革兰氏阴性兼性厌氧杆菌

1、革兰氏阴性兼性厌氧杆菌第十章第十章 革兰氏阴性兼性厌氧杆菌革兰氏阴性兼性厌氧杆菌包括肠杆菌科、弧菌科、巴氏杆菌科的细菌，是与兽医相关重要的病原菌，其中弧菌以水产动物为主，这里主要介绍家畜家禽相关病原菌。p第一节第一节 肠杆菌科肠杆菌科p第二节第二节 巴氏杆菌科巴氏杆菌科p二二 曼氏杆菌属曼氏杆菌属p三三 里氏杆菌属里氏杆菌属p四四 放线杆菌属放线杆菌属p五五 嗜血杆菌属嗜血杆菌属据生化反应、血清学试验、DNA同源性等，可将本科分为28个属，至少110个菌种。对属内各菌种或菌型的鉴定，除按生化特性区别外，有时可根据致病性、抗原结构、对某些噬菌体的敏感性等项来决定。对埃希氏菌、沙门氏菌属等各菌株的

2、鉴定，常用血清凝集反应来分型，不一定用菌种名，而称血清型。 肠杆菌科细菌共同特征肠杆菌科细菌共同特征（一）形态和培养（一）形态和培养G杆菌，菌体两端钝圆，中等大小，约0.53.0m，无芽胞，有周身鞭毛，能运动，部分菌有荚膜，多数有菌毛。需氧或兼性厌氧。普通培养基上生长良好，形成中等大小光滑型菌落。液体培养呈均匀混浊。 （二）生化反应（二）生化反应生化反应活泼，不同菌种分解糖、蛋白的能力不同，形成产物不同，以此可作菌种鉴定。 肠杆菌科细菌共同特征肠杆菌科细菌共同特征（三）抵抗力（三）抵抗力对热抵抗力不强，湿热60C、30min可杀灭；对低温有耐受；对一般消毒剂、抗生素敏感，但易产生耐药株；有些菌

3、耐胆盐和抵抗染料的抑菌作用。 （四）抗原构造（四）抗原构造肠道杆菌抗原构造较为复杂，主要有O抗原、H抗原、荚膜或K抗原及菌毛抗原等，均可用血清学反应检出。肠杆菌科细菌共同特征肠杆菌科细菌共同特征（五）致病因子（五）致病因子主要有菌毛或菌毛样结构、荚膜或微荚膜、外膜、内毒素、外毒素及载铁体（siderophore）等。 目录目录 一、埃希氏菌属一、埃希氏菌属 二、沙门氏菌属二、沙门氏菌属 三、变形杆菌属三、变形杆菌属 四、肠杆菌属四、肠杆菌属埃希菌属（埃希菌属（Escherichia）包括5个种，血清型众多，多不致病，临床以大肠埃希氏菌最为常见。大肠埃希菌（大肠埃希菌（E. coli）俗称大肠杆

4、菌大肠杆菌，大肠杆菌的多少是卫生检验指标之一。部分菌为致病菌，可引起多种幼畜感染。也是最常用分子生物学的实验材料。（一）形态染色（一）形态染色G短杆菌，有鞭毛，能运动，具有周身鞭毛，无荚膜。（一）形态染色（一）形态染色（二）培养及生化反应（二）培养及生化反应普通培养基上形成中等大小光滑型菌落；在麦康凯培养基上形成红色菌落；在SS培养基上形成孤立红色菌落；在EMB上形成黑色带金属光泽闪光的菌落大肠杆菌在伊红美兰培养基上在血平板上有在血平板上有 -溶血溶血大肠杆菌在血液培养基上（有溶血环）生化反应活泼生化反应活泼对葡萄糖、乳糖、麦芽糖等产酸产气靛基质（吲哚）试验阳性、甲基红（M-R）试验阳性、V-

