蛋白质的物理化学性质

1、 第四章第四章 蛋白质的物理化学性质蛋白质的物理化学性质重点与难点热力学相关函数：熵、焓、热容量蛋白质折叠相关作用力蛋白质的折叠过程第一节 热力学函数与蛋白质构象 一、热力学函数与热力学平衡内能：组成物体的所有分子的无规则运动的动能与分子间相互作用的势能之和。焓(enthalpy)：是一个系统的热力学参数。 它描述的是体系的一个状态性质，焓的变化是系统在等压可逆过程中所吸收的热量的度量。用符号H表示，即 H=E+pV E为系统内能，p为其压强，V则为体积熵（S）是度量体系混乱度的热力学函数 从微观的角度来看，熵具有统计意义，它是体系微观状态数(或无序程度)的一种量度。 熵值小，对应比较有秩序的

2、状态 熵值大，对应比较无秩序的状态 内能(E)和焓(H)是体系自身的性质，要认识它们，需凭借体系和环境间热量和功的交换从外界的变化来推断体系E和H的变化值。 熵也是如此，体系在一定状态下有一定的值，当体系发生变化时要用可逆变化过程中的热温熵来衡量它的变化值。 吉布斯自由能(Gibbs free energy,G):亦称吉布斯函数，它是定温定压下系统的状态函数。可以用公式表示为： G=H-TS=E+pV-TS其中，T为绝对温度；S为体系的熵注意:吉布斯自由能是体系的性质，它的大小只决定于体系的始态和终态，而与变化的途径无关(即与可逆与否无关)。 二、热容量热容量:指系统在某一过程中，温度升高（或

3、降低）1所吸收（或放出）的热量。热容量的单位是J/K。 系统的热容量与状态的转变过程有关，与它所包含的物质的质量成正比，不同过程的热容量不同。 系统吸收的热量为正值，释放的热量为负值 使用微分扫描量热仪直接测定热容量变化三、三、vant Hoff 焓焓 Vant Hoff 规则 ：荷兰科学家范特霍夫 提出, 温度每升高10 K, 反应速度增加2-4倍 当溶液中的活性状态N与失活状态U处于平衡时，平衡常数K=U/ N 取决于两种自由能之差G=GUGN 。 自有能差G也可以用焓差H=HUHN和 熵差S=SUSN 表示为： G = HTS 于是： RTlnK = H0TS0 由此看出，平衡常数对温度

4、的依赖关系可以用来估计H的大小。H0和S0 分别表示标准状态下的焓和熵。 所以 lnK = H0/ RT+S0/R 即 lnK =（H0/ R）（1/T）+S0/R焓主要用于焓主要用于两态转变两态转变模型的分析模型的分析四、蛋白质构象与热运动 构象:由于单键基本自由旋转以及键角有一定的柔性，一种具有相同结构和构型的分子在空间里可采取多种形态，分子所采取的特定形态称为构象。 构象角:围绕单键旋转的角度称为构象角,它决定了多肽链的一个结构 。 热运动:是指蛋白质溶液中所有分子的不停运动，包括了分子相对于容器的运动和分子内部各部分之间的相对运动。 热运动在溶液中和多肽链的各部分之间传播，主要是通过多

5、肽链各部分之间和多肽链与溶液分子之间的相互作用来实现的。 体系达到热力学平衡时，在空间的一定范围内和一定间隔内的平均热运动能量不再发生变化，蛋白质处于天然态 。五、热力学参数在分子水平上的解释 从分子的相互作用来理解蛋白质天然结构的稳定性 为了使蛋白质折叠起来，就需要通过多肽链各部分间相互作用所引起的内能的减少来抵消构象熵减少带来的自由能增加。 键键 键能键能/ /（kj/molkj/mol）氢氢 键键 13133030范德华力范德华力 4 48 8疏水作用疏水作用 12122020盐盐 键键 12123030二二 硫硫 键键 210210熵熵是水溶液中形成疏水基团间结合的主要热动力学是水溶液

