金花茶组植物化学成分的定量分析

1、金花茶组植物化学成分的定量分析                  作者：唐前 罗燕英 黄连冬 陆敏珠 唐玲 史丽颖 冯宝民 王永奇    【摘要】  目的测定金花茶、毛瓣金花茶、凹脉金花茶、四季金花茶、薄叶金花茶不同植物部位中总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量。方法采用紫外分光光度法。结果其总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量依次为：金花茶花蕾醇提物：21.30%、

2、6.56%（0.34%）、21.76%；叶子醇提物：43.24%、3.95%（1.57%）、0.93%；叶子水提物：9.91%、6.69%（1.34%）、5.19%；种子醇提物：13.53%、5.88%（0.83%）、6.85%。毛瓣金花茶叶子醇提物：43.49%、6.79%（1.65%）、1.54%。 凹脉金花茶叶子醇提物：36.29%、13.19%（5.33%）、1.12%；种子醇提物：20.58%、5.29%（0.14%）、0.33%。四季金花茶叶子醇提物：35.90%、7.01%（0.47%）、0.78%。薄叶金花茶叶子醇提物：30.08%、7.57%（0.19%），0.82%。结论紫

3、外分光光度法测定以上3种物质简便易行，准确可靠，重复性和回收率都较理想。 【关键词】  金花茶组植物 总皂苷 总多酚（鞣质） 总黄酮    Abstract:ObjectiveTo determine the chemical constituents of total saponin, total polyphenol (tannin) and total flavonoids in Section Chrysantha Chang. MethodsTheir contents were determined by spectrophotometry.

4、ResultsThe contents of total saponin,total polyphenol ( tannin) and total flavonoids were：21.30%,6.56%（0.34%）,21.76%； 43.24%,3.95%（1.57%）,0.93%； 9.91%,6.69%（1.34%）,5.19%； 13.53%,5.88%（0.83%）,6.85%；43.49%,6.79%（1.65%）,1.54%；36.29%,13.19%（5.33%）,1.12%； 20.58%,5.29%（0.14%）,0.33%；35.90%,7.01%（0.47%）,0.7

5、8%；30.08%,7.57%（0.19%）,0.82% respectively.ConclusionThe method is convenient and reliable to determine the three substances, and the reproducibility and the recovery are fairly good.    Key words:Section Chrysantha Chang;  Total saponin;  Total polyphenol（tannin）;  Tota

6、l flavonoids    20世纪60年代初，在我国广西首次发现黄色山茶属植物金花茶Camellia chrysantha (Hu)Tuyama,震惊世界。到目前为止，已发现并命名的黄花山茶属植物已达32种5变种，1998年张宏光教授将其归类为金花茶组。其中除越南与广西接壤的北部有3种，云南、贵州、四川各有1种外，其余26种、5变种均产于我国广西南部和西南部的亚热带南缘和热带北缘地区。90%分布于，80%分布于广西，说明中国是金花茶组植物的特产国，而广西是金花茶组的特产区。    但因为金花茶组植物发现较晚，加之分类上争议时间较

7、长，所以尽管在园林、花卉界轰动较大，亦被国家列为珍稀保护植物，但对它的研究甚少。本文以皂苷、多酚、黄酮类成分为指标，对其中产量大、资源较丰富的5种金花茶组植物化学成分进行了分析测定。现报道如下。    1  仪器与试药    1.1  仪器Unico7200可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司); Laborata 4000 型旋转蒸发仪( Heidolph 公司) ;BP210S 十万分之一天平(Sartorius 公司) ; Jasco v2560紫外可见分光光度计(JASCO 日本分光株式会社) 。

8、0;   2  方法与结果    2.1  总皂苷的含量测定1    2.2  多元酚及鞣质的含量测定2,31             2.3  总黄酮的含量测定4,5    对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的对照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为0.2 mg/ml的对照品溶液，备用。

9、60;   供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏 G(g), 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 得 H(mg·ml- 1)的溶液, 备用。表3  金花茶总酚和鞣质的实验数据表4  总酚和鞣质含量测定结果测定波长的选择：对照品溶液和供试品溶液NaNO2- AlCl3 显色后, 在紫外可见分光光度上, 波长200600 nm 区间扫描。均在400 nm 处有最大吸收, 因此选择400 nm 为测定波长。测得的结果以对照品为基准计算总黄酮的含量。    线性关系考察：精密吸取对照品

10、溶液 0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50 ml，各加甲醇至4.0 ml，再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.3 ml,摇匀，室温放置6 min，再加10% AlCl3溶液0.3 ml,摇匀，室温放置10 min，在400 nm波长下测定吸光度A，同时以试剂空白做参比。以吸光度A为纵坐标，浓度C（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程A=15.065C+0.002 6,R2=0.999 9 线性范围：0.0130.065 2 mg/ml。    重复性实验：精确吸取 I（ml） 的供试品溶液, 置于试管中, 加入甲醇至4.0

11、 ml , 按照标准曲线项下的方法操作, 测定吸光度, 平行做5次实验, 代入回归方程, 计算总黄酮的含量。G 、H 、I的数据见表5。结果见表6。表5  金花茶总黄酮的实验数据表6  总黄酮含量测定结果    对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的芦丁对照品20 mg, 置100 ml 容量瓶中, 加入甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 得浓度为0.2 mg·ml- 1 的对照品溶液, 备用。    供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏J(g), 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻

12、度, 摇匀, 得K(mg·ml- 1)的溶液, 备用。    测定波长的选择：芦丁对照品溶液和供试品溶液NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色后, 在紫外可见分光光度上, 波长200600 nm 区间扫描。均在500 nm 处有最大吸收, 因此选择500 nm 为测定波长。测得的结果以芦丁为基准计算总黄酮的含量。    重复性实验：精确吸取1.0 ml 的供试品溶液, 置于试管中, 加入甲醇至2.0 ml , 按照标准曲线项下的方法操作,测定吸光度, 平行做5次实验, 代入回归方程, 计算总黄酮的含量。J，K，L的数据

13、见表7。结果见表8。表7  金花茶总黄酮的实验数据表8  总黄酮含量测定结果%    3  讨论    3.1  总黄酮含量测定方法的选择经大量的调研表明，采用可见分光光度法测定总黄酮的含量是比较成熟的方法，此方法稳定性好，准确度高，且简便快捷，易于操作，结果可靠，故选择了采用分光光度法测定金花茶提取物中总黄酮的含量。    3.2  皂苷含量测定方法的选择皂苷的分析测定有多种方法，如沉淀法、溶血指数法、层析法等，沉淀法测定往往易带进杂质或导致皂苷变质；层

14、析法一般可以分离出总皂苷，但对总含量测定不适，误差大，成本高，而分光光度法操作简便、灵敏，属于经典、成熟的方法，我们选择了与金花茶皂苷类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照品，采用分光光度法测定其总皂苷的含量。    3.3  鞣质测定方法的选择鞣质的经典含量测定方法有很多种，如重量法、容量法、比色法等。以前最常用的有皮粉法、高锰酸钾法、络合定量法。2005年版以前的药典部2鞣质含量测定法一直沿用皮粉法。但是其缺点是耗用样品多，测定时间长，且没有选择性，测定结果偏高，而且皮粉用量很大，而2005年版中国药典部鞣质测定法，以没食子酸为对照品稳定性好，干酪素的吸附作用具有专属性，其方法操作简便，用时短，且重复性和回收率都较理想。 【文献】  1 高声传，郭 涛，夏维杰，等比色法测定酸枣仁提取物中总