5、P试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性，不产生H2S，尿素酶试验阴性。 （三）抵抗力（三）抵抗力在土、水中可生存数月；在含余氯的水中不能生存；胆盐、煌绿等对大肠杆菌有明显的抑菌作用；氯霉素、庆大霉素对其敏感，但易产生耐药性。 （四）抗原构造（四）抗原构造主要有O、H、K及菌毛抗原：O抗原有173种；K抗原有105种；H抗原有56种。例如：O157:K15:H16 。（五）致病性（五）致病性不同血清型的大肠杆菌常使不同各类动物发病，也有好几种血清型能对多种动物致病。引起人、畜肠道感染的大肠杆菌可分成：肠产毒性大肠杆菌（ETEC）肠致病性大肠杆菌（EPEC）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）肠出血性大肠杆菌（

6、EHEC）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）。1、肠产毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)(1) 产生外毒素肠毒素肠毒素。包括不耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)。(2) 粘着素抗原粘着素抗原：主要有F4(K88)、F5(K99)、F6(987P)、F41等四种粘着素抗原，可增强细菌的致病。如仔猪黄痢。(3) 外毒素外毒素：神经毒素(neurotoxin)：可致肠毒血症，引起水肿与神经症状。如仔猪水肿病。ETEC型菌株均可能对仔猪、犊、驹和羔羊致病。大肠杆菌患病情况大肠杆菌患病情况仔猪黄白痢大肠杆菌患病情况大肠杆菌患病情况仔猪黄白痢大肠杆菌病畜情况大肠杆菌病畜情

7、况仔猪水肿病（五）致病性（五）致病性2、肠致病性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic E. coli. ，EPEC）：为发展中国家婴儿腹泻的重要病原。3、肠侵袭性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌（enteroinvasive E. coli. , EIEC）：粘膜和溃疡。亦可引起豚鼠角膜结膜炎(Sereny test )。4、肠出血性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E. coli. ， EHEC）：出血性结肠炎。5、肠凝聚性大肠杆菌、肠凝聚性大肠杆菌（enteroaggregative E. coli. , EAggEC）：儿童持续性腹泻的病因

8、之一。畜禽致病大肠杆菌的分离与鉴定程序畜禽致病大肠杆菌的分离与鉴定程序（六六）微生物学检查法微生物学检查法（七）免疫（七）免疫1、自家菌苗免疫、自家菌苗免疫；（仔猪E.coli.苗可用在母猪产仔前1月、半月分别免疫两次，据说免疫效果较好。）2、ST、LT及及F4（K88）、）、F5(K99)、F6(987P)、F41共同制备菌苗免疫；3、基因工种菌免疫。、基因工种菌免疫。二、沙门氏菌属二、沙门氏菌属Salmonella的细菌种类繁多，迄今为止已经发现了2500个以上的血清型。它们主要寄生于人类及各种温血动物肠道，可引起各种性质的疾病。这些由沙门菌引起的疾病统称为沙门菌病(salmonellos

9、is)。二、沙门氏菌属二、沙门氏菌属（一）形态染色、培养和生化反应（一）形态染色、培养和生化反应染色：G杆菌，除鸡伤寒与鸡白痢沙门氏菌鸡白痢沙门氏菌外，其余都有周鞭毛和菌毛。沙门氏菌的革兰色染色鞭毛染色沙门氏菌的革兰色染色鞭毛染色沙门氏菌在不同培养基上生长性状沙门氏菌在不同培养基上生长性状沙门氏菌在麦康凯培养基上生长性状。沙门氏菌在HEK培养基上形成黑色菌落（一）形态染色、培养和生化反应（一）形态染色、培养和生化反应培养培养：营养要求不高，（有鸡白痢鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒鸡伤寒沙门氏菌、猪伤寒猪伤寒沙门氏菌、羊流产和甲型副伤寒羊流产和甲型副伤寒沙门氏菌等菌型在普通培养基上生长贫瘠，形成细小的菌

