血栓与止血试验ppt课件

1、 血栓与止血检验血栓与止血检验 临床血液学教研室 第一节第一节 血栓与止血的挑选检验血栓与止血的挑选检验一、一期止血缺陷的挑选检验一、一期止血缺陷的挑选检验二、二期止血缺陷的挑选检验二、二期止血缺陷的挑选检验三、纤溶活性加强的的挑选检验三、纤溶活性加强的的挑选检验四、四、 抗凝物质检验抗凝物质检验 出血时间测定出血时间测定 血小板计数血小板计数 束臂实验毛细血管脆性实验束臂实验毛细血管脆性实验 血块收缩实验血块收缩实验 毛细血管抵抗力实验毛细血管抵抗力实验 第一节第一节 一期止血筛查实验一期止血筛查实验出血时间测定出血时间测定(bleeding time(bleeding time，BT)BT

2、) 一、原理：一、原理： 测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停顿所需的时间即为出血时间。此过程反然停顿所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管与血小板的相互作映了毛细血管与血小板的相互作 用，包括用，包括内皮下组织与血小板粘附经过内皮下组织与血小板粘附经过vWF 的作用的作用、血小板的聚集和释放等反响，以、血小板的聚集和释放等反响，以 及及PGI2与与TXA2的动态平衡。的动态平衡。二、方法二、方法 Duke法、法、 Ivy法、出血时间测定器法法、出血时间测定器法TBT法法 卫生部引荐方法卫生部引荐方法三、试剂与器材：三、试剂与器材： 1、血压计，秒表，

3、干净滤纸、血压计，秒表，干净滤纸 2、出血时间测定器、出血时间测定器 四、操作：四、操作： 1、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维 持在持在40mmHg,儿童减半。儿童减半。 2、在肘前窝下、在肘前窝下5cm处的尺侧做部分消毒后，将处的尺侧做部分消毒后，将测定器垂测定器垂 直贴于皮肤外表，按下按钮，同时启动秒表，直贴于皮肤外表，按下按钮，同时启动秒表，移开测移开测 定器。定器。 3、每隔、每隔30s,用干净滤纸吸去流出的血液，直至用干净滤纸吸去流出的血液，直至流血自然停顿，并记录秒表读数。流血自然停顿，并记录秒表读数。 五、参考值五、参考值 ： 2.

4、3-9.5 min六、临床意义：六、临床意义： 延伸：延伸： 1、 血小板数量异常，如血小板数量异常，如ITP、TTP 2、血小板功能异常，如、血小板功能异常，如plt无力症、宏大无力症、宏大plt综合征、综合征、 储存池病储存池病 3、 血管壁异常血管性血友病、遗传性血管壁异常血管性血友病、遗传性毛细血管扩张症毛细血管扩张症 4、某些严重的凝血因子缺乏、某些严重的凝血因子缺乏 缩短：高凝形状和血栓性疾病缩短：高凝形状和血栓性疾病七、质量控制七、质量控制 1、留意影响、留意影响BT测定的要素测定的要素 2、滤纸吸去血液时，防止与伤口接触、滤纸吸去血液时，防止与伤口接触 3、留意药物的影响抗凝剂

5、、留意药物的影响抗凝剂、A 血小板检验血小板检验一、血小板计数一、血小板计数二、血小板生存时间检测二、血小板生存时间检测三、血小板相关抗体检测三、血小板相关抗体检测四、血小板粘附实验四、血小板粘附实验五、血小板聚集实验五、血小板聚集实验六、血小板第六、血小板第3因子有效性检测因子有效性检测七、血小板膜糖蛋白检测七、血小板膜糖蛋白检测八、血小板活化目的检测血浆八、血小板活化目的检测血浆-TG、PF4、血、血 小板小板P选择素检测选择素检测 血小板计数血小板计数platelet count , PCplatelet count , PC或或pltplt 正常值：正常值：100300109/L危险危

6、险PCPC2020109/L109/L可引起自发性出血可引起自发性出血 血 小 板 粘 附 试 验 ( platelet adhension test,PAdT)原理：原理： 受检者血液一定速度经过一定量玻璃珠的塑料受检者血液一定速度经过一定量玻璃珠的塑料管，测定经过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，管，测定经过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法临床意义：临床意

