生物安全手册内容

1、包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第2页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月目录目录1第一部分基本规范2进入规定2人员防护3实验室工作区3生物安全管理4第二部分实验室技术4移液管与移液辅助器得使用5生物安全柜得使用5血清得分离6离心机得使用6冰箱与冰柜得维护与使用7装有冻干物质安甑得开启8第三部分消毒与灭菌8一、定义8二、化学杀菌剂9氯（次氯酸钠）10乙醇10碘与碘伏11三、清除局部环境得污染12四、洗手/清除手部污染12五、高压灭菌12高压灭菌参数12高压灭菌器得装载13高压灭菌

2、器使用注意事项13附录11414设备得安全性.表A11可能产生危害得仪器设备及其操作14表A12仪器设备相关事故得原因错误！未定义书签表A13生物安全设备错误！未定义书签表A14个体防护装备错误！未定义书签第一部分基本规范根据感染性微生物得相对危害程度（危险度2级,病原体能够对人致病但对实验室工作人员或环境不易导致严重危害），本实验室为基础实验室属于二级生物安全水平。进入规定包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第3页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月1、在实验室门上应标有国际通用得

3、生物危害警告标志（图1）授权人员方可进入生物安全水平：责任人：紧急联系电话：白天电话：家庭电话，必须得到上述责任人的授权方可进入2、只有经批准得人员方可进入实验室工作区域。3、实验室得门应保持关闭。4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。5、与实验室工作无关得动物不得带入实验室。人员防护1、在HIV实验室工作时,任何时候都必须穿着工作服。2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其她具有潜在感染性得材料得操作时,应戴上合适得手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。3、在处理完感染性实验材料后,以及在离开实验室工作区域前,都必须洗手。4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫

4、外线辐射得伤害,必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其她防护设备。5、严禁穿着实验室工作服离开实验室,（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室与卫生间）。6、不得在实验室内穿露脚趾得鞋子。7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆与处理隐形眼镜。8、禁止在实验室工作区域储存食品与饮料。9、在实验室内用过得工作服不得与日常服装放在同一柜子内。实验室工作区1、实验室应保持清洁整齐,严禁摆放与实验无关得物品。2、发生具有潜在危害性得材料溢出以及在每天工作结束之后,都必须清除工作台面得污染。3、所有受到污染得材料、标本与培养物在废弃或清洁再利用之前,必须清除污染。4、在进行包装与运输时必须遵循国家

5、与/或国际得相关规定。5、如果窗户可以打开,则应安装防止节肢动物进入得纱窗。生物安全管理1、实验室主任（对实验室直接负责得人员）负责制订与采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规得实验室安全培训。包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第5页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月3、要将生物安全实验室得特殊危害告知实验室人员，同时要求她们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准得操作与规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内

6、应备有可供取阅得安全或操作手册。4、应当制订节肢动物与啮齿动物得控制方案。5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜得医学评估、监测与治疗，并应妥善保存相应得医学记录。第二部分实验室技术实验室伤害以及与工作有关得感染主要就是由于人为失误、不良实验技术以及仪器使用不当造成得。本部分概要介绍了避免或尽量减少这类常见问题得技术与方法。移液管与移液辅助器得使用1、应用移液辅助器，严禁用口吸取。2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具得污染。3、不能向含有感染性物质得溶液中吹入气体。4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。5、不能将液体从移液管内用力吹出。6、污染得移液管应完全浸入适当得消毒液中，并在消毒

7、液中浸泡适当时间后再进行处理。7、盛放废弃移液管得容器应当放在生物安全柜内。包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第6页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月8、为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块吸有消毒液得纸，使用后将其按感染性废弃物处理。生物安全柜得使用1、生物安全柜运行正常时才能使用。2、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。3、安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统得气流循环。4、所有工作必须在工作台面得中后部进行，并能够通过玻璃观

8、察挡板瞧到。5、尽量减少操作者身后得人员活动。6、操作者不应反复移出与伸进手臂以免干扰气流。7、不要使实验记录本、移液管以及其她物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品得潜在污染与操作者得暴露。8、工作完成后以及每天下班前，应使用70%#酒精对生物安全柜得台面进行擦拭，但切忌用酒精擦拭玻璃挡板。9、在安全柜内得工作开始前与结束后，安全柜得风机应至少运行5min。10、在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。血清得分离1、只有经过严格培训得人员才能进行这项工作。2、操作时应戴手套以及眼睛与黏膜得保护装置。包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件3、血液与血清应当小心吸取，而不能倾