6、中形成疏水基团间结合的主要热动力学驱动力。驱动力。 1静电相互作用l蛋白质的折叠态与退折叠态的空间结构不同，在水溶液中，表现为同一个可电离基团附近环境的有效介电常数的变化，于是它们的pka值也不同。l残基pka值的移动很小，但蛋白质大分子可电离集团相当多，小pka值移动的大量积累对蛋白质稳定性很重要。l静电相互作用对折叠稳定性潜在的重要性2范德华相互作用 范德华力（van der Waals interaction） 在物质的聚集态中，分子间存在着一种较弱的吸引力，当两个不带电荷的原子非常靠近时，它们的电子云相互作用，核周围电子位置的随机变化可能产生一个瞬间电偶。该电偶能够诱导邻近的原子产生一

7、个短暂的反向电偶。这两个电偶之间会产生微弱的引力,从而拉近两个原子核。这种微弱的吸引力即为范德华力 。范德华力组成： 取向力 :当极性分子相互接近时，它们的固有偶极将同 极相斥而异极相吸，定向排列，产生分子间的作用力 诱导力 :当极性分子与非极性分子相互接近时，非极性分子在 极性分子的固有偶极作用下，发生极化，产生诱导偶 极，然后诱导偶极与固有偶极相互吸引而产生分子间作 用力 色散力 :非极性分子之间，由于组成分子的正、负微粒不断运 动，产生瞬间正、负电荷重心不重合，而出现瞬时偶 极。瞬时偶极之间的相互作用力 。3.氢键（Hydrogen Bonding） 在生物相中最常见的氢键是在生物相中最

8、常见的氢键是羟基（羟基（-OH-OH）和氨基（）和氨基（-NH-NH）之之间，其稳定性递减次序大约是间，其稳定性递减次序大约是OHNOHNXONXONHN-NHOHN-NHO，这种键可，这种键可以发生在分子间、分子内或者二者的结合。以发生在分子间、分子内或者二者的结合。 氢键对蛋白质天然结构的稳定作用只能来自于水氢键对蛋白质天然结构的稳定作用只能来自于水- -水氢键水氢键+ +链内氢键，和水链内氢键，和水- -肽链肽链氢键两种情况下的自由能之差。蛋白质中有许多种氢键。氢键两种情况下的自由能之差。蛋白质中有许多种氢键。 分分 类类OHOH/cm/cm-1-1R R（O OO O）/nm/nm实实

9、 例例弱氢键弱氢键320032000.2700.270H H2 2O(O(水、水合物水、水合物) )R ROH(OH(醇、酚醇、酚) )中强氢键中强氢键28002800310031000.2600.2600.2700.270R RCOOH(COOH(羧酸羧酸) )强氢键强氢键700700270027000.2400.2400.2600.260MH(RCOO)MH(RCOO)2 2( (酸盐酸盐) )氢键在蛋白折叠过程中的作用氢键在蛋白折叠过程中的作用 杜克大学（杜克大学（Duke University）的化学家们通的化学家们通过改变蛋白质关键部位的单个原子，发现了过改变蛋白质关键部位的单个原子

10、，发现了相对作用力较弱的氢键在使线形蛋白折叠成相对作用力较弱的氢键在使线形蛋白折叠成能发挥生物活性的最稳定结构中有重要作用能发挥生物活性的最稳定结构中有重要作用 PANS,20064.疏水效应（hydrophobic effect） 疏水效应:水介质中球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基埋藏在分子的内部。 蛋白质溶液系统的熵增加（熵变化S为正值）是疏水作用的主要动力。 疏水作用是疏水基团或疏水侧链出自避开水的需要而疏水作用是疏水基团或疏水侧链出自避开水的需要而被迫接近。要使疏水氨基酸被迫接近。要使疏水氨基酸R基团排除水而埋在内部，基团排除水而埋在内部，至少需要两层二级结构。两种简单形式，至少需

11、要两层二级结构。两种简单形式，-环环（-loop）和）和-角（角（-corner）。）。A AB吲哚与苯环吲哚与苯环边对面边对面T T型接触型接触 恶唑环与苯环恶唑环与苯环面对面平行接触面对面平行接触 疏水作用的方向倾斜性实例图5.二硫键二硫键 二硫键(共价键) 为了确定蛋白质的一级结构，须在2-巯基乙醇、二硫苏糖类、巯基乙酸等硫化合物与尿素等变性剂同时存在下将二硫键打开 RNA酶复性实验发现二硫键对肽链的正确折叠不是必要的，但它对稳定折叠态结构作出贡献。6.盐桥或离子键 盐桥或离子键又称盐键，它是正电荷与负电荷之间的一种静电相互作用。 盐键的形成既是静电相互作用的过程也是熵增的结果。第二节

