微生物实验室培养第一课时

1、微生物实验室培养第一课时细菌 常见的三种细菌典型形态A.球菌 B.杆菌 C.弧菌细菌的构造有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢是休眠体，芽孢是休眠体，不是繁殖体！不是繁殖体！孢子(spore)脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细胞生殖细胞。通过孢子进行繁殖的有：蕨类植物，藻类植物，苔藓植物，真菌类等单个单个或少数菌体或少数菌体(2)(2)特征特征：大小、形状

2、、光泽度、颜色、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。(3)(3)意义意义：(1)(1)定义定义：鉴定菌种的重要依据鉴定菌种的重要依据固体培养基上固体培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体 蓝藻是原核生物，又叫蓝绿藻 ，蓝细菌;大多数蓝藻的细胞壁外面有胶质衣，又叫粘藻。在藻类生物中，蓝藻是最简单、最原始的单细胞生物，没有细胞核，细胞中央有核物质，通常呈颗粒状或网状，染色质和色素均匀的分布在细胞质中。核物质没有核膜和核仁，具有核的功能，故称为原核(或拟核)。蓝藻中有环状DNA质粒，担当运载体的作用。微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产是

3、由放线菌产生的生的 ，如，如链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素庆大霉素 等等衣原体衣原体为革兰氏阴性病原体，是一类能通过为革兰氏阴性病原体，是一类能通过细菌细菌滤器滤器、在细胞内寄生、有独特发育周期的、在细胞内寄生、有独特发育周期的原核细原核细胞胞性微生物。过去认为是性微生物。过去认为是病毒病毒，现归属，现归属细菌细菌范畴。范畴。衣原体广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。能衣原体广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。能引起人类引起人类疾病疾病的有的有沙眼衣原体沙眼衣原体、肺炎衣原体肺炎衣原体、鹦鹦鹉热鹉热肺炎衣原体。肺炎衣原体。支原体的大小为支原体的

4、大小为0.10.3um，菌落小，菌落小(直径直径0.11.0mm)，在，在固体培养基表面呈特有的固体培养基表面呈特有的“油煎蛋油煎蛋”状。无状。无细胞壁细胞壁，不能，不能 维维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感。革兰氏染色不易着革兰氏染色不易着色，故常用色，故常用Giemsa染色法染色法将其染成淡紫色。支原体基因组为将其染成淡紫色。支原体基因组为一环状以双链一环状以双链DNA，分子量小，分子量小(仅有大肠杆菌的五分之一仅有大肠杆菌的五分之一)，合成与代谢很有限。合成与代谢很有限。如：如：肺炎支原体肺炎支原体生物实验室常用的0.22微米滤器也无法将其完全

5、过滤，因此支原体是实验室细胞培养的头号公敌，经常杀细胞于无形之间。支原体没有经典的细菌细胞壁结构，所以它是一个不折不扣的变形高手。同样因为没有细胞壁，大多数作用于细胞壁合成的抗生素如青霉素等对支原体都是无效的。虽然大多数支原体不是致病菌，但部分支原体致病起来不是一般的菌。如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构青霉菌青霉菌青霉素青霉素根霉根霉 曲霉曲霉 青霉青霉SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质）1、培养基可以分为哪两类？2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？3、获得纯净培养物的关键是什么？ 4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四

6、个方面 5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？微生物需要的五大类营养要素物质是微生物需要的五大类营养要素物质是1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.生长因子生长因子 4.4.无机盐无机盐 5.5.水水自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物注：含注：含C C、H H、O O、N N的有机物是异养型微生的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源物的碳源、氮源、能源思考: 微生物有哪些营养方式(代谢类型）?你能各举一例? 是如何获能的?同化作用同化作用:异养型异养型; 自养型自养型异化作用异化作用:需氧型需氧型;厌氧型厌氧型自养型自养型

7、:光能或氧化无机物获能光能或氧化无机物获能;异养型异养型:有机物中获能有机物中获能各种营养类型微生物的碳源、能源比较：各种营养类型微生物的碳源、能源比较：* *小结：微生物小结：微生物C C源、能源源、能源 营养类型营养类型主要碳主要碳源源能源能源代表菌代表菌光能自养型光能自养型化能自养型化能自养型异养型异养型CO2CO2有机物有机物光能光能（NH3）化学能化学能化学能化学能蓝细菌蓝细菌硝化细菌硝化细菌大肠杆菌大肠杆菌含含C、H、O、N的大分子有机物可的大分子有机物可做异养微生物的碳源、氮源、能源做异养微生物的碳源、氮源、能源 ？ 可以可以同一种物质不可能既作碳源又作氮源。同一种物质不可能既作

8、碳源又作氮源。2）凡是碳源都能提供能量。）凡是碳源都能提供能量。3）除水以外的无机物仅提供无机盐）除水以外的无机物仅提供无机盐。 多项选择1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是A 光合细菌光合细菌 B 根瘤菌根瘤菌 C 硝化细菌硝化细菌 D 乳酸菌乳酸菌2、下列叙述不正确的是、下列叙述不正确的是A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同C 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细微生物在固体培养基上生长时，

