酒精。显微镜用毕， 将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。置于枯燥处，以防受潮。(二 )细菌形态观察1、细菌的根本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、专业资料整理WORD格式炭疽杆菌、结核杆

5、菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊构造：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌周毛菌芽胞：破伤风杆菌芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状专业资料整理WORD格式授课进度第周，第次课2学时授课日期年月日授课题目细菌的形态学检查二(教学章、 节或主题 )进一步了解细菌特殊构造在鉴别细菌过程中的实用意义。教学掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。目标革兰染色的操作法教学重点革兰染色的操作法教学难点请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，教学谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习方法法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视

6、唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：教学实物， 多媒体， 投影， 影像， CAI 课件， PPT，标本，手段挂图，模型，其他实验报告讨论、思考题、作业参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病原生物学与免疫学实验及学习指导【M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式一、实验内容：3 细菌标本片的制备操作4 革兰染色法操作二、实验目的：1 进一步了解细菌特殊构造在鉴别细菌过程中的实用意义。2 掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。三、实验材料：革兰

7、染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、生理盐水、玻片、接种环、酒精灯。四、实验方法：细菌标本片的制备操作1、涂片：点燃酒精灯；取干净玻片一X，右手持接种环一酒精灯火焰中消毒，稍冷后取12环生理盐水置于玻片中央；再次消毒后，用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许，在生理盐水中涂匀制成约1cm左右的薄膜，并将接种环再次消毒后，置于试管架中。2、枯燥：在室温中自然枯燥；天冷时可在酒精灯火焰上方略加温，不可高温加热，否那么，细菌被破坏后染色效果差。3、固定：右手持玻片一端，标本面向上，在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次，约2妙种。固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片粘附较严密。革兰

8、染色法操作1、初染：滴加结晶紫染液于标本上，以覆盖满为度，染1分钟后水洗，洒去积水。2、媒染：加鲁格碘液，媒染1分钟后水洗，洒去积水。7 脱色：加 95酒精脱色边加酒精边摇晃玻片，使酒精流去再加酒精，如此反复23次约 30妙钟后水洗，洒去积水。12 复染：加复红染液染 30妙钟后水洗， 洒去积水，待干或用吸水纸吸干后镜检。先低倍镜观察效果，再用高倍镜看清物象，滴加镜油后用油镜观察。结果 ： G菌呈紫色， G菌呈红色。专业资料整理WORD格式授课进度第周，第次课2学时授课日期年月日授课题目细菌的培养及代谢产物的检查(教学章、 节或主题 )熟悉细菌的培养方法，进一步掌握人工培养细菌的临床意义。教学

9、了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。目标培养基的制备教学重点细菌代谢产物教学难点请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，教学谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习方法法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：教学实物， 多媒体， 投影， 影像， CAI 课件， PPT，标本，手段挂图，模型，其他实验报告讨论、思考题、作业参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病原生物学与免疫学实验

10、及学习指导【M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式一、实验内容1、培养基的制备操作2、细菌的人工培养法操作3、细菌代谢产物观察示教4、药敏试验示教二、实验目的1、熟悉细菌的培养方法，进一步掌握人工培养细菌的临床意义。2、了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。三、实验材料牛肉膏、 蛋白胨、氯化钠、琼脂、 SS琼脂、蒸馏水、 1molNaOH、0.1 molNaOH、粗天平、 0.02%酚红指示剂、 pH比色器、无菌培养皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培养基、高压消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆菌菌液、乙型副伤寒杆菌

11、菌液等。四、实验方法培养基的制备操作1、培养基的制备程序称量溶化pH测定与矫正分装灭菌检定保存。2、液体培养基的制备1称量：称取牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g，置于 1000ml三角烧瓶中， 参加蒸馏水 1000ml 。2混合溶解：加热溶化，待冷至40" 50oC时，测定并矫正pH为 77.6 。3 pH测定与矫正方法：准备工作：取pH7.4 、 7.6 酚红标准比色管及蒸馏水管各1支，按图示装好；取口径与比色管一样的试管3支，各加待测液体基5ml，分别编上、号，按图示装好。 比色：将比色架对光目视比色，比较二排管的颜色是否一样，假设基为酸性一般呈酸性 ，那么向号管中加0

