金橘黄酮对小鼠抗氧化作用的研究

1、金橘黄酮对小鼠抗氧化作用的研究                 作者：黎继烈，崔培梧，吴耀辉，曾超珍，刘宗敏【摘要】  目的探讨金橘黄酮的抗氧化效果。方法以小鼠为实验对象，研究不同产地与不同剂量金橘黄酮对小鼠血清SOD、GSH-Px活性、MDA含量和小鼠平均寿命的影响。结果与对照组相比，金橘黄酮80 mg/kg·bw剂量时，两地产的金橘黄酮对小鼠血清SOD活性、MDA含量和小鼠平均寿命的影响具有显着性（P 0.05），浏阳组可

2、显着提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05），遂川组可极显着提高小鼠血清GSH-Px活性（P 0.01）；金橘黄酮160 mg/kg·bw剂量对全部试验参数的影响具有极显着性（P 0.01）。结论金橘黄酮有明显抗氧化作用。 【关键词】  金橘 黄酮 抗氧化Abstract：ObjectiveTo study the antioxidant effect of kumquat flavonoids. MethodsUsing mouse as the experimental object, we studied the effect of kumquat flavonoi

3、ds from different producing area on SOD, GSH-Px activities and MDA content in mouse serum with different doses, and also the effect on the average life-span of mice was studied.ResultsCompared with the control group, both of Hunan Liuyang kumquat flavonoid and Jiangxi Suichuan kumquat flavonoid coul

4、d obviously improve SOD activity and MDA content in mouse serum (P0.05) , prolong the life-span of mice obviously (P0.05) at dose of 80 mg/kg·bw, Hunan Liuyang kumquat flavonoid had significant effect (P0.05) on improving the GSH-Px activity in mouse serum while Jiangxi Suichuan kumquat flavono

5、id had very significant effect (P0.01). At dose of 160 mg/kgobw, both of the two kumquat flavonoids had anti-oxidative extremely significant effect (P0.01) on all experimental parameters. ConclusionKumquat flavonoids has obvious anti-oxidative effect.Key words：Kumquat；  Flavonoids；  Anti-o

6、xidation    金橘，系芸香科柑橘属常绿小乔木，是热带、亚热带常绿果树，在我国长江以南地区广泛种植，果实富含挥发油、黄酮等生物活性成分，具有抑菌、降脂及防治心脑血管疾病等多种功效13；中国药植图鉴也认为金橘可“治胸脘痞闷作痛，心悸亢进，饮食不佳百日咳”，可见金橘是一种具有很大开发潜力药用保健资源。近年来对植物类黄酮药用保健功能研究是一个热点，对柑橘类黄酮4，5、大豆异黄酮6、沙棘叶黄酮7、银杏黄酮8等药用机理方面的相关报道较多，但是对金橘黄酮的药理研究相对较少，在动物体内抗氧化的研究尚末见报道。为了更好地开发利用金橘资源，本实验以湖南浏阳和江西遂川金橘鲜果为原料，提

7、取黄酮作为受试物，以小鼠为实验对象，测定小鼠血清超氧化歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione perioxidase, GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量和小鼠平均寿命，探讨金橘黄酮在小鼠体内的抗氧化作用，旨在为金橘的产业化开发提供实验基础。1  材料与仪器1  药物1金橘于2005-11采自湖南浏阳和江西遂川，品种为金弹Fortunella crassifolia Swingle。取新鲜金橘皮，进行真空冷冻干燥，将干燥后的金橘皮粉碎过40目筛，用石油醚脱脂回流2

8、h，脱脂后按金橘粉酒精（80%）=120（W/W）物料比，用MDS-6压力自控密闭微波萃取系统60 萃取30 min，过滤，滤液用大孔树脂吸附，洗脱液经真空浓缩即为金橘黄酮提取物，测定总黄酮含量分别为32.58%和33.82%，使用时配制成所需浓度。2  动物 单一性别昆明种20月龄小鼠，体重为4050 g ，湖南中医药大学实验动物中心购买，实验动物合格房号为026号。3  药品及仪器 超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。压力自控密闭微波萃取系统（MDS-6，上海新仪微波辅

9、助化学科技有限公司），分光光度计(7200，尤尼柯仪器有限公司)。2  方法2.1  对小鼠SOD，GSH-Px，MDA影响的实验9将小鼠按每组10只分为空白对照组，浏阳金橘黄酮高、中、低剂量组和遂川金橘黄酮高、中、低剂量组。实验前适应环境7 d，自正式实验开始各组动物依然以基础饲料喂养。空白对照组灌胃以等量的蒸馏水，其余各组灌胃以不同剂量的金橘黄酮提物溶液，灌胃量为0.1 ml/10g·bw，灌胃30 d后，禁食12 h，摘眼球取空腹血，4 000 r/min离心15 min，分离血清，测定SOD、GSH-Px活性及MDA含量。GSH-Px活性以分光光度比色法进

10、行常规测定，SOD活性采用NTB法测定，MDA含量采用改良的TBA微量法测定。2.2  对小鼠平均寿命影响的实验将小鼠按每组20只分组，分组情况同“2.1”项下。各组动物依然以基础饲料喂养。空白对照组灌胃以等量的蒸馏水，其余各组每天灌胃不同剂量的金橘黄酮溶液，灌胃量为0.1 ml/10 g·bw，记录小鼠自然死亡的时间。2.3  数据处理实验数据以±s表示。正态分布的两组的均数比较用t检验，统计分析采用SPSS13.0软件处理，显着性界值P=0.05。3  结果3.1  金橘黄酮对小鼠血清SOD的影响SOD是生物体内的一种重要的酶类自

