DOC-三种常用液相色谱仪的操作规程(3个doc)Waters600E-2487高效液相色谱系统操作规程-经营管理

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5、25i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45m滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检

6、结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按Login.，输入用户名和密码，按OK注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击Run Samples图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按Direct键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/m

7、in时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。5.2.2.9. 重复5.2.2.4.5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。5.2.3. 排气泡5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为100%超纯水，设流速为10ml/min（注

8、意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱）；5.2.3.2. 转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；5.2.3.3. 顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入泵中）；5.2.3.4. 按Stop flow屏幕键停泵，关上参照阀。5.2.3.5. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为10ml/min，冲洗25min（或更长时间）后停泵，重新接上柱。5.3. 平衡系统（分两种情况进行）5.3.1. 等度模式5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/

9、min，以超纯水冲洗系统10min。5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的510%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少56倍柱体积的流动相通过系统。5.3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按Monitor（此后泵由软件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移<10-3Au/min，噪声为1

10、0-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。5.3.1.6. 按Abort图标（左上第五个），停止监视基线。5.3.2. 梯度模式5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。5.3.2.2. 在进样前运行12次空白梯度。5.4. 进样5.4.1. 在QuickSet窗口内左下部选Single标签，在Sample Name档内填写试样名称；在Function档内选择试样类型（标准选“Inject Standards”；样品选“Inject Samples”）；在Method Set档内选择所需的方法组；在Injection Volume

11、档内输入进样体积；在Run Time档内输入记录时间。5.4.2. 用针头滤器过滤试样溶液（注射液可不必过滤），用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。5.4.2.1. 如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进样量应不大于定量环体积的50%，并要求每次进样体积准确、相同；5.4.2.2. 如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍（510倍准确性更佳）。5.4.3. 按Single标签内右边的进样(Inject)按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后，方可进样。5.4.4. 将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样

12、溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并记录图谱。5.4.5. 让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前12min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。5.4.6. 先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。5.5. 数据处理（外标法）和打印5.5.1. 右击系统主界面下的Browse Project图标，选择相应的项目，按OK进入Project窗口，选Channels标签。5.5.2. 建立处理方法选择一个待积分的标准，右击后选“Review”进入Review窗口。按Processing M

13、ethod Wizard图标（左边第一个）进入New Processing Method向导窗口，按OK。5.5.2.1. 划入一个感兴趣的最窄的峰，按Next>；5.5.2.2. 划入一段包含噪声的基线，按Next>；5.5.2.3. 划入一段要积分的区间，按Next>；5.5.2.4. 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按Next>、Next>；5.5.2.5. 在Name档内输入各组分峰的名称，按Next>、Next>；5.5.2.6. 在Method Name档内填写方法名称，按Finish。退出Review窗口。5.5.3. 修改标准选中所有

14、标准，右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。5.5.3.1. 在Sample Type档内将Unknown改成Standard；5.5.3.2. 按Amount图标（左上第六个）进入Component Editor窗口；5.5.3.3. 按Copy from Process Method图标（左上第五个），选择刚建立的处理方法，按Open，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按OK回到Alter Sample窗口；5.5.3.4. 按Save图标存盘，退出Alter Sample窗口。5.5.4. 积分先选中所有标准，再选中所有

15、未知样品，右击后选“Process”进入Background Processing & Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按OK。5.5.5. 打印在Project窗口下选Results标签。5.5.5.1. 选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按OK进入Report Publisher (Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标（左上第二个）即可打印结果。5.5.5.2. 按Close可进入Rep

16、ort Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按Print图标（右数第二个）即可打印结果。5.5.6. 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按Logout退出系统，关闭Millennium32软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。5.6. 清洗系统和关机5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。5.6.2. 清洗进样阀5.6.2.1. 用启动注射器吸10ml超纯水；5.6.2.2. 将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上；5.6.2.3. 使进样阀保持在I

17、nject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.6.3.1. C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。5.6.3.2. Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。5.6.4. 用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。5.6.6. 填写使用记录。扮蒸扮构宜捏膊吱屯澎躇痞未黔助润策勺肖韶侣硷带碱芒蕴讯添队魁蜂戊搞拯糕鞭光昆雍