12、.02%酚红指示剂 0.25ml 摇匀，取 1ml吸管一支吸取 0.1 molNaOH1ml，缓慢滴入号管内，边加边摇匀，直至与标准管其中一侧颜色一样，准确记录NaOH的用量。计算：5ml 基矫正至 pH7.6 用去 0.1 molNaOH0.2ml，剩余的培养基那么需参加1 molNaOH为Xml。用比例公式计算。N1： V1 N2：V25： 975 0.2 ： XX 0.2*975/5=39(ml)专业资料整理WORD格式0.1 molNaOH 需要 39ml，而加 1 molNaOH只需 3.9ml 。4分装： 分装十适当容器内试管，包装好，高压蒸气灭菌后备用。细菌的人工培养法操作1、平

13、板划线接种法：1点燃酒精灯，右手以握笔式持接种环，在火焰上灭菌后稍冷，挑取葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液一环。2用左手掌持琼脂平板，以左手拇指将平板盖启开，右手将取了菌液的接种环伸入平板，呈45O角，用分段划线法别离细菌如下列图，盖好平板。3于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37OC温箱中培养 24h后，观察结果。2、液体培养基接种法：左手持液体培养基， 按照平板划线取葡萄球菌少许，用右手小指拔开棉塞， 夹于指间示教，并将管口在火焰上灭菌，将细菌接种于液体培养基内。再次灭菌管口， 塞好棉塞。贴上标签，置于 37OC温箱中培养 24h后，观察结果。细菌代谢产物观察示教1、糖发酵

14、试验：细菌分解糖后产酸产气，产酸后使批示剂显色，产气后可见到气泡。产酸产气以 “表示，只产酸不产气以“ 表示，不分解以“ 表示。大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下：菌种葡萄糖乳糖大肠杆菌伤寒杆菌2、硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢气体。硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐反响，形成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，为阳性，无黑色沉淀为阴性。大肠杆菌硫化氢试验为阴性，乙型副伤寒杆菌为阳性。药敏试验示教1、平板划线：1用密集划线法将细菌布满平板，方法同平板划线接种法。2在无菌接种箱内，用左手启开平板盖，用无菌镊子夹取抗菌素纸片，间隔 5cm放置平板培养基外表，盖好平板，贴上标签，置于37

15、OC温箱中培养 24h后，观察结果。3结果：观察抑菌区有无，测量抑菌区的直径。直径<5mm为阴性 ( 不敏感 ) 、直径 5" 10mm专业资料整理WORD格式为轻度敏感、直径10" 15mm为中度敏感、直径>15mm为高度敏感。专业资料整理WORD格式授课进度第周，第次课2 学时授课日期年月日专业资料整理WORD格式授课题目专业资料整理WORD格式(教学章、 节细菌的分布与消毒灭菌检查专业资料整理WORD格式或主题 )专业资料整理WORD格式证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在，以树立严格的消毒及无菌观念。教学了解常用消毒灭菌器械的使用方法，初步掌握紫外线

16、的灭菌方法护本卷须知。目标细菌的检查及消毒灭菌器械的使用方法教学重点灭菌方法使用时的本卷须知教学难点请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，教学谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习方法法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：教学实物， 多媒体， 投影， 影像， CAI 课件， PPT，标本，手段挂图，模型，其他实验报告讨论、思考题、作业参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病

17、原生物学与免疫学实验及学习指导【M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式一、实验内容1、空气中细菌的检查操作2、皮肤消毒试验操作3、咽喉部细菌的检查操作4、常用消毒灭菌器械的使用示教二、实验目的1、证明在自然界和正常人体体表有许多细菌存在，以树立严格的消毒及无菌观念。2、了解常用消毒灭菌器械的使用方法，初步掌握紫外线的灭菌方法护本卷须知。三、实验材料普通琼脂平板、 SS琼脂平板、 血平板、接种环、 酒精灯、 高压消毒灭菌器、干烤箱、 紫外线、大肠杆菌培养液、1龙胆紫、 2.5 碘酒， 75乙醇、无菌棉签、镊子等。四、实验方法空气中细菌的检查操作1、取普通琼脂平板4个

18、，启开皿盖，培养基面向上，分别放在实验室、寝室、室外及无菌操作台等处，暴露10" 20min 后加盖。2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37OC温箱中培养 24h后，观察结果。3、结果：如实填写。皮肤消毒试验操作1、取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分区并标号，启开皿盖，用右手食指轻轻涂抹培养基外表。2、用 2.5 碘酒消毒右手食指后，再用消毒后的手食指轻轻涂抹培养基外表，加盖。3、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37OC温箱中培养 24h后，观察结果。4、结果：如实填写。咽喉部细菌的检查操作1、取血平板 1个，启开皿盖，口对培