12、突变、稳定性和折叠 一、体外突变技术1.概念:体外突变技术是用酶学方法和化学方法剪切或合成DNA ，将突变导入到克隆化的基因中，再将改变的基因重新克隆到生物体中分析该基因的功能变化的一项技术。2.分类: 随机突变 定点突变 3.应用:研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系 。4.具体事例：改进-抗胰蛋白酶-抗胰蛋白酶与嗜中性白细胞弹性硬蛋白酶结合形成复合物,将后者在Met358和Ser359之间切断Met358 Val358 提高重组干扰素的专一活性- IFN 基因在E.coli中表达,产物的抗病毒活性为天然糖基化蛋白的10% 3个Cys Cys31-Cys141 Cys17 Ser17 提高T4

13、溶菌酶的热稳定性T4 溶菌酶(Cys54 -Cys97) Ile3 Cys3 -Cys97 热稳定性Cys21 Cys142 稳定性 酶活性 磷酸丙糖异构酶的结构改造提高其稳定性 高温：Asn Asp Gln Glu 失活 Asn14 、Asn78 Thr或Ile 热稳定性二、突变与热稳定性二、突变与热稳定性1.1.定点突变对蛋白质稳定性的影响定点突变对蛋白质稳定性的影响 氨基酸的氨基酸的插入和删除插入和删除、寡聚化寡聚化和和脯氨酸取代脯氨酸取代这三因素可以稳定这三因素可以稳定个别嗜热蛋白。个别嗜热蛋白。2.2.导致热稳定性的因素导致热稳定性的因素 堆积、寡聚化、氨基酸插入和删除、脯氨酸取代、

14、螺旋含量、螺旋倾向、极性堆积、寡聚化、氨基酸插入和删除、脯氨酸取代、螺旋含量、螺旋倾向、极性表面积、表面积、氢键氢键和和盐桥盐桥3.3.突变试验增加蛋白质的亲盐性突变试验增加蛋白质的亲盐性 例如亲盐的苹果酸脱氢酶中的唯一的例如亲盐的苹果酸脱氢酶中的唯一的GluGlu替换为替换为ArgArg三、蛋白质折叠三、蛋白质折叠1 . 蛋白质折叠研究的概况蛋白质折叠:蛋白质的一级结构并没有生物活性，结构决定功能，一维的线型氨基酸序列转化为具有特征三维结构的天然蛋白质才具有生物活性，这种自我组装的过程被称为蛋白质折叠。追踪蛋白质重折叠的全过程的实验方法： 快速核磁共振，快速光谱技术（荧光、圆二色谱）蛋白质折

15、叠技术的研究应当将蛋白质结构研究与折叠过程动力学研究相结合以促进对蛋白质折叠机理的认识。“新生肽的折叠”问题与中心法则proteinprotein polypeptide 翻译翻译折叠折叠退折叠退折叠失活或变性失活或变性转录转录逆转录逆转录? ?DNADNARNARNA 2蛋白质折叠机制Anfinsen经典的“热力学假说” 天然蛋白质多肽链采取的构象是在一定环境条件下热力学上最稳定的结果，采取天然构象的多肽链和它所处的一定环境条件整个系统的总自由能最低。蛋白质多肽链折叠的过程，也就是从众多可能的构象中寻找系统自由能最低的状态的过程。Wolynes提出粗糙能量地形面的观点 即折叠是在一个折叠漏斗

16、中进行的。蛋白质折叠的过程就象多溪流水从具有复杂地形结构的山坡流下一样，而不仅是一溪流水从一单个山谷中流下。 折叠的能量漏斗模型形象地描绘了折叠过程的多路径性图图 能量漏斗模型能量漏斗模型http:/蛋白质折叠过程假设 肽链中的局部肽段先形成一些构象单元即螺旋、折叠和转角等二级结构，然后再是二级结构的组合、排列形成蛋白质的三级结构。 首先是肽链内部的疏水作用起作用，产生一个塌陷过程，然后经调整，形成不同层次的结构。 不同的假设，都有一个所谓“熔球态”的中间状态 熔球体：在折叠中，第一个可观测到的中间体是未折叠多肽卷折成局部有组织的球状态。分子伴侣与与蛋白质折叠“有帮助的肽链的自发折叠和组装”

