实验十二(方案设计)诱变物质的微核测试

1、2021/4/21诱变物质的微核测试诱变物质的微核测试2021/4/22要求要求n学生自己设计实验方案学生自己设计实验方案n学生自己准备实验材料学生自己准备实验材料n学生自己实施实验，结果观学生自己实施实验，结果观察及分析察及分析2021/4/23程序程序n第一阶段：实验方案设计（查阅文献资料并设计详细第一阶段：实验方案设计（查阅文献资料并设计详细的实验方案）。时间：的实验方案）。时间：1-2周。周。n第二阶段第二阶段：（一组同学内讨论）：（一组同学内讨论）列出试剂和材料清单，列出试剂和材料清单，与实验员老师联系，准备好实验的各个环节（包括实与实验员老师联系，准备好实验的各个环节（包括实验材料

2、准备、实施和保存）过程中涉及到的的所有材验材料准备、实施和保存）过程中涉及到的的所有材料、试剂和仪器和器材。料、试剂和仪器和器材。n第三阶段：实验的实施。时间（第二和第三阶段共）：第三阶段：实验的实施。时间（第二和第三阶段共）：3-4周。周。n第四阶段：实验的观察，当堂完成实验报告。第四阶段：实验的观察，当堂完成实验报告。n第五阶段：实验总结报告。时间：第五阶段：实验总结报告。时间：1周。周。2021/4/24说明说明n第一阶段：以一位学生为单位。第一阶段：以一位学生为单位。每每3-4位学生为一组，选用相位学生为一组，选用相同的题目（同的题目（ 对蚕豆根尖细胞微核的影响），但每人必须单独对蚕豆

3、根尖细胞微核的影响），但每人必须单独完成一份实验方案设计（作为成绩材料）完成一份实验方案设计（作为成绩材料） ，不得相互拷贝与抄袭。，不得相互拷贝与抄袭。n第二阶段第二阶段：以一组学生为单位。一组学生（：以一组学生为单位。一组学生（3-4位学生）位学生）内讨论，内讨论，列出试剂和材料详细清单一份，与实验员老师列出试剂和材料详细清单一份，与实验员老师联系（如实验老师需留一份，则需学生写出相同的两份，联系（如实验老师需留一份，则需学生写出相同的两份，留一份作为存根，于实验结束后上交给我）留一份作为存根，于实验结束后上交给我） ，准备好实，准备好实验的各个环节（包括实验材料准备、实施和保存）过程验的

4、各个环节（包括实验材料准备、实施和保存）过程中涉及到的的所有材料、试剂和仪器和器材。中涉及到的的所有材料、试剂和仪器和器材。n第三阶段：第三阶段：以一组学生为单位。以一组学生为单位。实验的实施中一组学生实验的实施中一组学生相互配合，共同准备实验材料。相互配合，共同准备实验材料。n第四阶段：实验的观察以一位学生为单位，上交一份拍第四阶段：实验的观察以一位学生为单位，上交一份拍摄图片，实验结果，完成实验报告。摄图片，实验结果，完成实验报告。n第五阶段：实验总结报告以一位学生为单位第五阶段：实验总结报告以一位学生为单位 。2021/4/25n注：实验总结报告与实验方案设计注：实验总结报告与实验方案设

5、计一起将作为考试实验的笔试材料，一起将作为考试实验的笔试材料，没有上述阶段中的任一环节都将作没有上述阶段中的任一环节都将作实验成绩不合格处理。实验成绩不合格处理。2021/4/26主 要 内 容n实验原理实验原理n实验目的实验目的n实验材料实验材料n实验方案设计要求实验方案设计要求2021/4/27实验原理n微核是真核类生物细胞中微核是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应游离于主核之外，大小应在主核在主核1/31/

6、3以下。以下。2021/4/28n20世纪世纪70年代初期由年代初期由Matter和和Schmid首次建立了一种简首次建立了一种简便、快速、评价客观地检测来自环境中的各种理化及生便、快速、评价客观地检测来自环境中的各种理化及生物因子对机体产生潜在的遗传损伤方法，即用哺乳动物物因子对机体产生潜在的遗传损伤方法，即用哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核出现率的实验方法，称为微核试骨髓嗜多染红细胞微核出现率的实验方法，称为微核试验（验（micronucleus test，MNT）。）。当染色体受到损伤后，在有丝分裂中、后期细胞中观察当染色体受到损伤后，在有丝分裂中、后期细胞中观察到丧失着丝粒的染色单体或染色