19、养基外表距离约10cm，深咳嗽三次不可吹痰，加盖。2、于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于O后，37 C温箱中培养 24h观察结果。专业资料整理WORD格式3、结果：如实填写。常用消毒灭菌器械的使用示教、介绍1、紫外线杀菌试验点燃酒精灯，取普通琼脂平板1个，在底部用玻璃蜡笔划线分出二个区并标号，启开皿盖，右手持接种环在火焰上灭菌后，稍冷，取大肠杆菌培养液一环，密集划线，加盖。将培养基置于无菌接种箱内， 启开皿盖，将盖子盖于培养基上的一半， 翻开紫外线灯开头，照射 30min后，加盖。于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37OC温箱中培养 24h后，观察结

20、果。结果：如实填写。2、手提式高压蒸气灭菌器介绍构造：略用法：加水至规定的水平面、放入灭菌物品，加盖、旋紧，翻开排气阀；通电加热、温度逐渐上升时，器内冷空气由排气阀排出，待有大量蒸气逸出时，关闭排气阀，继续加热，直到压力表的指针指在所需的位置后，调节电源，控制温度，维持20" 30min 后，翻开排气阀排气，待压力表指针指向“0时，再开盖取物。本卷须知：灭菌开场时必须排尽冷空气；灭菌完毕，切不可突然翻开盖子排气减压，以免瓶内液体等冲出外溢；放置物品不应太挤。用途：用于耐高温和不怕潮湿的物品灭菌。专业资料整理WORD格式授课进度第周，第次课2 学时授课日期年月日授课题目(教学章、 节病

21、原性球菌的检查或主题 )通过实验让学生掌握病原性球菌的形态、染色特性。了解脓汁标本的病原性球菌教学的别离鉴定的程序。了解抗“O试验的原理、方法及临床意义。目标1、病原性球菌标本的观察。专业资料整理WORD格式教学重点教学难点教学方法教学手段讨论、思考题、作业2、脓汁标本中病原性球菌的别离鉴定的程序。3、抗“O试验抗“O试验的原理请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：实

22、物， 多媒体， 投影， 影像， CAI 课件， PPT，标本，挂图，模型，其他 实验报告专业资料整理WORD格式参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病原生物学与免疫学实验及学习指导【M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式病原性球菌的检查实验目的：1 掌握病原性球菌的形态、染色特性。2 了解脓汁标本的病原性球菌的别离鉴定的程序。3 了解抗“O试验的原理、方法及临床意义。实验内容：1、病原性球菌标本的观察。2、脓汁标本中病原性球菌的别离鉴定的程序。3、抗“O试验实验材料：显微镜、细菌标本、玻片、试

23、管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、2.5%碘酒、棉签、生理盐水、血平板、兔血浆、抗“O试剂、血平板。实验方法：(2) 病原性球菌标本的观察1、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌、淋球菌的形态观察操作。2、葡萄球菌、链球菌溶血现象观察示教。(4) 脓汁标本中病原性球菌的别离鉴定的程序直接涂片革兰染色镜检脓汁标本观察菌特征及溶液血情况接种血平板 24h 培养后观察取菌落涂片革兰染色镜检取菌落作生化反响、致病力试验(5) 抗“O试验原理：乙型溶血性链球菌能产生溶血素“O，能溶液解人和兔红细胞并有很强的抗原性，能刺激机体产生抗溶血素“O抗体。抗溶血素 “O能中和溶血素“O的溶血作用。 本法是将病人

24、血清与溶血素“O抗原先混合，作用一段时间后，再参加红细胞悬液。假设红细胞不被溶解为阳性，溶解为阴性。方法：1、取小试管 6支，分别编号，分两排置于试管架上1-3为第一排， 4-6为第二排。2、第一排试管加待检血清(0.25ml) 分别稀释为 200、 400、 800倍；第二排试管加待检血专业资料整理WORD格式清 (0.25ml) 分别稀释 300、 600、 1200倍。3、分别加链球菌溶血素“O抗原 0.25ml ，充分混匀，置于37oC水浴箱中 10min 。7 分别加 5%红细胞悬液 0.25ml ，充分混匀，置 37oC水浴箱中 30min 后观察结果。结果：以完全不溶液血的血清最