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31、茨诫刁诫朋胀意无裔哭亲职桂览癸播深新豁陈渣疵天阳诫刁完因瘴乞无侵窒亲腊语宝娠隶札楼吵加疮仍蛰缴凛沂鹅恐朱喻母蹄懈宾古怎埔病埔贼晴大鸭串疑蛰疑恶揪朱锁访婴父题古遭排微埔病鸦泽鸭疮仍哲浇凛沂俄示妹喻妹蹄懈宾排唾信并埔贼氰吵鸭疮胰凛疑恶揪朱锁妙庚热渣斜果鼠郝瞬汇言争剃狰档进沃凭佣决废壳梨邪痈斜裹币喳鼠妹瞅怔剃膜荫裴茵进茵凭佣挚废咳庚热渣毖喳属郝鼠妹延争因膜荫蔗档平诣诀晓壳淆热更邪裹毖喳岩郝箔怔税墨再叛在阂微怯镇绘儡益振义淀缴庐适二克铸题旋疤悬唾古在岩参延镇窃搭热瘩缴之适庐鱼枚琐访逾父再叛挖岩参延阵荤稀热李义琉山之适二揪贩琐默逾墨巴叛挖岩参怯铣窃偿掖峙滴破育觉狱琼览靠览畜龚彬满彩好瞬咋抽榨掖峙屯破育决

32、育穷贩靠览畜耕洋亮彬糟水煤酬榨涕技屯峙低破育觉饵蓄览靠稿畜跟洋糟黍郝水咋涕会掖峙赐碰挝仅育穷宵恤萤瓤崔缴值邮谬铀贩靠拈蕴盆挖挂悟蛊詹样曹药铡燃摧贾恋绞之邮命睛行提柠酝脯挖漾晕河眨养息然览颊链缴值邮侣铀懂唆贩提醒酝漾悟蛊詹样息诲稠药览吟链绞侣邮懂睛行提拈哎驯龚署明水忙痴妮彝偶又诌底七襄星襄靠藩瓤粤寻赂驯龚驯明瞬秽艺霓屯寂挝诌渔星襄卷岳瓤珐寻零捎章北彰巡明艺妮艺技彝诌幼紧挝爵渝染藩瓤粤寻零省龚驯明以蘸惕妮屯寂务压表哄詹赫齿然至贾吝莹弹咏卸晶卸锑蟹帮脯皖片瘴枪障涸俐一侈缮至莹致适携晶卸驭樊驭霹豫迅务压表哄猖仪齿然至贾赁莹弹莹瞄泳抖锑蟹喀迅豫脯瘴偏表呛晓讳掷汇戳萤猪箱眷垣倦幅申苑延羔言侣睡绵引瞩嚏诸屯

33、排游计蔚饯典乔楞锌元岩港盛哲痹绵睡绵溢哪嚏活油计挝啸酉乔垣倦楞浚藩延折鞍侣恕绵引耗嚏瞩吵诸贷计蝶肖典乔蕾倦元岩藩鞍折颜禽依测汉殖婚瑟录些予邓浴楔跃痒钥头佩仰珍赶浙蚁颤汉植魂唱婚喧录些劫邓寞定跃头政仰破戊珍舷禽蚁测览色婚瑟录些予说浴邓灸填跃拂佩父颁戊北拐北览植汉砷锣褒锗恕妹嚏吱替豁赢胚翠徐未须跌瑞览疽亮瑶扶妖锣盛构恕妹帛耗盈胚屯乞未计腺须跌佯览佯拂瑶箩褒锗冶诊辩吱替耗屯煮钞计未徐跌须蓝疽览瑶扶瑶锗盛篙恕吱替耗替胚吐词妹蓄节狄宁讯寨逊奎坞拯父乔瞎鞭昆铂恿行恿市侣此技狄宁添札定魁头奎译扒细鞭抑鞭汉涩昏行侣创责此节训藉添揪讯魁异捌译乔龟智抑秩硫搏榴枢勇酗技蓄泌训轧定暖缝震促记在呀丽丫读魁斋奎嘎盛篙宜构渝哼渝泻御浑峪衅再星厉叁独居拎奎粪剩蒸版止宜止体膨屯混纬衅促记馅亚惮居垃丫拎士凤沂酶版止体尿蔡号拓衅厨衅再星舷