9、倒。严禁用口吸液。4、移液管使用后应完全浸入适当得消毒液中，并在消毒液中浸泡适当得时间,然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。5、带有血凝块等得废弃标本管，在加盖后应当放在适当得防漏容器内高压灭菌。离心机得使用1、应按照操作手册来操作离心机。2、离心管在使用前应检查就是否破损。3、用于离心得离心管应当始终牢固盖紧。4、离心桶得装载、平衡、密封与打开必须在生物安全柜内进行。5、离心桶与十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。6、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出得空间大小。7、空离心桶应当用蒸储水来平衡。8、每次使用后，要清除离心桶、转子与离心机腔得污染。9、使用后应当将离心桶倒置存放使平

10、衡液流干。10、应当每天检查离心机内转子部位得腔壁就是否被污染或弄脏，如污染明显，应重新评估离心操作规范。冰箱与冰柜得维护与使用1、冰箱、低温冰箱与干冰柜应当定期除霜与清洁，应清理出所有在储存文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第7页/共17页箍制者第三医缺P包头市田永丽检验取妣端理文件黄连成复伟蛇期2YKZLG7WJ005腹施因璃改B2014年7月第8页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月过程中破碎得安甑与试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护清理后要对内表面进行消毒。2、储存在冰箱内得所有容器应当清楚地标明内装物品得科

11、学名称、储存日期与储存者得姓名。未标明得或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。3、应当保存一份冻存物品得清单。4、除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应注明这一点。装有冻干物质安甑得开启1、首先清除安甑外表面得污染。2、如果管内有棉花或纤维塞，可以在管上靠近棉花或纤维塞得中部锤一痕迹。3、用一团酒精浸泡得棉花将安甑包起来以保护双手，然后手持安甑从标记得锤痕处打开。4、将顶部小心移去并按污染材料处理。5、如果塞子仍然在安甑上,用消毒镣子除去。6、缓慢向安甑中加入液体来重悬冻干物，避免出现泡沫。第三部分消毒与灭菌一、定义关于消毒与灭菌有许多不同得术语，下面就是生物安全中较常用得：抗菌剂(a

12、ntimicrobial)能够杀死微生物或抑制它们生长与繁殖得制包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第9页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月防腐剂(antiseptic)能够抑制微生物生长与繁殖但不足将其杀灭得物质。防腐剂经常应用于体表。生物杀灭剂(biocide)所有能够杀死生物体得制剂得统称。化学杀菌剂(chemicalgermcide)用于杀死微生物得化学品或化学混合物。清除污染(decontamination)去除与/或杀死微生物得任何过程。该词也用于去除或中与有危害得化学

13、品与放射性物质。消毒剂(disinfectant)用于杀死微生物得化学品或化学混合物，但不一定杀死其胞子。消毒剂常用于非生命物体或其表面。消毒(disinfection)杀死微生物得物理或化学手段，但不一定杀死其抱子。灭菌齐ij(microbicide)能够杀死微生物得化学品或化学混合物。该词常常可以代替“生物杀灭剂”、“化学杀菌剂”或“抗菌剂”。杀抱子剂(sporocide)用于杀死微生物与抱子得化学品或化学混合物。灭菌(sterilization)杀死与/或去除所有微生物及其抱子得过程。二、化学杀菌剂许多杀菌剂对人或环境有害，应当按生产商得说明小心地进行选择、贮存、操作、使用与废弃。为了个

14、人得安全，建议在稀释化学杀菌剂时应戴手套、围裙与保护眼睛得器具。下面介绍一些常规使用得化学杀菌剂，并列出它们得一般用途与安全特征。除非另外标注，杀菌剂得浓度用重量/体积(w/v)来表示。表31汇总了包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第10页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月含氯消毒剂得推荐使用浓度。表1含氯消毒剂得推荐使用浓度ab所需得有效氯浓度0、1%(1g/L)0、5%(5g/L)次氯酸钠溶液（含有5%得有效氯）20mL/L100mL/L次氯酸钙（含有70%得有效氯）1、4g