9、可以形成肉眼可见的单个细菌菌A.CB.C.划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基1.培养基培养基的种类的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质, ,以抑制不需要

10、的微生物的生长以抑制不需要的微生物的生长, ,促促进所需要的微生物的生长进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微培养、分离出特定微生物生物在培养基中加入某种指示剂或化在培养基中加入某种指示剂或化学药品学药品, ,用以鉴别不同种类的微生用以鉴别不同种类的微生物物鉴别不同种类微生物鉴别不同种类微生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确 。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。合成培养基:天然培养基天然培养基和合成培养基和合成培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确。天然培养基有血清、血浆、

11、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。天然培养基:天然培养基和合成培养基的优劣点：天然培养基和合成培养基的优劣点： -天然培养基天然培养基-优点：具有营养丰富、原料易得、配制方便、优点：具有营养丰富、原料易得、配制方便、价格低廉、培养微生物效果好等。价格低廉、培养微生物效果好等。-缺点：是培养基中营养成分以及微生物对各种缺点：是培养基中营养成分以及微生物对各种营养物质的需要量难以确定，实验结果的重复性营养物质的需要量难以确定，实验结果的重复性差。差。-合成培养基合成培养基-优点：营养成分含量准确，因而实验的可重复优点：营养成分含量准确，因而实验的可重复性强。性强。-缺点：配制烦琐、成本较高、微生物

12、生长缓慢缺点：配制烦琐、成本较高、微生物生长缓慢。培养基的配制原则 目的要明确：根据培养的微生物种类、培目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。养的目的等确定培养基的类型和配制量。 营养要协调：培养基中各种营养物质的浓营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比度和比例要适宜。例如：碳氮比4141时，谷时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为比为3131时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。量大增。 pHpH要适宜：细菌培养基要适宜：细菌培养基pHpH中性或偏碱性

13、，中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。霉菌培养基呈酸性。1 1、何为无菌技术？无菌技术包括哪些、何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？方面？2 2、消毒和灭菌的区别？、消毒和灭菌的区别？3 3、常用的消毒方法有哪些？、常用的消毒方法有哪些？4 4、常用的灭菌方法有哪些？、常用的灭菌方法有哪些？5 5、干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操、干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。作步骤。自主学习：自主学习： 对实验操作的空间操作者的衣着和手，对实验操作的空间操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。进行清洁和消毒。 将用于微生物培养的器皿、接种用具和将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。培养基等进行灭菌

14、。 为避免周围环境中的微生物的污染，实验为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。操作应在酒精灯火焰附近进行。 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。用具与周围的物品相接触。无菌操作内容消毒消毒使用较温和的物理或化学方法仅杀死物使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。物（不包括芽孢和孢子）。灭菌灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。生物，包括芽孢和孢子。（1）日常生活经常用到

15、的是）日常生活经常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏巴氏 消消毒法（例如牛奶）；毒法（例如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，然等溶液以增强消毒效果，然后使用后使用 紫外线紫外线 进行物理消毒。进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用 酒精酒精 进行消毒；进行消毒；（5）饮水水源用）饮水水源用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。消毒的方法消毒的方法常用的消毒方法常用的消毒方法1 1、100100煮沸煮

16、沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、用、用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4 4、氯气消毒水源、氯气消毒水源5 5、紫外线消毒、紫外线消毒1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min。常用的灭菌方法常用的灭菌方法实验原理高压蒸汽灭菌高压

17、蒸汽灭菌 是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气的水沸腾而产生蒸气, ,从而使温度高于从而使温度高于100100。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。菌的目的。 是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋热时，当环境和细胞内含水量越大，则

18、蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。缓慢。干热灭菌干热灭菌实验原理紫外线灭菌 是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和聚体的形成和DNADNA链的交联，从而抑链的交联，从而抑制了制了DNADNA的复制。波长为的复制。波长为200-300nm200-300nm的的紫外线都有杀菌能力，其中以紫外线都有杀菌能力，其中以260nm260nm的杀菌力最强。的杀菌力最强。实验原理实验原理实验室常用灭菌方法的比较实验室常用灭菌方法的比较灭菌方灭菌方法法适用对象适用对象所需条件所需条件灭菌时间灭菌时间灼烧灭灼烧灭菌菌接种的金属工具接种的金属工具(如接种针、接种如接种针、接种环环)在酒精灯的火焰外在酒精灯的火焰外焰灼烧焰灼烧直至烧红直至烧红干热灭干热灭菌菌耐高温需干燥的耐高温需干燥的物品物品(如玻璃器皿、如玻璃器皿、金属用具金属用具)干 热 灭 菌 箱 内干 热 灭 菌 箱 内160170 12 h高压灭高压灭菌菌培养基培养基100 kPa；121 1530 minA.A.培养细菌用的培养基或培养皿培养细菌用的培养基或培养皿B.