试剂作用-汇总

1、精选优质文档-倾情为你奉上试剂 1.DTT二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-。二硫苏糖醇 分子结构式DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥。这是因为只有脱去的盐负离子（-S）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为8.3 2.TrisTris为，在25下，它的为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在7.0到9.2之间。T

2、ris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成，则获得“”（Tris/Acetate/EDTA），而换成则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸实验中Tris常用作生物缓冲液，常配成pH值为6.8，7.4，8.0，8.8。其pH值随温度变化很大。一般来说，温度每升高一度

3、，PH值下降0.03。1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是最常用的试剂。而由Tris配成的TAE，TBE等是DNA电泳最常用的试剂，TE（pH8.0）主要用于溶解DNA。（TE为 Tris加EDTA合称。）3.Edta可螯合金属离子，减弱dnase活性（DNase I活性依赖于钙离子，并能被或二价锰离子激活。存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成，或1-2个核苷酸突出的粘末端。辅因子：Ca2+活化剂：Mg2+抑制剂：EDTA (可逆的)4.SdsSDS是一种已知的能够使的去污

4、剂。它用于确定蛋白分子量的。它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞及裂解（核酸：蛋白复合物）。在较高温度下，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来。5.DAPIDAPI 为一种，可以穿透细胞膜与中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。6.Strep-tag技术开发的原理是众所周知的生物素（biotin）和抗生物素蛋白链菌素（streptavidin）之间的结合反应。为了将这种牢固的相互作用用于蛋白质纯化用途，研究者们发现需要一个肽，该肽与重组蛋白质融合后，能够结合在streptavidin的生物素结合口袋，从而

5、作为纯化tag。最后研究者们成功设计出一个只由8个氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)构成的短序列并称之为Strep-tag IIThe Strep-tag is a synthetic  consisting of eight  (-).  This peptide sequence exhibits intrinsic affinity towards Strep-Tactin, a specifically engineered  7.HA标签系统利用一个HA (流感病毒血

6、凝素，influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的HA标签抗体也被广泛应用。HA 标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白，也可以用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测HA tag融合表达蛋白等。8loading buffer 中文名字叫上样,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫兰色的条带是，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0

7、.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同；后面的兰色条带是二甲苯青，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂和二甲苯氰FF起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的。细胞裂解后的裂解液，加load

8、ing 100加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的。6×loading buffer 一般配置：30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于DNA电泳9BrdU5-溴脱氧尿嘧啶核苷可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。10LB培养基液态根据（J.萨姆D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950

9、ml去离子水中加入:10g5gNaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.固态LB固体培养基1L和液体一样，加10g15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板1.配制：100mlLB培养基加入11.5g琼脂粉2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55的水浴中，待培养基温度降到55时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。3.倒板：一般15ml-20ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4保存，一个月内使用。ph值需要控制在7.411.胰