7、义： 血管性血友病、宏大血小板综合症、血小板无血管性血友病、宏大血小板综合症、血小板无力症、肝硬化、力症、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小、急性白血病、服用抗血小板药物等板药物等 血栓前形状和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药血栓前形状和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等等粘附率减低粘附率减低粘附率增高粘附率增高诱聚剂诱聚剂PPPPPPPRPPRP血血 小小 板板 聚聚 集集 试试 验验platelet aggregation tset，PAgT比浊法：以比浊法：以PPP设最低浊度，设最低浊度，PRP设最高浊度，在血浆中参与诱聚设最高浊度，在血浆中参与诱聚剂，测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集

8、曲线。剂，测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集曲线。 临床意义：临床意义： 血小板无力症、血管性血友病、宏大血小板血小板无力症、血管性血友病、宏大血小板综合症、血小板储存池病、低无纤维蛋白综合症、血小板储存池病、低无纤维蛋白原血症、肝硬化、运用血小板抑制剂等。原血症、肝硬化、运用血小板抑制剂等。 高凝形状、血栓构成性疾病、动脉粥样硬化高凝形状、血栓构成性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术后、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术后、吸烟等。吸烟等。聚集率减低聚集率减低聚集率增高聚集率增高质量控制：质量控制： 1. 1.采血要顺利，防止组织液混入，抗凝剂运用合理不用采血要顺利，防止

9、组织液混入，抗凝剂运用合理不用EDTAEDTA抗凝抗凝 2. 2.采集后采集后3h3h内室温下完成内室温下完成 3. 3.实验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；实验前禁实验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；实验前禁食高脂类食物食高脂类食物 4. 4.留意留意 PRP PRP：1000r/min1000r/min离心离心10min10min PLT(100 PLT(100300)300)109/L109/L PPP PPP ：3000r/min3000r/min离心离心20min20min PLT PLT2020109/L109/L 全血凝固时间测定全血凝固时间测定CT 活化部分凝血活酶时间

10、测定活化部分凝血活酶时间测定APTT 血浆凝血酶原时间测定血浆凝血酶原时间测定PT 第二节第二节 二期止血缺陷筛查检验二期止血缺陷筛查检验全血凝全血凝 固时间测定固时间测定(coagulation time, CT) 原理原理 察看血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间察看血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间血液血液从血管中从血管中抽出抽出与带负电荷与带负电荷外表接触外表接触内源性凝血途径启动内源性凝血途径启动纤维蛋白构成血液凝固纤维蛋白构成血液凝固临床意义临床意义 1. 因子因子VIII、IX、XI活性减低；严重的因活性减低；严重的因子子、和纤维蛋白原缺乏和纤维蛋白原缺乏 2. 原发性纤溶

11、亢进；血循环中存在抗凝原发性纤溶亢进；血循环中存在抗凝物质物质 高凝形状和血栓性疾病高凝形状和血栓性疾病CT延伸延伸CT缩短缩短肝素治疗用量检测目的肝素治疗用量检测目的活活 化化 部部 分分 凝凝 血血 活活 酶酶 时时 间间 测测 定定 (activated partial thromboplastin time，APTT)一、原理一、原理APTT Ca2+脑磷脂脑磷脂白陶土白陶土 Ca2+脑磷脂脑磷脂部分凝部分凝血活酶血活酶 二、操作二、操作 一一APTT手工法手工法(试管法试管法 血浆血浆0.1mlAPTT试剂各试剂各0.1ml +CaCl20.1ml 混匀计时混匀计时 结果察看：缓慢倾

12、斜试管，察看液体流动形状，流动结果察看：缓慢倾斜试管，察看液体流动形状，流动 停顿停顿计时停顿停顿计时 参考值参考值 25 45s (二仪器法二仪器法 3737水浴水浴5min3737温浴温浴 APTT APTT延伸延伸缩短缩短因子因子VIII、IX、XI活性减低活性减低高凝形状高凝形状三、临床意义三、临床意义 肝素抗凝监测肝素抗凝监测APTT纠正实验纠正实验 于患者血浆中分别参与于患者血浆中分别参与1/4 的正常新颖血浆、硫酸钡的正常新颖血浆、硫酸钡吸附血浆、正常血清，再作吸附血浆、正常血清，再作APTT实验。实验。 硫酸钡吸附血浆硫酸钡吸附血浆 VIII、XI、XII 不含不含IX 正常血