17、3.蛋白质折叠研究的最新进展 巴西圣保罗州立大学,美国纽约州立石溪大学,以及中科院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室的研究人员在之前研究的基础上发现了扩散(diffusion)在蛋白折叠动力学方面的重要作用。 扩散系数随着蛋白质天然状态折叠级数的增加而减小，这主要是由于构造空间约束的一种紧密状态的塌陷造成的。它改变折叠动力学的比率和动力学路径。PNAS 美国康奈尔大学和Scripps Research Institute的研究者发现：沿着肽链具有很多疏水基团依赖自身折叠的位点，生成了小型的非极性疏水袋，蛋白质沿着包含有非极性基团或者含有不带电荷分子的氨基酸链处开始折叠，并通过这些非极性

18、基团的组合进一步折叠。4.蛋白质折叠研究意义及应用前景蛋白质折叠研究意义 蛋白质折叠机制的阐明有助于揭示生命体内第二套遗传密码的理论意义。 最终阐明遗传信息传递的全过程，完全建立分子生物学的中心法则。应用前景（1）对包涵体的复性有重要帮助（2）DNA重组和多肽合成技术的发展使我们能够按照自己的意愿设计较长的多肽链（3）深入了解蛋白质折叠与错误折叠的关系对于这些疾病的致病机制的阐明以及治疗方法的寻找将大有帮助（4）蛋白质折叠机制的阐明是我们对于蛋白质相互作用、配体与蛋白质的作用等结构与功能关系研究的基础（5）提高蛋白质结构预测的可靠性第三节 蛋白质折叠热力学与动力学蛋白质折叠内容： （1）变性的

19、蛋白质或多肽链的折叠 （2）通过三联密码翻译成的氨基酸序列链(新生肽链) 的折叠蛋白质折叠的研究方法 （1）X-射线晶体衍射 （2）同源模建方法 （3）从蛋白质序列出发，直接预测蛋白质的结构？ 一、蛋白质折叠的热力学研究 Anfinsen认为,蛋白质的折叠结构在一定条件下是热力学最稳定的,即通常的自由能极小的状态。 环境条件不同，热力学平衡移动的方向就不同，可以向天然态方向移动，也可以向退折叠方向移动，就有了平衡态的折叠和退折叠转变过程。 通过熵函数和吉布斯自由能,简要分析蛋白质折叠结构中所蕴涵的热力学基本原理典型的蛋白质的折叠漏斗典型的蛋白质的折叠漏斗（引自（引自Patricia L. Cl

20、arkPatricia L. Clark）能 量未 折 叠 状态中间状态天然状态蛋白质折叠研究的漏斗模型 1.熵效应 熵增加原理：在绝热条件下，体系发生不可逆过程时，其熵值增大；而体系发生可逆过程时，其熵值不变；不可能发生熵值减小的过程。 疏水作用的主要动力来自于蛋白质溶液体系的熵增效应。 例如,疏水作用是肌红蛋白多肽链折叠的主要驱动力, 使水介质中球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基隐藏在分子的内部，其在稳定蛋白质的三维结构方面占有突出的地位。2.吉布斯自由能变化 G总=H链+H溶剂- TS链- TS溶剂 折叠态蛋白质与伸展态相比，是一种高度有序化的结构，因此S链是负数，则-TS链为正值。

21、折叠态蛋白质中疏水侧链主要是通过范德华力彼此相互作用。 对于典型的蛋白质来说，对折叠结构的稳定性做出单项最大贡献的是疏水残基引起的S溶剂。 3折叠/退折叠转变 蛋白质折叠归根结底取决于在某温度（T）下折叠态（F）和伸展态（U）之间的吉布斯自由能差（G）： G=GFGU=HTS=（HFHU）T（SFSU） 在伸展态中多肽主链及其侧链是与溶剂水（也称介质水或环境水）相互作用的，因此折叠时自由能变化（G）的任何测量必须考虑多肽链和溶剂两者对焓变化（H）和熵变化（S）的贡献： G总=H链H溶剂TS链TS溶剂 极性侧链H链是正值，而H溶剂是负值。对蛋白质的极性侧链来说，G总接近于零，对蛋白质折叠不作实质