11、由基清除剂，具有维持活性氧代谢平衡，保护膜结构的功能。空白对照组中SOD为90.26 U/ml，经过灌胃金橘黄酮溶液30 d后，与对照组相比，各组小鼠血清SOD活性均有所升高，与剂量呈正相关的关系。其中，浏阳金橘低、中、高剂量组分别升高1.5%，5.8%，12.2%；遂川金橘低、中、高剂量组分别升高了3.6%，9.3%，14.7%。经t检验，当摄入量为80 mg/kg·bw时，两产地金橘黄酮可显着提高小鼠血清SOD活性（P0.05），当摄入量为160 mg/kg·bw时，两产地金橘黄酮可极显着地提高小鼠血清SOD活性（P 0.01）。这说明金橘黄酮可在一定程度上提高机体的抗

12、氧化能力。见表1。表1  金橘黄酮对小鼠SOD活性的影响（略）与空白对照组比较，* P 0.01，* P 0.05；n=103.2  金橘黄酮对小鼠血清GSH-Px的影响GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，能使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，促进H2O2的分解，减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用，保护细胞膜的结构和功能不受过氧化物的干扰及损害，GSH-Px酶的活性高低可影响小鼠体内抗氧化能力的强弱。金橘黄酮可以提高血清GSH-Px活性，与金橘黄酮的剂量呈正相关的关系。与空白对照组相比，浏阳金橘低、中、高剂量组分别提高了3.99%，11.59%，2

13、2.91 %；遂川金橘低、中、高3个剂量组分别提高了7.12%，19.08%，22.91%。经t检验，浏阳中剂量组可显着提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05），高剂量组可极显着提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.01）； 遂川中、高剂量组均可极显着提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05）。见表2。         表2  金橘黄酮对小鼠GSH-Px 活性的影响（略）与空白对照组比较，* P 0.01，* P 0.05；n=103.3  金橘黄酮对小鼠血清MDA的影响MDA是超氧自由基作用生

14、物体后引起膜系统脂质过氧化的产物，它能与蛋白质氨基酸残基或核酸反应生成Shiff碱，降低膜的稳定性，促进膜的渗漏；MDA会降低SOD的活性，加剧膜脂质过氧化作用，其含量的高低是衡量生物体氧化衰老程度的一个指标。金橘黄酮可以降低血清MDA的含量，与金橘黄酮的剂量呈负相关的关系，这和上面金橘黄酮可以提高SOD含量的试验结果相吻合，进一步说明金橘黄酮可以起到抗氧化作用。和对照组相比，浏阳金橘低、中、高剂量组分别降低了5.8%，9.4%，17.5%；遂川金橘低、中、高3个剂量组分别下降了8.4%，11.9%，20.2%。经t检验，两个中剂量组可显着降低小鼠血清MDA值（P 0.05），两个高剂量组可极

15、显着降低小鼠血清MDA值（P 0.01）。这说明金橘黄酮在一定程度上具有减缓小鼠的膜脂质过氧化进程的作用。见表3。表3  金橘黄酮对小鼠MDA含量的影响（略）与空白对照组比较，* P 0.01，* P 0.05；n=103.4  金橘黄酮对小鼠平均寿命的影响在灌胃金橘黄酮溶液30 d后，各组小鼠平均寿命均有不同程度的延长。空白对照组平均寿命为660 d，遂川金橘组小鼠的平均寿命分别为：730，715，690 d，浏阳金橘组小鼠的平均寿命分别为：725 ，706，680 d，与空白对照组相比，两中剂量组可显着延长小鼠平均寿命（P 0.05），两高剂量组可极显着延长小鼠平均寿命

16、（P 0.01）。这主要是因为金橘黄酮具有抗氧化性，减少自由基对机体的损害，从而起到了延长寿命的作用。见表4。表4  金橘黄酮对小鼠平均寿命的影响（略）与空白对照组比较，* P 0.01，* P 0.05；n=204  结论   衰老是机体在细胞水平上受自由基损害的结果，是自由基干扰细胞的新陈代谢过程。血清中活性氧自由基导致脂质过氧化而产生大量的MDA；SOD、GSH-Px是体内生物防护体系中最重要的抗氧化酶，是体内自由基清除剂，在机体抗自由基损伤中起着重要作用。   本实验结果表明，金橘黄酮可以提高小鼠血清SOD、GSH-Px活性，

17、延长小鼠的平均寿命，这说明金橘黄酮可直接淬灭自由基，清除自由基对机体的损害，从而恢复老年机体自由基代谢的平衡。它还可能络合有催化作用的金属离子，抑制自由基形成，减少自由基对不饱和脂肪酸的氧化，从而降低血清MDA含量。金橘黄酮还可能减少自由基对机体的蛋白质和DNA等的损害和对机体新陈代谢的干扰，并通过抗氧化作用保护线粒体内过氧化氢酶的活性，起到了延长小鼠平均寿命的作用。   实验药物金橘提取物中黄酮含量只有33.82%，还有很多的未知成分，除黄酮类起抗氧化作用外，究竟金橘提取物中还有哪些成分在起作用，有待于进一步研究。【参考文献】  1 黎继烈，李忠海，钟海雁，等金

18、橘黄酮对小鼠血糖的影响J中药药理与临床，2007，3：56.2 黎继烈，王 卫，曾超珍，等. 金橘黄酮对肥胖型高血脂大鼠的降血脂功能研究J.中南林业科技大学学报（自然科学版），2008，28（5）：61.3 黎继烈，刘宗敏，钟海雁，等金橘总黄酮对小鼠胃肠吸收功能的影响J中南林业科技大学学报（自然科学版），2007，27（2）：50.4 Sandra Stojanovic, Helmut Sprinz. Efficiency and Mechanism of the Antioxidant Action of trans-Resveratrol and its Analogues in theRadical Liposome Oxidation J. Archives of Biochemistry and Biophysics, 20