高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量(精)

1、高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量张山 , 任海荣，陈娟（石家庄欧意药业有限公司质量控制部，石家庄050051）摘要 目的：建立高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量。方法 ：采用 Waters XbridgeC18 柱 （150mm×2.1mm，5m），以 0.025mol L·-1的磷酸氢二钠（ pH 9.0） -乙腈（ 45：55）为 流动相，流速为 0.35mL·min-1 ，柱温为 30，检测长为 215nm。 结果：线性范围为 467.70-1434.51g·mL -1 ，r =0.999758，平均回收率（n=15）为 99.9%（RS

2、D=1.1%） ；本方法重复性和 精密度良好（ RSD2.0%）。 结论： 本方法简便、准确、重复性好，可用于阿奇霉素干混悬剂的含量测定。关键词： 阿奇霉素干混悬剂;高效液相色谱法;含量测定Determination of azithromycin for suspension by HPLCZhang Shan,Ren Hairong,Chen Juan(Quality Control of Shijiazhuang OUYI Pharma.Co.,ltd.Shijiazhuang050051，ChinaAbstract Objective To establish a high-perfo

3、rmance liquid chromatography(HPLC method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18（150mm×2.1mm,5m）.The mobile phase composed of 0.025 mol L -·1 Na2HP04(pH9.0-acetonitrile(45：55.The flow rate was 0.35 mL min- ·1 , and the co

4、lumn temperature was 30.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51g·mL - 1,The average recovery(n=15 was 99.9% and RSD(n=15 was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15 was 0.6%;The repeatability and precision of the

5、method were good（ RSD2.0%）.Conclusion:This method is simple and believable with goodrepeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension.Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination阿奇霉素 (azithromycin 是一种 15 元氮环内酯类抗生素 ，其抗菌谱与红霉素相似但抗菌作

6、用更强,突出的优点是 对碱稳定，半衰期长，有较高的生物利用度 ，因此具有服药方便，疗程短，用药量少，疗效肯定等优点，其制剂阿奇霉素干混悬剂在国内外临床已广泛使用，中国药典2005 版二部采用抗生素微生物检定法测定其含量 ，其方法费时繁琐。本文参考有关文献、 5、6 ，采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便准确、重复性好，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定的方法之一。1 仪器与试剂Waters液相色谱仪（ Waters2695 泵及自动进样器， Waters 2487 紫外检测器）； Agilent 1100 液相色谱仪（四元泵，紫外检测器，自动进样器）；梅特勒 XS105 电子天平；色谱柱 Wat

7、ers Xbridge C18柱（ 150mm×2.1mm， 5m）。阿奇霉素工作对照品（含量946g·mg-1 ，批号： 0601，石家庄欧意药业有限公司）；阿奇霉素杂质A 工作对照品（含量95.4%，批号： aza060801，石家庄欧意药业有限公司）；阿奇霉素干混悬剂 (规格为 100mg，批号： 063070521 、063070301、 063070302，石家庄欧意药业有限公司；乙睛为色谱纯，美国 Fisher公司产品；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。2 色谱条件色谱柱： Waters XbridgeC18 柱（ 150mm×2.1mm，5m）；流动相

8、：0.025mol ·L -1 的磷酸氢二钠（ pH 9.0 ）-乙腈（ 45： 55）；流速： 0.35mL· min-1 ；柱温： 30；检测波长： 215nm；进样体积： 20L。3 溶液制备3.1 对照品溶液的制备精密称定阿奇霉素对照品25mg 和阿奇霉素杂质A 对照品 5mg，置同一 25mL 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。3.2 供试品溶液的制备取阿奇霉素干混悬剂，求出平均装量，将装量差异项下的内容物混匀，精密称取适量（约相当于m ），置25mL 容量瓶中，用阿奇霉素 25 g流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。4 系统

9、适用性试验按上述色谱条件 ,进样对照品溶液 20L，结果理论塔板数按阿奇霉素峰计算不小于1500；阿奇霉素峰与阿奇霉素杂质A 峰分离度大于 5.0； 阿奇霉素 峰的托尾因子不大于 2.0 ， 对照品溶液重复进样主峰面积的RSD<2.0%(n=55 线性关系试验按对照品溶液阿奇霉素浓度的50-150%5 个不同浓度梯度，分别是50%、 80%、制定100%、120%、150%，每个浓度梯度平行制备3 份样品溶液，共 15 份样品溶液，每份样品都 加入处方量辅料 ，用流动相溶解并定量稀释制成规定浓度，即得系列供试品溶液。按上述色谱条件，分别进样 20L，记录阿奇霉素 峰 面积，以浓度（ g&

