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1、实验十实验十 水中细菌水中细菌总数的测定总数的测定一、目的要求一、目的要求v学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的方法；v学习掌握平板菌落计数的原理和方法。二、实验材料二、实验材料v水样v培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水v1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等 n饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升水样在普通琼脂培养基中，3724小时培养后所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过100个。三、基本原理三、基本原理v平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子细胞群体这一微生物的培养特征而设计的

2、一种计数方法。v将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算出样品中的含菌数。v现在倾向用菌落形成单位（colony-forming units，cfu）来表示样品的活菌含量。v平板菌落计数法可用于测定单细胞或单孢子微生物菌液的浓度，成品检验和水质检查。 四、操作步骤四、操作步骤v编号：取无菌培养皿9套，每3套为一组，在每组皿底分别写上10-1、10-2、10-3。另取3支无菌空试管排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3，并向试管中各加入9ml无菌生理盐水。

3、v稀释：用1ml无菌吸管精确地吸取1ml已充分混匀的菌悬液，注入10-1试管中（注意吸管不要碰到水面）。然后另取1支无菌吸管，于10-1试管中来回吹吸三次，使之混匀，即成10-1稀释液。再从10-1试管中吸1ml注入10-2试管中，重复上述操作，直至制成10-3稀释液。v取样：用三支1ml无菌吸管分别吸取10-1、10-2和10-3稀释液各1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。v倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml，置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出或溅到皿盖上。v培养：待培养基凝固后，倒置于37恒温培养箱中培养24h。v菌落计数方法菌落计数方法（1）计算相同稀释度的平均菌落数有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数2（2）选择平均菌落数在30300之间的平板只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。有两个在30300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。（3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。（4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。（5） 所有菌落数均不在30300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀

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