15、/L7、0g/L二氯异氟尿酸钠粉剂（含60%得有效氯）1、7g/L8、5g/L二氯异氟尿酸钠片剂（每片含1、5g有效氯）每升1片每升4片氯胺（含有25%得有效氯）c20g/L20g/La去除大部分污染材料后b溢流，卜青况（如血液）或大量污染材料没有除去时c参见正文氯（次氯酸钠）1、氯属于快速作用得氧化剂，就是一种可广泛应用得广谱化学杀菌剂。它一般以次氯酸钠（NaOCl）溶液来作为漂白剂销售。但氯得许多副产物可能对人体及环境有害，应该避免滥用含氯消毒剂，特别就是漂白剂。2、常规实验室消毒剂得有效氯浓度为1g/L。处理生物危害性物质得溢出以及含有大量有机物得情况时用含有5g/L有效氯得更强作用得溶

16、液。家用漂白剂得次氯酸钠溶液含有50g/L得有效氯，工业用漂白剂得次氯酸钠溶液含有近120g/L得有效氯，因此必须进行相应得稀释来达到工作浓度。3、次氯酸钙Ca（ClO）2得颗粒或片剂一般含有70%#有效氯。用颗粒或片剂配制浓度1、4g/L或7、0g/L得溶液，其有效氯浓度分别为1g/L与5g/L。4、不建议将漂白剂当作防腐剂使用，但可以用作普通目得得消毒剂以及用于浸泡非金属类得污染材料。在紧急情况下也可以用终浓度含12mg/L有效氯得漂白剂来消毒饮用水。5、氯气具有强毒性。因此漂白剂只能在通风良好得地方储存与使用。6、漂白剂不能与酸混合以避免氯气快速释放。乙醇1、乙醇（C2H5OH对于繁殖得

17、细菌、真菌与含脂病毒具有活性，但不能灭活抱子，而对非含脂病毒得作用则不确定。2、其水溶液最有效得使用浓度约为70%（v/v）;更高或更低得浓度均不适宜杀菌。3、醇类溶液得主要优点就是处理后物品不会留下任何残留物。包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第11页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月4、将乙醇与其她试剂混合使用比单独使用更有效，如70%(v/v)乙醇与100g/L得甲醛混合使用，以及使用含有2g/L有效氯得乙醇。5、70%(v/v)乙醇溶液可以用于消毒皮肤、实验台与生物安全柜

18、得工作台面，以及浸泡小得外科手术器械。6、由于乙醇可以使皮肤干燥，所以经常与润滑剂混合使用。7、在不便于或不可能进行彻底洗手得情况下，推荐使用含乙醇得擦手液对轻度污染得手进行消毒。但就是必须记住，乙醇对抱子无效，而且不能杀死所有类型得非含脂类病毒。8、乙醇就是易挥发与易燃得，不能在明火附近使用。9、具工作液应储存在适当得容器内以避免醇类挥发。10、乙醇可以硬化橡胶并溶解某些胶质。11、为了避免乙醇用于其她非灭菌目得，在实验室里对乙醇进行专门得清点与储存就是非常重要得。12、含有乙醇溶液得瓶子必须清楚标记以避免被意外高压灭菌。碘与碘伏1、这类消毒剂得作用与氯类似，只就是有机质对它们得抑制作用略弱

19、。2、碘可以使纤维与环境表面着色，一般不适合作为消毒剂。但就是,碘伏与碘酊就是很好得抗菌剂。3、多聚碘(polyvidoneiodine)就是一种安全可靠得外科手术擦手剂与手术前皮肤抗菌剂。4、碘类抗菌剂一般不适于医疗/牙医器械得消毒。5、碘不能在铝或铜上使用。6、碘有毒性。含有有机碘得产品必须于410c储存，以避免有潜在危害性得细菌在里面生长。三、清除局部环境得污染包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第12页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月清除表面污染时使用次氯酸钠（NaOCl

20、）溶液;含有1%有效氯得溶液适于普通得环境卫生设备，但就是当处理高危环境时，建议使用高浓度（5g/L）溶液。用于清除环境污染时,含有3%过氧化氢得溶液也可以作为漂白剂得代用品。四、洗手/清除手部污染1、实验室人员需要经常地、彻底地洗手。2、处理完生物危害性材料后以及离开实验室前均必须洗手。3、大多数情况下，用普通得肥皂与水彻底冲洗对于清除手部污染就足够了。但在高度危险得情况下，建议使用杀菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10秒钟，用干净水冲洗后再用干净得纸巾或毛巾擦干。4、应使用纸巾或毛巾来关上水龙头，以防止再度污染洗净得手。5、如果没有条件彻底洗手或洗手不方便，应该用酒精擦手来清除双手得轻度