10、落）在普通培养基上形成中等大小、半透明菌落，不分解乳糖，在肠道杆菌鉴别培养基上形成不着色菌落。沙门氏菌属各菌的生化反应较有规律性，对细沙门氏菌属各菌的生化反应较有规律性，对细菌有重要价值菌有重要价值。（一）形态染色、培养和生化反应（一）形态染色、培养和生化反应大肠杆菌与沙门氏菌的生化反应对照（二）抗原构造及分类（二）抗原构造及分类分类比较复杂，有O、H、Vi及菌毛等重要抗原。O、H是用于分型的基本抗原。1、O抗原抗原：为细菌菌体抗原，即脂多糖；O抗原有许多组成成分，分别以1、2、3、4等数字表示。每种细菌常带有数种O抗原；不同种的细菌可有共同的O抗原。将具有共同抗原的沙门氏菌归为一组，用A、B

11、、C、D表示，继Z之后，则用阿拉伯数字O51-O67表示。对温血动物致病的血清型大多数都在A-E组。 （二）抗原构造及分类（二）抗原构造及分类2、H抗原为鞭毛蛋白，性质不稳定，湿热60C、15min酒精处理即被破坏。沙门氏菌H抗原有两种，称第一相和第二相。前者为特异相，用a、b、cz以后用z1、z2、z3表示；后者为非特异相，用1、2、3、表示。具有两种相抗原的细菌叫双相菌、仅有某一相者称为单相菌。（二）抗原构造及分类（二）抗原构造及分类3、Vi抗原抗原成分为不耐热的聚N-乙酰D半乳糖胺醛酸。有抗吞噬作用，并保护菌体不受抗体和补体作用。初次分离的伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌有Vi抗原。具有

12、Vi抗原的细菌可用Vi噬菌体分型。目前伤寒沙门氏菌的Vi噬菌体型已超过100个。（三）抵抗力（三）抵抗力在水中能存活2-3周，粪便中可活1-2个月，在冰冻土壤中可过冬。对热耐力差，湿热65C经15-20min即被杀死。5石炭酸或1:500升汞中5分钟杀死。胆盐、煌绿及其它染料对沙门氏菌的抑制作用较其它肠道菌小，故可用此染料制选择培养基分离培养。（四）变异（四）变异1、HO变异；2、SR变异；3、VW变异；（带有ViAg为V菌株；丢失ViAg的为W菌株。）4、位相位相变异。（五）致病性（五）致病性本属杆菌均有致病性，它们通常侵害幼年动物，发生急性败血症、胃肠炎以及其它局部炎症。雏鸡白痢雏鸡白痢（

13、五）致病性（五）致病性据其对寄主的嗜好不同，可分两种不同类型：1、对寄主有专嗜性它们只对某一种类的寄主产生一定的疾病。（很少）2、具有广泛寄主范围的能在类以及多种畜禽中致病。（占大多数）（六）微生物学诊断（六）微生物学诊断三、变形杆菌属三、变形杆菌属(Proteus)其代表菌种为普通变形杆菌（P. vulgaris）奇异变形杆菌（P. mirabills）。为广泛分布于自然界的腐生菌，偶尔可致病。（一）生物学性状（一）生物学性状G杆菌，呈卵圆形或长丝状等多形性。（一）生物学性状（一）生物学性状不形成荚膜、有鞭毛，运动活泼，有菌毛。（一）生物学性状（一）生物学性状在湿润的固体培养基上呈扩散生长，

14、于琼脂表面形成一层波纹状薄膜，称迁徙生长现象迁徙生长现象(Swarming growth)。（一）生物学性状（一）生物学性状本菌常为污染菌，以3-4琼脂培养可获得孤立菌落。本菌能分解葡萄糖，不发酵乳糖。能迅速分解尿素在鉴别是有参考价值。（二）致病性（二）致病性偶尔致牛、绵羊、山羊、犬等的幼畜腹泻，间或致成年家畜腹泻或犬的外耳炎，偶尔致人的下痢或食物中毒，在人的泌尿系统或伤口中可成为继发感染菌。在自然界中，对有机物分解有重要作用，在实验室常以污染菌出现。四、肠杆菌属（四、肠杆菌属（Enterobacter）肠杆菌即产气杆菌。多分布于土壤和污水中。本属有两个主要种：阴沟肠杆菌(Ent. cloac

