α－萘异硫氰酸酯诱导大鼠肝损伤机理及中药的保护作用

1、萘异硫氰酸酯诱导大鼠肝损伤机理及中药的保护作用表1 大鼠血清ALT活性 （U/L，xs）注：n=6，与模型组比较，*P0.05，*P0.01表2 大鼠血清AKP (U/L，xs)注：n=6，与模型组比较，*P0.01表3 大鼠血清TBIL (mg/dl，xs)注：n=6，与模型组比较，*P0.01 2.2 大鼠肝组织匀浆PLA2的变化 大鼠染毒2天后，肝组织匀浆PLA2活性明显增强，与空白组比较差异有显著性(P0.01)，天后，模型组与其他各组比较差异有显著性(P0.01)。天后，已经趋于正常水平。见表。表4 大鼠肝组织的PLA2活性 (U，xs)注：n=6，与模型组比较，*P0.01 2.3

2、 大鼠血清生化指标与肝组织PLA2关系 血清ALT、AKP、TBIL与肝组织匀浆PLA2呈正相关，相关系数分别为 ALT=0.61，AKP =0.577，TBIL=0.593 结果见图13。 图1图2图3 2.4 肝组织病变化 光镜下，可见空白组肝组织肝小叶结构完整，中央静脉周围有放射状排列的肝细胞索，窦间隙均匀、清晰，肝细胞体积较大，呈多边形，大圆形核居中，胞浆丰富，汇管区清晰可辨，无明显炎细胞浸润。模型组肝细胞发生广泛的水样变性，胞浆疏松化及混浊肿胀，肝细胞体积增大，使肝细胞索增粗变宽，而肝窦受压狭窄，甚至消失，能见到一定量的坏死灶，汇管区可见大量的中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润，胆管上

3、皮增生明显。金石散、地塞米松组，肝损伤程度明显恢复较快，肝细胞肿胀逐渐减轻，窦间隙逐渐清晰，胞浆疏松化、水样化逐渐好转，汇管区炎细胞渗出明显减轻，胆管上皮增生减少。 3 讨论 3.1 ANIT诱导大鼠肝损伤模型的适用性 肝毒性损伤模型的建立是完成本实验的基础。本实验以血清ALT、AKP、TBIL和肝组织形态学改变为指标，确认肝损伤是否形成，并以此进行动态观察。利用ANIT 诱导动物肝损伤模型在国内已有报道1。本次实验采用ANIT 100mg/kg体重，灌胃使大鼠染毒，2天后，大鼠血清ALT、AKP、TBIL明显升高(P0.01)，光镜下可见肝细胞变性坏死，汇管区大量炎细胞浸润，胆管上皮损伤伴增

4、生性改变。 由于ANIT诱导肝损伤是急性肝损伤，具有自限性，染毒天后，血清ALT、AKP、TBIL有所下降，病理切片肝细胞变性坏死，汇管区炎细胞浸润，胆管上皮损伤及增生有所减轻，但仍表现为典型的肝损伤状态(P0.01)。天后，以上各项指标与空白组比较仍有差异。上述结果表明，本实验模型急性肝损伤明显，损伤期能满足实验药物观察期限，效果满意。 3.2 PLA2在ANIT诱导大鼠肝损伤中的作用 ANIT诱导肝损伤机理仍不完全清楚。发现ANIT诱导的肝损伤表现为肝实质细胞，胆管上皮细胞坏死，汇管区大量中性粒细胞浸润2。ANIT诱导的肝损伤是中性粒细胞依赖性的肝损伤，ANIT在体外能使中性粒细胞活化，进

5、一步发现由活化中性粒细胞释放的细胞因子如组织蛋白酶、弹力蛋白酶对体外培养的肝细胞具有毒性作用3。 作为肝毒性损伤介质的中性粒细胞在肝损伤中如何发挥作用？过去曾提出过不同解释由于中性粒细胞浸润而诱发的肝细胞损伤，其一是由于中性粒细胞粘附于内皮细胞而导致血管狭窄、血流减少，但后来的实验并不支持这种观点；另一是粘附的中性粒细胞可产生活性氧与蛋白酶活性增加，但后来的实验证明，当炎症细胞浸润致肝损伤时，脂质过氧化程度比由过氧化物所引起的程序低一个数量级，因而认为活性氧并非导致肝细胞损伤的主要原因，认为蛋白酶可能是中性粒细胞介导的细胞毒性的重要因素。 中性粒细胞要引起肝毒性损伤需三个基本过程：(1)某些外

6、源性化学物质诱发中性粒细胞在肝脏内蓄积。(2)中性粒细胞穿透内皮细胞并蓄积于肝窦。(3)中性粒细胞粘附并诱发肝细胞损伤。这三个基本过程缺一不可，假如阻断其中任何一过程，就能减轻肝细胞毒性损伤。 PLA2存在于所有研究过的细胞内，在许多疾病中发挥重要作用。PLA2能调节炎性细胞的活化及炎症介质的产生和释放4。PLA2催化膜磷脂产生的花生四烯酸经脂氧合酶和环氧化酶作用产生大量炎症介质，包括氢过氧化合物、白三烯（LTS）、前列腺素（PGS）和血栓素（TXS）等类物质，均有不同程度的致炎及炎症趋化作用5。另外，PLA2在催化生成花生四烯酸的同时，又可生成溶血卵磷脂，继而转化为血小板活化因子（PAF）6

7、。 糖皮质激素具有抑制免疫反应，稳定溶酶体膜，抗内毒素血症作用，可起到保护肝细胞，减轻肝细胞坏死作用。糖皮质激素对大鼠血清磷脂酶A2的张力具有抑制作用7。实验中对经ANIT 诱导肝损伤的大鼠使用地塞米松后，肝组织PLA2活力下降，同时肝细胞坏死程度减轻，汇管区中性粒细胞浸润减少，血清生化指标下降，呈正相关，以上情况均说明，PLA2在ANIT诱导的肝损伤中发挥一定的作用。 3.3 金石散对ANIT诱导肝损伤的作用机制 大鼠经ANIT诱导产生肝损伤，经中药金石散治疗后，血清ALT、AKP、TBIL明显下降。光镜下，肝细胞、胆管上皮细胞变性坏死程度明显减轻，汇管区中性粒细胞浸润减少，同时肝组织中PLA2活力也降低。说明中药金石散对ANIT诱导的肝损伤具有保护作用。金石散是我院研制开发的治疗胆结石药物8，具有清热解毒、舒肝利胆、利湿退黄功效，能降低胆汁通中胆红素和黏液含量。 金石散对ANIT诱导肝损伤的机制可能通过降低PLA2张力，进而减少中性粒细胞在汇管区的聚集及与肝细胞的粘附，减轻肝细胞损伤。另外，金石散还可通过促进胆汁分泌，减轻胆管扩张，从而缓解胆管上皮细胞损伤。因此金石散的保护作用较糖皮质激素明显。总之，金石散对肝损伤的保护作用部分是通过降低PLA2活力发挥作用的，与糖皮质激素作用相似，同时还通过其他途径发挥作用，具体机制有待进一步探