7、体断片，游离于子细胞质到丧失着丝粒的染色单体或染色体断片，游离于子细胞质中形成次核。在间期细胞中，常常见到比普通细胞核小很中形成次核。在间期细胞中，常常见到比普通细胞核小很多的一个或几个圆形结构，其直径大约相当于细胞直径的多的一个或几个圆形结构，其直径大约相当于细胞直径的1/201/5，故称微核（，故称微核（micronucleus，MN）。在骨髓及外）。在骨髓及外周血的有核细胞中均可见到。周血的有核细胞中均可见到。2021/4/29n利用哺乳动物骨髓细胞的微核测试缺点利用哺乳动物骨髓细胞的微核测试缺点: :需要需要一定的培养时间、细胞同步化困难、微核低，一定的培养时间、细胞同步化困难、微核低

8、，一般只有一般只有0.2%0.2%左右。左右。n植物系统则更直接、更简便。植物系统则更直接、更简便。 70年代末马修德用鸭跖草建立了四分孢子期微核率年代末马修德用鸭跖草建立了四分孢子期微核率计数的测试系统。计数的测试系统。 1983年华中师范大学生物系建立了蚕豆根尖微核年华中师范大学生物系建立了蚕豆根尖微核测试，用于监测水环境污染，经鉴定已列入国家测试，用于监测水环境污染，经鉴定已列入国家生物生物监测技术规范（水环境部分）监测技术规范（水环境部分）2021/4/210电镀厂污水电镀厂污水2021/4/211微波微波2021/4/212致变因素：n化学因素：化学因素：药物（环磷酰胺、氮芥、白硝安

9、、甲氨喋呤、阿糖胞苷等抗癌药物；农药（有机磷农药）；工业毒物（苯、甲苯、铝、砷、二硫化碳、氯丁二稀、氯乙烯单体等）；食品添加剂（食品的防腐剂、色素等）n物理因素：物理因素：电离辐射。微小剂量的射线能不断积累。n生物因素：生物因素：生物体产生的生物类毒素；某些生物体（如杂色曲霉等）2021/4/213实验目的实验目的n理解微核测定的方法理解微核测定的方法和意义和意义。n检测和了解环境中对检测和了解环境中对生物体不利的因素生物体不利的因素2021/4/214实验材料n蚕豆根尖蚕豆根尖（由蚕豆制备（由蚕豆制备根尖）根尖）2021/4/215实验方案内容实验方案内容1、题目：、题目：对蚕豆根尖细胞微核

10、的影响对蚕豆根尖细胞微核的影响2、前言、前言（即：（即：对环境和生物体有什么危害，为什么能用微核的产生对环境和生物体有什么危害，为什么能用微核的产生来说明来说明对生物的不利影响，别人有无做过同类实验研究，如别人做对生物的不利影响，别人有无做过同类实验研究，如别人做过，有什么结论，你为什么还做这个实验，如果别人没有做过，你做的时过，有什么结论，你为什么还做这个实验，如果别人没有做过，你做的时候需要注意哪些。写此部分的时候要查一些资料）候需要注意哪些。写此部分的时候要查一些资料）3、实验材料、实验材料：受体材料：为蚕豆，其它的药物或其它，仪器材料（如计数器等）受体材料：为蚕豆，其它的药物或其它，仪

11、器材料（如计数器等）4、方案设计（要详细与具体）、方案设计（要详细与具体）：对照组：（用自来水处理）对照组：（用自来水处理）处理组（几种处理：剂量、时间）处理组（几种处理：剂量、时间）具体的实验步骤具体的实验步骤5、数据处理方法、数据处理方法：设计表格设计表格统计数据（细胞数、微核数），统计数据（细胞数、微核数），计算微核千分率计算微核千分率2021/4/216实验方案撰写要求实验方案撰写要求1、要有题目，作者（包括班级和学号）。、要有题目，作者（包括班级和学号）。2、格式：、格式：标题用三号，黑体，居中；标题用三号，黑体，居中；作者、班级和学号（位作者、班级和学号（位于标题下一行）用小四号，宋体，居中；于标题下一行）用小四号，宋体，居中；正文一级标题用小正文一级标题用小四号，宋体，加粗；四号，宋体，加粗；正文（包括参考文献）用五号，宋体；正文（包括参考文献）用五号，宋体；正文左右页边距宽为正文左右页边距宽为2.54cm ；3、参考文献至少、参考文献至少5篇（可以是网站）列在正文末，用篇（可以是网站）列在正文末，用12等等标注。例：标注。例：1 杜良杜良, 王金生王金生. 铬渣毒性对环境的影响与产出量铬渣毒性对环境的影响与产出量分析分析 J . 安全与环境学报安全与环境学报, 2004, 4(2)：34