15、a)和产气肠杆菌(Ent. aerogenes)，两者均不致病，偶尔出现于脓液或病灶组织中。本属菌为G杆菌，可利用柠檬酸盐为唯一碳源，37C可分解葡萄糖产酸产气，44.5C分解葡萄糖产酸不产气。不利用卫矛醇，VP试验阳性、M-R试验阴性，可缓慢液化明胶，不产生H2S、无鞭毛，无运动性。第二节第二节 巴氏杆菌科巴氏杆菌科Pasteurella是以法国微生物学家巴斯德的姓所命名的一类杆菌，它是引起多种动物和人类疾病的病原菌。本属菌在分类学上属巴氏杆菌科，巴氏杆菌属与嗜血杆菌属、放线菌属一起作为巴氏杆菌科的成员，现新建立了曼氏杆菌属、里氏杆菌属等等。 一、巴氏杆菌属（一、巴氏杆菌属（Pasteure

16、lla）菌属的共同特征：卵圆形或短杆状的G菌；病料中呈两极染色；不运动，不产生芽胞；需氧或兼性厌氧；分解糖产酸不产气；不凝固牛乳；不液化明胶；氧化酶阳性。多杀性巴氏杆菌（多杀性巴氏杆菌（P. multocida )本属细菌已有20多种，其中以多杀性巴氏杆菌多杀性巴氏杆菌最为重要，是多种畜禽的致病菌。多杀性巴氏杆菌是引起多种畜禽巴氏杆菌病的病原。1994年第九版伯吉氏细菌鉴定手册列有3个亚种，即多杀亚种（P. multocida subspl. multicida）、败血亚种（P. multocida subspl. septica）及杀禽亚种（P. multocida subspl. gall

17、icida）。多杀性巴氏杆菌（多杀性巴氏杆菌（P. multocida )本菌为主要可致动物的出血性败血症和传染性肺炎。是牛、羊、马、兔的出败，猪肺疫、禽霍乱等疾病的病原。（一）形态染色（一）形态染色球杆状或短杆状，小杆菌。单在或双排列。病料涂片呈两极着色。新分离的强毒株有荚膜。G。（二）培养及生化（二）培养及生化需氧或兼性厌氧。营养要求严格。在血液培养琼脂上形成无溶血环，湿润、水滴样小菌落。血清肉汤：呈轻度浑浊，培养延长到46天，则变清，沉淀物粘稠沉于底部，表面有菌环。在血清平板上培养24小时，形成淡灰白、边缘整齐、表面光滑、闪光的露珠状菌落。（二）培养及生化（二）培养及生化生化反应：可分解

18、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇、单奶糖等；一般不利用乳糖、鼠李糖、杨苷、山梨醇、肌醇、菊糖、侧金盏花醇等；Fo型分解伯胶糖不分解木胶糖；Fg型分解木胶糖而不分解伯胶糖。吲哚试验阳性，过氧化氢酶阳性，M-R试验阴性，V-P试验阴性、不产生H2S，不利用明胶。 （三）血清型（三）血清型Carter根据K抗原将其分为A、B、D、E 6群；波冈、村田则根据O抗原将其分为16个型。将K、O二种抗原相结合，共组成22种血清型。我国分离的禽多杀性巴氏杆菌以5：A为多，其次为8：A；猪的以5：A和6：B为主，8：A和2：D其次；羊的以6：B为多；家兔以7：A为主，其次是5：A。C型为犬、猫的正常栖居菌，F型主要发

19、现于火鸡，致病作用不明。（四）抵抗力（四）抵抗力抵抗力不强：干燥空气中，2-3天死亡；60C 20min，75C 5-10min可被杀死。在血液内保持毒力610天；冷水中能保持活力达2周，厩肥中可生存一个月。本菌易自溶：在无菌蒸馏水中或生理盐水中迅速死亡。对消毒剂敏感：3石炭酸，千倍升汞1min可杀灭，2来苏儿、福尔马林等几分钟就可杀灭。（五）致病性（五）致病性鸡、鸭、鹅禽霍乱；猪猪肺疫；牛、兔、羊、马等出败。实验动物中，以鸽对禽源巴氏杆菌最易感染，小鼠、家兔也易感。禽霍乱禽霍乱鸡冠和肉髯变青紫色，有的病鸡肉髯肿胀，有热痛感。胃肠出血。（六）微生物学诊断（六）微生物学诊断1、镜 检：采集标本（