22、性的贡献。 蛋白质蛋白质条条 件件 G/(kJG/(kJmolmol-1-1) )H/(kJH/(kJmolmol-1-1) )S/( JS/( Jk k-1-1molmol-1-1) )核糖核酸酶核糖核酸酶A ApH2.5pH2.5-7.3-7.3-238-238-774-774胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶pH3.0pH3.0-32-32-163-163-439-439肌红蛋白肌红蛋白pH9.0pH9.0-57-57-157-157-397-397-乳球蛋白乳球蛋白5mol/L5mol/L尿素尿素-1.7-1.7+88+88+301+301几种蛋白质折叠的热力学数据几种蛋白质折叠的热力学数据在不

23、同蛋白质中总熵变化（S链+S溶剂）和总焓变化对折叠结构的稳定性所做的贡献的份额是不同的S S溶剂溶剂S S链链H H溶剂溶剂H H链链G G总总能量能量 0 0 （a a）真空中的蛋白质）真空中的蛋白质 伸展态伸展态折叠态折叠态能量能量 0 0 （b b）水溶剂中的疏水侧链）水溶剂中的疏水侧链 伸展态伸展态折叠态折叠态能量能量 0 0 （c c）水溶剂中的极性侧链）水溶剂中的极性侧链 伸展态伸展态折叠态折叠态决定球状蛋白质折叠自由能的各项的贡献方式的图解决定球状蛋白质折叠自由能的各项的贡献方式的图解4.量热法与折叠过程热力学 量热试验是用一种微分扫描量热仪直接测定热容量的变化，还可以测定焓变、

24、熵变。 典型的球蛋白退折叠微分描述量热曲线示意图（参考王大成等）典型的球蛋白退折叠微分描述量热曲线示意图（参考王大成等）两边两条虚线分别代表天然态和退折叠态的热容量并已外推进入转变区；峰线下的面积即为转变潜热。两边两条虚线分别代表天然态和退折叠态的热容量并已外推进入转变区；峰线下的面积即为转变潜热。11510040557085T/0204060cp/kJmol-1NU二、蛋白质折叠的动力学研究蛋白质折叠蛋白质折叠 线性多肽链的线性多肽链的一级结构一级结构最终形成具有最终形成具有三维三维 结构结构特征并表现其特征并表现其生物学生物学功能的天然蛋白质功能的天然蛋白质的的 复杂过程。复杂过程。 成核

25、成核变性蛋白变性蛋白二级结构二级结构结构域结构域折叠的交互式蛋白折叠的交互式蛋白折叠的活性单体折叠的活性单体 组装组装 交互式寡聚蛋白交互式寡聚蛋白活性寡聚蛋白活性寡聚蛋白 1折叠动力研究技术与方法 Levinthal puzzle：假定每个氨基酸残基可能的构象状态数为j，一个有N+1个氨基酸残基，N个肽单位的完全去折叠蛋白质，其肽链可能获得的构象状态数为j N。 例如j=8,一个有101个氨基酸残基的较小的蛋白质，其肽链的可能构象状态为8100（1089） 如果构象之间的转换速率为k，蛋白分子经历全部构象的平均时间为： =（Nk）-1jN 例如：101个氨基酸残基的蛋白质经历全部构象的时间多

26、于1066年。 蛋白质的折叠不是一个随机过程，而是通过特定的动力学途径达到天然构象，即动力学上最容易达到的构象。吉布斯自由能吉布斯自由能构构 象象热力学控制热力学控制天然状态天然状态 吉布斯自由能吉布斯自由能构构 象象天然状态天然状态非天然状态非天然状态蛋白质折叠的热力学控制和动力学控制蛋白质折叠的热力学控制和动力学控制动力学控制动力学控制l蛋白质天然构象的形成 蛋白质多肽链正确折叠原因 某些因素在蛋白质折叠的动力学过程中起控制作用 。 如：I型人类胰岛素生长因子（IGF-I） 枯草杆菌蛋白酶(subtilisin) 蛋白质折叠动力学控制的研究基础-热力学假说 蛋白质构象的研究方法 测定溶液中