25、高稀释度为抗“O抗体的效价。正常值为 500单位以下。用途：600单位及以上有诊断意义，用于辅助诊断活动性风湿。(四 ) 血浆凝固酶试验3 取玻片一X，加生理盐水一环。用接种环取葡萄球菌少许，混匀。4 加血浆一滴、混匀，数分钟后观察结果。出现颗粒状凝集的为阳性、反之为阴性。专业资料整理WORD格式授课进度第周，第次课2 学时授课日期年月日授课题目肠道杆菌的检查(教学章、 节或主题 )通过实验让学生掌握肠道杆菌的形态、染色特性。了解肠道杆菌的别离鉴定的程教学序。了解肥达试验的原理、方法及临床意义。目标1、肠道杆菌形态标本的观察。专业资料整理WORD格式教学重点教学难点教学方法教学手段讨论、思考题

26、、作业2、肠道杆菌的别离鉴定程序。3、肥达试验。肥达试验的原理方法及结果分析请选择你授课时所采用的教学方法在括号中画“：讲授法，讨论法，演示法，案例法，发现法，探究法，谈话法，实验法 ，参观法，考察法，自学辅导法，练习法习题或操作课，读书指导法，听说法，写生法，视唱法，工序法技能课，实习作业法，其他请选择你授课时所采用的教学手段在括号中画“：实物， 多媒体， 投影， 影像， CAI 课件， PPT，标本，挂图，模型，其他 实验报告专业资料整理WORD格式参考(1) 杨致邦，叶彬 . 病原生物学与免疫学实验【M】 . .科学 .2021年 .(2) 潘丽红 . 病原生物学与免疫学实验及学习指导【

27、M 】.中国科学技术大学，文献2021年 .专业资料整理WORD格式肠道杆菌的检查实验目的：1、 掌握肠道杆菌的形态、染色特性。2、 了解肠道杆菌的别离鉴定的程序。3、 了解肥达试验的原理、方法及临床意义。实验内容：1、肠道杆菌形态标本的观察。2、肠道杆菌的别离鉴定程序。3、肥达试验。实验材料：显微镜、细菌标本、玻片、试管、试管架、吸管、水浴箱、注射器、2.5%碘酒、棉签、生理盐水、 SS 培养基、患者血清1： 10 稀释、伤寒杆菌O 菌液、 H 菌液、甲、乙型副伤寒H 菌液。实验方法：一、肠道杆菌的形态观察【材料】大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌革兰染色示教片。【方法】注意上述肠道杆菌

28、形态、排列、 染色的共同点， 故肠道杆菌的染色镜检不能做为肠道杆菌之间的鉴别依据。专业资料整理WORD格式二、肠道杆菌培养物与生化反响观察【材料】大肠杆菌、 变形杆菌、 痢疾杆菌、 伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在尿素及蛋白胨水培养基上24小时培养物。【方法】1、观察大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在SS培养基、双糖铁、EMB培养基上生长情专业资料整理WORD格式况，注意菌落的形态、大小、颜色及透明度。表 1 五种肠道杆菌在 SS培养基上的菌落特征菌种伤 寒 沙乙型副伤寒大肠杆菌变形杆菌痢疾杆菌门菌沙门菌培养基菌落红色菌落无色半菌 落 无同伤寒杆菌同伤寒杆S.S或呈红色透明，有

29、时带色，半透菌落，菌落菌菌落。专业资料整理WORD格式琼脂平板之中心， 不黑心，直径明，直径可带黑心。透明， 直径2mm左右，有2mm 左2-3mm左右时呈膜状生右。长。小 至 中无色或半菌落扁平，圆形菌落，扁等 透 明透明，光滑EMB紫黑色， 具平，无色或半或 半 透不发酵乳有金属光透明，似沙门明，不发糖，中等大泽菌酵乳糖小2、观察大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌在双糖铁、尿素及蛋白胨水培养基上生长情况，注意生化反响与动力的鉴别。表2五种肠道杆菌生化反响与动力鉴别表生化反应菌 名动力葡萄糖乳糖H2S尿素靛基质大肠杆菌-+变形杆菌-+/-+/-+副伤寒乙杆菌-+-+伤寒杆