20、渗出液、心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等）涂片、染色（瑞氏染色或美兰染色）、镜检 两极着色小杆菌。2、分离培养：血平板接种、溶血情况、菌落形态、生化鉴定3、动物试验：实验动物（小鼠、鸽、兔等）接种，2448小时后，死亡、剖检、重新做镜检和细菌分离以鉴定细菌。（七）免疫和治疗（七）免疫和治疗1、免疫：弱毒活菌苗、氢氧化铝死菌苗、高免血清等。2、治疗：抗生素。 二、曼氏杆菌属（二、曼氏杆菌属（Mannheimia）1999年Angen等根据DNA杂交及16S rRNA序列的实验结果，建议建立这个新属，至少有7个种，其中5种已经定名，代表菌种为溶血性曼氏杆菌（M. haemolytica）。 溶血性曼氏

21、杆菌溶血性曼氏杆菌(M. haemolytica)危害：牛羊肺炎，新生羔羊败血症。溶血性曼氏杆菌溶血性曼氏杆菌(M. haemolytica)生物学特征生物学特征：G短杆菌，有呈多形性，无运动性，两极着色，荚膜有时看不到。营养要求同多杀性巴氏杆菌。固体培养上，呈圆形、光滑、湿润、带荧光。血平板上溶血明显，多次传代后溶血性可消失。在羔羊血琼脂上可生成双溶血环（内、外），在麦康凯平板上，生长缓慢，长成红色菌落。溶血性曼氏杆菌溶血性曼氏杆菌(M. haemolytica)本菌可分解葡萄糖、麦芽糖、肌醇、棉子糖、淀粉和乳糖产酸不产气；不分解侧金盏花醇、赤藓醇和菊糖；对卫矛醇、甘油、鼠李糖发酵不定。本菌

22、吲哚试验、尿素利用试验、明胶试验均为阴性；紫乳变酸且凝固。本菌按其生化反应和致病性可分为A和T两个生物型（Biotypes），又按其荚膜抗原用间接血凝反应可区分为12个血清型(serotypes)。三、里氏杆菌属三、里氏杆菌属（Riemerella）鸭疫里氏杆菌是本属的代表种，原名鸭疫巴氏杆菌。1991年Rossau等和Segers等先后证实，该菌与巴氏杆菌的rRNA不同源，建议并得到认可，建立了里氏杆菌新属，具体归属哪科还未定。鸭疫里氏杆菌（鸭疫里氏杆菌（R. anatipestifer）鸭疫里氏杆菌是雏鸭传染性浆膜炎的病原，可引起18周龄、尤其是23周龄雏鸭大批发病死亡，生长发育受阻等。1

23、、形态及染色、形态及染色菌体呈杆状或椭圆形，大小0.30.5um0.76.5 um，偶见长丝状，长1124um。多为单个，少数成双或短链状排列。可形成荚膜，无芽胞，无鞭毛。瑞氏染色可见两极着色。革兰氏染色阴性。2、培养及生化特性、培养及生化特性-培养培养本菌营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不生长。初次分离培养需要5%10%的CO2。在巧克力或胰蛋白胨大豆蛋胨琼脂（TSA）平板上，CO2培养箱或蜡烛缸中，37培养2448h，生长的菌落无色素，呈圆形、微突起、表面光滑、奶油样，直径12mm。在含血清或胰蛋白胨酵母的肉汤中，3748h培养，呈上下一致轻微浑浊，管底有少量沉淀。2、培养及生化特