13、清正常血清 IX、XI、XII不含不含VIII 新颖血浆新颖血浆 VIII、IX、XI、XII 血友病甲血友病甲血友病乙血友病乙F缺乏缺乏正常血浆正常血浆硫酸钡吸附血浆硫酸钡吸附血浆 缺缺正常血清正常血清(缺缺)纠正纠正不纠正不纠正纠正纠正纠正纠正纠正纠正纠正纠正不纠正不纠正患者血浆患者血浆纠正纠正纠正纠正凝血酶原时间测定凝血酶原时间测定Prothrombin time ，PT一、原理一、原理 Ca2+脑磷脂脑磷脂PT组织因子组织因子Ca2+ 脑磷脂脑磷脂二、报告方式二、报告方式 1. 直接报告患者及正常对照的直接报告患者及正常对照的PT秒数秒数 2. 报告凝血酶原时间比值报告凝血酶原时间比值

14、PTR PTR=受检者受检者PT秒秒/正常对照正常对照PT秒秒 3. 报告国际规范化比值报告国际规范化比值INR INR=PTRISI 组织凝血活酶的国际敏感指数组织凝血活酶的国际敏感指数internation sensetivity index,ISI是用组织凝血活酶试剂与是用组织凝血活酶试剂与ISI知的国际参比品知的国际参比品或经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数或经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数。 测定方法：测定方法： 用多份凝血因子程度不同的血浆包括正常人和口服用多份凝血因子程度不同的血浆包括正常人和口服抗凝剂患者的血浆，用参比品测得它们的抗凝剂患者的血浆，用参比品

15、测得它们的PT的对数的对数lgPT，再用待标定的组织凝血活酶测得它们的，再用待标定的组织凝血活酶测得它们的lgPT，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。直线斜率。 待标定的组织凝血活酶的待标定的组织凝血活酶的ISI=知的知的ISI斜率斜率 PT PT延伸延伸缩短缩短因子因子VII、 II、V、X、Fg活性减低活性减低高凝形状高凝形状三、临床意义三、临床意义 口服双香豆素类抗凝药物监测口服双香豆素类抗凝药物监测要保证止凝血检验的质量要保证止凝血检验的质量 必需做好以下十点：必需做好以下十点：1. 采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻

16、柔；采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔； 2. 标本用加盖有刻度标志的塑料试管或硅化管收标本用加盖有刻度标志的塑料试管或硅化管收 集集 ；3. 抗凝剂用抗凝剂用109mmol/L的枸橼酸钠，抗凝剂与的枸橼酸钠，抗凝剂与 血液的比例为血液的比例为1:9。当当Hct Hct 增高增高55% 55% 或或25% 40mg/L，见于原发性纤，见于原发性纤溶症、溶症、DIC、M3、运用链激酶等溶栓治疗时。、运用链激酶等溶栓治疗时。血浆血浆D-二聚体测定二聚体测定一、原理：一、原理： 1. 胶乳凝集法胶乳凝集法 2. ELISA法法二、参考值：二、参考值：0.5mg/L有临床意义有临床意义三、临床意义

17、：三、临床意义： 1. DIC时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、心梗、肺栓塞、重症肝炎等、心梗、肺栓塞、重症肝炎等 2. 可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要根可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要根据。据。 血浆硫酸鱼精蛋白副凝实验血浆硫酸鱼精蛋白副凝实验plasma protamine paracoagulation test, 3P 结果判别结果判别 阴性阴性也是鉴别继发性也是鉴别继发性纤溶纤溶与原发性纤溶的与原发性纤溶的实验实验血浆硫酸鱼精蛋白副凝固实验血浆硫酸鱼精蛋白副凝固实验plasma protamin parcoagulation test，3P四

18、、临床意义四、临床意义 1. 阴性阴性 正常或正常或DIC晚期，原发纤溶晚期，原发纤溶 2. 阳性阳性 含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀、纤维蛋白丝网或胶冻样物质，见于、纤维蛋白丝网或胶冻样物质，见于DIC早期，中期，静脉血栓、严重创伤早期，中期，静脉血栓、严重创伤，大手术，及久置冰箱的标本，大手术，及久置冰箱的标本 生理性抗凝蛋白检验：生理性抗凝蛋白检验：一、抗凝血酶检测一、抗凝血酶检测 1、血浆抗凝血酶活性检测、血浆抗凝血酶活性检测 2、血浆抗凝血酶抗原检测、血浆抗凝血酶抗原检测二、蛋白二、蛋白C检测检测 1、血浆蛋白、血浆蛋白C活性检测活性检测 2、血浆蛋白、血浆蛋白C抗原检测抗原检测三、血浆蛋白三、血浆蛋白S抗原检测抗原检测四、组织因子途径抑制物检测四、组织因子途径抑制物检测第四节第四节 抗凝物质检验抗凝物质检验病理性抗凝物质检验：病理性抗凝物质检验：一、复钙交叉实验一、复钙交叉实验二二 、