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文档简介
1、植物生理学实验报告实验题目:叶绿素含量的测定姓名 班级 学号 1、 实验原理和目的根据朗伯一比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。叶绿素(丙酮)在652nm。昆合)、663nm 645nmW最大吸收峰。叶绿素(95%乙醇)在665nm 649nm类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰,根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素的含量2、 实验器具和步骤植物材料:女贞实验器具:分光光度计;电子天平;研钵;试管; 小漏斗;滤纸;吸水纸;移液管;量筒;剪刀试剂:95 %乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸钙粉步骤:1.称取剪碎的新鲜样品0.1g左右,放入研钵中,加少量石英砂和碳
2、酸钙粉及35ml95%乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白。静置 35min2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到 10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。3. 用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀4. 把叶绿体色素提取液倒入光径 1cm 的比色杯内。以95乙醇为空白,在波长665nm、649nmn 470nm下测定吸光度5. 计算公式:叶绿素的含量(mg/g)=(浓度X提取液体积X稀释倍数)/样品鲜重。Ca=13.95A665 6.88A 64
3、9;Cb=24.96A649 7.32A 665C 类=(1000A47h2.05Ca-114.8Cb)/245单位:mg/L3、 实验数据和作业2、计算叶绿素含量计算公式:叶绿素的含量(mg/g)=(浓度x提取液体积x稀释倍数)/样品鲜重。Ca=13.95A665 6.88A649 ;Cb=24.96A649 7.32A665C 类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位: mg/L由上面的公式进行代入计算,有:Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448C类=(1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448) /245=2.8901则:叶绿素含量=(29.29684*10*0.001*1 ) /0.1=2.92974、 数据分析实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差5、 思考题为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80 的丙酮,而新鲜的材料可以用无水丙酮提取?答:因为叶绿素存
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