24、性、培养及生化特性-生化特征生化特征本菌不发酵葡萄糖、蔗糖，可与多杀性巴氏杆菌区别。也不发酵半乳糖、乳糖、果糖、木糖、蕈糖、甘露醇、山梨醇、甘露糖和棉实糖。极少数菌株发酵麦牙糖或肌醇。靛基质、硝酸盐还原、柠檬酸盐利用、V-P试验、M-R试验、硫化氢产生、尿素分解等均为阴性。氧化酶、触酶试验为阳性。多不溶血，多液化明胶，G+C多为35mol%。3、血清型、血清型目前比较复杂，1991年Sandhu等其统一并为19个型，以阿拉伯数字定名，1995年泰国发现20、21型。我国以1型为主。 4、抵抗力、抵抗力本菌抵抗力不强。鲜血培养基上置4冰箱保存容易死亡，通常45d要传代一次。对多种抗生素敏感，但易

25、产生耐药性。5、致病性与免疫性、致病性与免疫性本菌可引起鸭传染性浆膜炎，鸡、鹅、火鸡及野生水禽也可发生。兔和小鼠不易感。本菌具有较好的免疫原性，可制备灭活菌苗免疫，效果尚可。6、微生物学诊断、微生物学诊断取发病初期病鸭脑及心血，用巧克力培养基容易分离到本菌。肝、脾分离率低。四、放线杆菌属四、放线杆菌属(Actinobacillus)对家畜有致病性的有：猪胸膜肺炎放线杆菌（A. pleuropneumoniae, APP）。林氏放线杆菌（A. ligniersii）；驹放线杆菌(A. equuli)；（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）本菌原为猪胸膜肺炎嗜血杆菌(Haemophilus pl

26、europneumoniae)或副溶血嗜血杆菌(H. Parahaemolyticus)，但经DNA杂交试验表明，本菌与林氏放线菌有很高的同源性，因此在1983年起改为现名。本菌可引起猪传染性胸膜肺炎，是集约猪场常见的传染病之一。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌1、形态染色小球杆菌，具多形态，新鲜病料呈两极染色，有荚膜和鞭毛，具运动性。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌2、培养兼性厌氧，置10%CO2中可长出黏液型菌落。生长温度：37。普通培养基上不长，需添加V因子，常用巧克力培养基培养。在绵羊血平板上，可产生稳定的溶血，金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈（CAMP试验+）（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌3

27、、抗原性根据其荚膜多糖及LPS的抗原性差异，将本菌分为15个血清型，其中1型和5型又分1a、1b及5a、5b两亚型。根据对NAD I的依赖性，又可分为：生物I型：依赖NDA I，包括112、15血清型；生物II型：不依赖NDA II，包括13、14血清型。毒力：1、5、9、11型最强，3、6型毒力较低。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌4、致病性与免疫性猪是本菌高度专一的宿主，寄生在猪肺坏死灶内或扁桃体，较少在鼻腔。慢性感染猪或康复猪为带菌者。小于6月龄仔猪最易感。毒素是本菌最重要的毒力因子，不同血清型的菌株可产生细胞毒素：Apx，是一种穿孔素，有Apx I、ApxII、Apx III和Apx I

28、V四种。Apx IV存在于所有血清型中。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌人工感染APP在19h死亡口中流出血样渗出物。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌肺充血水肿，有纤维素性渗出物（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌整个肺表面纤维素性渗出物与胸膜中隔膜发生粘连（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌5、微生物学诊断取病死猪肺坏死组织、胸水、鼻及气管渗出物做涂片，显微镜检查两极着色球杆菌。确诊：取上述病料接种巧克力培养基或绵羊血琼脂，置5%CO2 37培养过夜。（一）猪传染性胸膜肺炎放线杆菌如有可疑菌落，进一步做CAMP试验，检查其脲酶活性及甘露醇发醇能力。（二）林氏放线杆菌（二）林氏放线杆菌（A. ligniersii）为牛木舌病的病原体，此菌还可侵害猪、羊，引起头颈部软组织脓疡。1、形态与染色、形态与染色杆菌，G，多形性：在血清、血琼脂上呈球杆状，大小为1.50.4um；在含葡萄糖、麦芽糖琼脂上呈长杆菌；在肉汤中呈链状、菌丝状。无运动性，无芽胞，无荚膜。石炭酸复红染色最好，有两极着染倾向。（二）林氏放线杆菌（二）林氏放线杆菌2、培养及生化特性