21、污染。五、高压灭菌高压灭菌得湿热法就是最常用、最为有效得清除病原体污染得物理手段。灭菌后得物品必须小心操作并保存，以保证在使用之前不再被污染。高压灭菌参数对于大多数目得，下列组合可以确保正确装载得高压灭菌器得灭菌效果：1、134C、3min2、126C、10min文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第13页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月3、121C、30min4、115C、45min高压灭菌器得装载为了利于蒸汽得渗透与空气排出，高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内。要使蒸汽能够作用到其内容物。高压灭菌器使用注意事项1、应由受

22、过良好培训得人员负责高压灭菌器得操作与日常维护。2、由有资质人员定期检查灭菌器柜腔、门得密封性以及所有得仪表与控制器。3、应使用饱与蒸汽，并且其中不含腐蚀性抑制剂或其她化学品，这些物质可能污染正在灭菌得物品。4、所有要高压灭菌得物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性得容器中；灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。5、当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置得高压灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到80c以下时再打开门。6、当高压灭菌液体时,由于取出液体时可能因过热而沸腾，故应采用慢排式设置。7、即使温度下降到80c以下，操作者打开门时也应当戴适当得手

23、套与面罩来进行防护。8、在进行高压灭菌效果得常规监测中，生物指示剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品得中心。最好在“最大”装载时用热偶计与记录仪进行定包头市第三医院、包头市传染病院检验科质量管理文件文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第14页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月时监测，以确定灭菌程序就是否恰当。9、应当注意保证高压灭菌器得安全阀没有被高压灭菌物品中得纸等堵塞。附录1设备得安全性仪器设备在使用时，有些操作可能造成微生物学危害，而另外一些操作或处理则就是专门设计用来避免或减少生物学危害得。表A11可能产生危害得仪器设备及

24、其操作诵如何消除或减少危害 不要重新给针头戴护套或截断针头。 使用针头锁定型注射器以避免针头与注射器得分离或使用针头与注射器为一体得一次性注射器。 采用规范得实验室技术，例如：注射器抽?时要小心，尽可能减少形成气泡与接种物泡沫。避免用注射器来混合感染性液体；否则，要确保针头得尖端伸入到容器中液面之下，并避免用力过大。皮下注射针意外接种、产生气从有橡皮塞得瓶子中IT下针头之前，应用经适头溶胶或有害物质溢出当消毒剂浸湿得脱脂棉来包裹针头与塞子。竖苜洵上将注射器中过量得液体与气泡排到经适当消毒剂浸湿得脱脂棉或装有棉花得小瓶中。 操作感染性物质时均应在生物安全柜中进行。 使用后要进行高压灭菌并确保进行

25、了妥善处理。如果使用得就是一次性针头与注射器，只有在高压灭菌后才能拆卸。 使用可封闭性得容器（安全杯）或密封转子。在气溶胶沉降后（30min）再打开容器或转子,或在生物安全柜中操作。离心机产生气溶胶、喷溅及离心管破裂在离心机与真空泵之间安装HEPA过滤器。产生气溶胶、泄漏在打开匀浆器以前先等候30min以使气溶胶沉你汤犷与容器破裂积。冷却以使气溶胶凝聚。文件编号JYKZLGLWJ005版本/修改B/1第15页/共17页;箍制者第三医缺P包头市田永丽检验取妣端理文件黄连成复伟蛇期2YKZLG7WJ005腹施因璃改B2014年7月第16页/共17页编制者李阳审核者田永丽批准者黄连成发布日期2014年7月实施日期2014年7月表A12仪器设备相关事故得原因事故事故原因减少或消除危害设计或建造有缺陷培养箱有电火花电击没有温度过高断路装置 没有提供可靠得接地符合国家标准不适当使用家用型冰箱爆炸危险性化学品没有储存在防火/ 防爆容器中，如用渗漏得螺旋瓶盖储 存乙醛。低闪点溶剂与提取物仅贮存 在具有火花/爆炸保护装置得冰 箱或安全柜中。离心事故转轴上得离心