30、菌+-/+-+痢疾杆菌+-+/-三、粪便标本中肠道杆菌的别离鉴定一标本采集尽可能在发病早期或治疗前采集新鲜粪便， 选取脓血或粘液局部， 取材后应立即送检。 如不能立即送检，可将标本保存于 30%甘油缓冲盐水中。二检验程序专业资料整理WORD格式肠道杆菌检验程序三检验方法：1、别离培养【材料】新鲜粪便标本、SS琼脂平板。【方法】按上述检验程序进展第一日的检验步骤，即用接种环挑取新鲜粪便标本，划线接种于EMB或SS平板上， 37培养 24小时。【结果】观察平板上菌落， 依据其大小、 颜色、透明度等特点， 初步识别可疑病原菌菌落， 进展鉴定。在EMB平板上非致病菌菌落较大、 紫黑色、 有金属光泽，

31、不透明， 而可疑菌落略小， 半透明。2、初步鉴定【材料】双糖铁培养基【方法】用接种针从可疑病原菌菌落中心点取细菌， 穿刺接种双糖铁培养基 Kligler 培养基，37培养 18-24 小时后，观察结果，并据此判定细菌属性。【结果】上层下层动力H2S+-+-非致病菌-+-痢疾杆菌-+伤寒杆菌-+副伤寒杆菌【用途】初步鉴别肠道致病菌用，可以观察葡萄糖、乳糖的发酵，并可观察有无H2S产生及细菌有无动力。【原理】克氏双糖铁培养基中含有葡萄糖、乳糖、 硫酸亚铁及酚红指示剂等成分。经菌分解葡萄糖产酸时， 使培养基的下层由红变黄，斜面培养基中虽然也含有葡萄糖但量小，且分解产生的酸为挥发性酸并且可被氧化， 所

32、以只发酵葡萄糖的细菌斜面仍为红色；产酸并产气时， 培养基专业资料整理WORD格式中有气泡或裂隙出现。培养基中乳糖含量大，被分解后产酸多，因此不仅培养基下层变黄，而且斜面处也由红变黄，基于上述现象， 通常将培养基的斜面局部代表乳糖，下层局部代表葡萄糖。培养基中含有硫酸亚铁，如有硫化氢产生，那么生成黑色硫化亚铁，使培养基中出现黑色。硫代硫酸钠是一种复原剂，防止培养基中氧化物与H2S作用而影响 FeS的生成。3、血清学鉴定【材料】沙门菌属、志贺菌属多价诊断血清，生理盐水，载玻片等。【方法】1根据初步鉴定结果，选用相应诊断血清做玻片凝集试验。用接种环自双糖铁培养基上挑取少许菌苔，分别磨匀于生理盐水与相

33、应诊断血清中，摇动玻片1-2 分钟，观察结果生理盐水诊断血清+细菌细菌（ 2凝集试验阳性者，报告结果；凝集试验阴性者应保存菌种进一步鉴定。【思考题】1、肠道杆菌有何共同特征？2、大肠、变形、痢疾、伤寒杆菌及乙型副伤寒杆菌的鉴别要点是什么？3、如果大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌和痢疾杆菌混杂在肉汤培养基中，你怎样把它们别离出来，使各自成为纯培养物"【附注】痢疾杆菌荧光菌球试验【原理】将相应抗体加在痢疾杆菌的培养液中，虽相互结合， 但细菌不被杀死，在适宜温度下仍能生长，形成痢疾杆菌微小菌团。如在抗体上标记荧光，那么形成痢疾杆菌荧光菌球。【材料与方法】1. 将痢疾杆菌接种于含有一定量的

34、荧光抗体的蛋白胨水中，37培养 10小时。2. 蘸取上述培养物接种环于清法玻片上，放上盖玻片，在荧光显微镜下观察。【结果】荧光球大而发亮呈圆球状， 构造较疏松， 周围近似卷发状。 随孵育时间增长， 菌球构造致密，周围较圆，整齐，菌球周围有刺毛，孵育时间短时，菌球往往呈多形性。肥达反响专业资料整理WORD格式【方法】1. 取清洁小试管 32支，分成 4排，每排 8支，依次编号。2. 于小试管内各注入 0.5ml 生理盐水。3. 于每一排第一管内参加 1：10稀释的患者血清 0.5ml ，用 1ml 吸管吹吸三次， 混匀，吸出 0.5ml专业资料整理WORD格式注入第二管作对倍稀释，, 依次稀释至第7管，弃去0.5ml，第 8管为对照。专业