10、#183; mL -1）为横坐标，以相应的阿奇霉素峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程： Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758结果表明：在 467.70-1434.51g·mL-1 范围内，阿奇霉素浓度与峰面积呈良好线性关系。6 回收率试验溶液制备同线性关系试验供试品溶液，按外标法以峰面积计算供试品中阿奇霉素（ C38H72N2O12）的含量，根据含量结果计算回收率，结果5 种浓度回收率（3）分别为 99.2%( RSD=0.5%,98.6%( RSD=0.9%,100.0%( RSD=0.3%,101.2%( RSD=0.7%,100.7%( RSD

11、=0.3%；平均回收率（）15 为99.9%( RSD=1.1%。说明此方法得到的测定结果准确可靠。7 精密度试验7.1 重复性 取同一批 (063070521 阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下方法制备所需溶液，平行测定6 次的含量结果， RSD 值为 0.8%。7.2 中间精密度 取 3 批阿奇霉素干混悬剂，在不同时间，由不同的化验员，按“3”项下方法制备所需溶液分别测定，二人测定的同批含量结果的相对平均偏差063070521为 0.8%， 063070301为 0.6%， 063070302为 1.6%。8 稳定性试验3批号： 0630705211小时，精密量按“ ”项下配制对照品溶液和样品

12、溶液（），每间隔取 20 L 注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样13 次，量取主峰面积，计算几次进样结果峰面积的 RSD 值。对照品溶液RSD 为 0.9%， 样品溶液 RSD 为 0.8%，表明 对照品 溶液和 样品溶液至少 在 12h 内稳定。9 样品测定取 3 批阿奇霉素干混悬剂， 按 “3”项下配制对照品溶液和样品溶液， 在上述色谱条件下分别进样 20L ，按外标法计算含量，结果与抗生素微生物法比较见下表表批号 本法 药典法(标示量 % (标示量 %063070521 99.2 100.6063070301 108.2 108.4063070302 102.6 103.9从表结果可看

13、出本法与药典采用的抗生素微生物效价法测定阿奇霉素干混悬剂的含量无显著性差异。10 讨论10.1 本文参考有关文献，对流动相的组成进行了探讨，发现采用本文的流动相即 0.025mol·L -1 的磷酸氢二钠（ pH 9.0）-乙腈（ 45：55），峰形稳定，分离较好。10.2 溶剂的选择 由于阿奇霉素干混悬剂的辅料较多，故溶剂选择比较困难。本法采用流动相和乙腈试验对比，结果发现均可溶样，但因纯乙腈毒性较大且价格较贵，故最后溶剂定为流动相。10.3 样品浓度选择 采用阿奇霉素浓度为1mg·mL-1 时峰形对称，和相邻杂质峰分离较好；浓度过大，峰拖尾严重且辅料量大而不好过滤；浓度

14、过小，准确度受影响。10.4 干扰试验 将溶剂和按处方工艺配制不含阿奇霉素的空白辅料，按“ 3项”下方法制备空白供试液，记录色谱图，结果显示空白溶剂和空白辅料对本法测定无干扰。如图插入对照、样品、空白试验图10.5 测定条件流动相的流速 ±0.05ml，柱温度 ±5，乙腈相比例 ±5%，缓冲盐pH±0.4 等进行小的变动，系统适用性均能达到试验要求，说明此方法适用范围较广。所以，我们认为本法简便、准确、重现性好，样品溶液稳定，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定方法之一。参考文献李荣凌，张先洲 .阿奇霉素临床应用分析 .中国医院药学杂志2006 年第 26 卷第 9 期张晔高效液相色谱法测定阿奇霉素片的含量中国药业2006 年第 15 卷第17 期国家药典委员会 .中华人民共和国药典（二部）S. 北京 .化学工业出版社，2005：附录 The United States Pharmacopeial Convention.USP29-NF24 Page227 International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2A: Guideline on Validation of Analytical Procedures: Defin