27、的蛋白质分子构象 测定晶体蛋白质分子构象 测定蛋白质构象的各种方法方方 法法提供的结提供的结构信息构信息主要指标主要指标主要设备主要设备应应 用用核磁共振核磁共振溶液中蛋白质分子构象；溶液中蛋白质分子构象；构象动力学构象动力学化学位移，谱线强化学位移，谱线强度，自旋偶合常数度，自旋偶合常数脉冲傅里叶脉冲傅里叶NMR波谱仪波谱仪越来越多越来越多圆二色性光谱法圆二色性光谱法二级结构二级结构及其变化及其变化椭圆度椭圆度圆二色性光谱仪圆二色性光谱仪很多很多荧光光谱荧光光谱Tyr或或Tyr微区；构象变微区；构象变化化发射光谱，发射光谱，量子产率量子产率自动扫描荧光分光光度自动扫描荧光分光光度计计很多很多

28、紫外差示光谱法紫外差示光谱法Tyr或或Tyr微区；构象变微区；构象变化化不同波长不同波长OD双光路紫外分光光度计双光路紫外分光光度计很多很多激光拉曼光谱法激光拉曼光谱法二级结构二级结构拉曼光谱峰拉曼光谱峰激光拉曼光谱仪激光拉曼光谱仪不够成熟应用不够成熟应用比较困难比较困难氢同位素交换氢同位素交换氢键数目，规则二级结氢键数目，规则二级结构含量构含量与环境水不可交换与环境水不可交换的肽键氢的个数的肽键氢的个数1.红外分光光度计红外分光光度计2分子筛分子筛+氚测定氚测定较少较少X射线衍射结构分射线衍射结构分析析多肽链上所有原子的空多肽链上所有原子的空间排布，但氢原子除外间排布，但氢原子除外衍射点的强

29、度和位衍射点的强度和位置置高分辨率高分辨率X射线衍射仪射线衍射仪很多很多小角中子衍射小角中子衍射多肽链上所有原子的多肽链上所有原子的空间排布空间排布散射强度的分布散射强度的分布中子源；小角相机中子源；小角相机刚起步刚起步2.过渡态 模拟的折叠过程模拟的折叠过程l过渡态理论 是否适合于描述蛋白质分子的折叠退折叠过程 ？3折叠中间态(1)熔球态（molten globule） 主要特征: 天然态二级结构，但三级结构却不完整； 它比天然态有较多的疏水区域暴露； 当熔球态变性到伸展态时，温度跃迁消失。 例如Goto等发现，在强酸导致肽链完全伸展时，可以得到-乳球蛋白（-Lactoglobulin）、细

30、胞色素c（cytochromec）及去辅基肌红蛋白（apo-Mb）的熔球态。 蛋白质正确折叠过程中的阻碍部分折叠的中间体在分子间疏水作用下而引起的聚集脯氨酸残基的异构化半胱氨酸错误配对而形成的二硫键连接朊病毒：正常蛋白的错误折叠形成的致病蛋白朊病毒：正常蛋白的错误折叠形成的致病蛋白-朊病毒蛋白朊病毒蛋白(PrP)在脑组织中累积而引在脑组织中累积而引起的起的 朊病毒蛋白错误折叠朊病毒蛋白错误折叠http:/ 蛋白质退折叠态的构象上具有多样性: 例如牛胰核糖核酸酶在变性条件下发生退折叠，结果表明，只能观察到两种构象天然态N和伸展态U，并且它们处于快速平衡中： RNase的重折叠快相和慢相的双相动力

31、学过程 退折叠蛋白质中，脯氨酰异构化是研究得较为清楚的慢反应慢慢 U UF F U US SN N 快快 U UM M N N 蛋白质在某些变性条件下还存在平衡中的另一状态，如-乳清蛋白。（3）二硫键引起的中间态 二硫键异构酶功能 具有催化蛋白质天然二硫键快速形成的能力 特异性较低可与各种不同的肽链结合 二硫键异构酶作用机制推测 通过与肽段结合阻止了错误的折叠途径,促进生成正确的中间物，帮助肽链折叠使相应的巯基配对，从而使正确的二硫键得以形成，然后催化巯基的氧化或二硫键的异构而形成天然二硫键。 巯基二硫键氧化还原酶在二硫键生成反应中起着氧化剂的作用 例如： 大肠杆菌中有DsbA和DsbC蛋白，真核细胞中有二硫键异构酶4折叠的基本过程 折叠主要经历以下三种基本过程接触形成螺旋-链环转变发卡（-hairpin）：是普遍存在于球状蛋白中的一种结构，由一条