细菌分离培养

1、实验三实验三 细菌分离培养及移植细菌分离培养及移植刘书超 预防兽医教研室细菌的分离纯化技术细菌的分离纯化技术分离纯化：分离纯化： 使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程称微生物的过程称微生物的纯分离技术纯分离技术。得到的纯培养。得到的纯培养物称纯种。物称纯种。 纯种：纯种：指一种或一株微生物指一种或一株微生物培养物培养物中所有的中所有的细胞只来源同一个细胞的后代。细胞只来源同一个细胞的后代。 分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一 临床送检样品或混杂的样品临床送检样品或混杂的样品 分离受杂菌污染的菌种分离受

2、杂菌污染的菌种 细菌纯培养物细菌纯培养物试验内容：试验内容： 1.需氧菌的分离移植和增菌需氧菌的分离移植和增菌 平板划线分离平板划线分离 营养（普通）斜面接种营养（普通）斜面接种 营养（普通）肉汤增菌营养（普通）肉汤增菌 2. 厌氧菌的分离培养方法厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做） 生物学方法、化学方法、物理学方法生物学方法、化学方法、物理学方法实验要求：实验要求：l掌握：掌握：l掌握细菌分离培养的基本要领和方法掌握细菌分离培养的基本要领和方法l掌握无菌操作程序掌握无菌操作程序l掌握细菌在培养基上生长特点掌握细菌在培养基上生长特点l认识：认识：l认识菌落形态认识菌落形态 无菌操作工具无菌操作

3、工具接接种种工工具具分离纯化法：分离纯化法：（细菌分离纯化）（细菌分离纯化） 1 1、平板划线法平板划线法 2 2、稀释、稀释涂布涂布平板法平板法 3 3、稀释混合（倾注）平板法、稀释混合（倾注）平板法 4 4、显微操作器单细胞挑取法、显微操作器单细胞挑取法 5 5、棋盘格划线法、棋盘格划线法1.平板划线： 将蘸有混合细菌的接种环在将蘸有混合细菌的接种环在平板表面平板表面多方多方向向连续划线连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓度变稀，经培养得到由分散，浓度变稀，经培养得到由单个细胞单个细胞繁殖繁殖而成的而成的菌落菌落，从而达到纯化。，从而达到纯化。1.平

4、板划线：平板划线的原则和目的：平板划线的原则和目的：通过划线稀释细菌获得单个菌落划线均匀而细密，不重复充分利用培养基面积培养基不能划破 图1 平板画线法 A、B、C分别为1、2、3次画线ABC注意手势1.培养皿与酒 精灯的距离2.左手打开培 养皿的动作3.右手握接种 棒的姿势4.右手划线的 运作姿势分区划线：分区划线：多用于粪便等含菌量较多的标本。每划每划一个区域，将接种环烧灼一次烧灼一次，待冷却后冷却后再划下一个区域。每一区域的划线应接触上一区域接种线的23次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。连续划线（曲线划线）：连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物分离含菌量较少的培养物右手持接种环

5、，通过火焰灭菌，冷却后，挑取标本或培养物少许1.平板划线：1432细菌在细菌在固体培养固体培养基中基中的生长情况：的生长情况： 单个菌落（S型）菌苔菌落（R型） 细菌的培养特征：细菌的培养特征： 不同种类的细菌在固体、半固体和液体培不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作为细菌鉴别的特征之一。为细菌鉴别的特征之一。 细菌在固体培养基中生长表现：细菌在固体培养基中生长表现： 1 1、大小、大小 （ mmmm表示。表示。1mm1mm以内露滴状；以内露滴状；1-2mm1-2mm小菌落。小菌落。 2- -4mm2- -4mm中

6、等大菌落；中等大菌落；4-6mm4-6mm以上称大菌落或巨大菌落以上称大菌落或巨大菌落） 2 2、形状、形状 （圆形、不规则形）（圆形、不规则形） 3 3、边缘、边缘 （整齐、锯齿状）（整齐、锯齿状） 4 4、表面性状、表面性状（光滑、粗糙）（光滑、粗糙） 5 5、隆起度、隆起度（扁平、隆起、中凸）（扁平、隆起、中凸） 6 6、颜色及透明度、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）（黄色、灰白、光泽、透明） 7 7、硬度、硬度（干燥、湿润、粘液）（干燥、湿润、粘液） 8 8、溶血、溶血（在血培养基上的表现）（在血培养基上的表现）2. 斜面移植法：斜面移植法：培养，保存菌种及其它。培养，保存菌种及

7、其它。手执塑料杆处手执塑料杆处手执试管底露出斜面试管口离火焰1cm小指夹棉塞培养后生长的斜面菌种培养后生长的斜面菌种液体培养基接种法：液体培养基接种法： 用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。细菌在液体培养基中生长的细菌在液体培养基中生长的三种不同三种不同现象现象混浊混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。沉淀：沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）菌膜：菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌环。环。操作顺序：操作顺序：接种环灭菌接种环灭菌 勾取细菌勾取细菌 取棉塞取棉塞 接种接种 塞棉塞塞棉塞 接种环灭菌接种环灭菌 标记标记 培养。培养。思考题：思考题：1、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？2、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？3、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观、如何进行菌落形状的检查？检查时应