实验二空气微生物的检验

1、空气微生物的检验空气微生物的检验一、实验目的一、实验目的1、掌握平板沉降法空气采样原理及方法；、掌握平板沉降法空气采样原理及方法；2、掌握空气中溶血性链球菌培养鉴定方法；、掌握空气中溶血性链球菌培养鉴定方法；3、掌握空气卫生状况，用细菌总数以及溶血、掌握空气卫生状况，用细菌总数以及溶血性链球菌总数多少来判断。性链球菌总数多少来判断。空气微生物的检验空气微生物的检验二、实验原理与仪器二、实验原理与仪器1、 空气中溶血性链球菌主要是空气中溶血性链球菌主要是草绿色链球菌（甲型）和草绿色链球菌（甲型）和溶血性链球菌（乙型）数量的总和溶血性链球菌（乙型）数量的总和，链球菌在自然界，链球菌在自然界分布广泛

2、，常寄居于人类鼻咽腔和肠道内。链球菌种分布广泛，常寄居于人类鼻咽腔和肠道内。链球菌种类很多，有能致病的，也有非致病的，根据链球菌在类很多，有能致病的，也有非致病的，根据链球菌在血平板培养基上得溶血特征，可以分为三类：血平板培养基上得溶血特征，可以分为三类：甲型溶甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌。血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌。室内大部分是草绿色和溶血性链球菌，室内大部分是草绿色和溶血性链球菌，寄居于正常人寄居于正常人呼吸道，可通过飞沫播散到周围空气中，其数量与人呼吸道，可通过飞沫播散到周围空气中，其数量与人群密度和空气污浊度有关，卫生学意义较大。因此群密度和

3、空气污浊度有关，卫生学意义较大。因此常常把草绿色溶血性链球菌和溶血性链球菌作为空气卫生把草绿色溶血性链球菌和溶血性链球菌作为空气卫生监测或空气污染评价指标。目前国家规定的方法是固监测或空气污染评价指标。目前国家规定的方法是固体撞击法和自然沉降法。体撞击法和自然沉降法。空气微生物的检验空气微生物的检验2、 自然沉降法原理：根据空气中携带有微生物气溶胶粒自然沉降法原理：根据空气中携带有微生物气溶胶粒子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。经基上。经37，24h温箱培养计算出菌落数，应以菌落形温箱培养计算出菌落数，应以菌落形成单位成单

4、位cfu/皿或皿或cfu/m3来表示。来表示。空气微生物的检验空气微生物的检验 1）显微镜、培养箱、载玻片、酒精灯、）显微镜、培养箱、载玻片、酒精灯、接种环、灭菌镊子、离心机、水溶箱。接种环、灭菌镊子、离心机、水溶箱。 2）血琼脂平板、匹克肉汤、灭菌生理）血琼脂平板、匹克肉汤、灭菌生理盐水、革兰染色液、杆菌肽纸片。盐水、革兰染色液、杆菌肽纸片。3、仪器与器材、仪器与器材空气微生物的检验空气微生物的检验三、实验步骤三、实验步骤 1、样品的采集、样品的采集 5个采样点，离地面高度为个采样点，离地面高度为1.5米，东、西、南、北、米，东、西、南、北、中各放置一个平皿，揭开盖子暴露中各放置一个平皿，揭

5、开盖子暴露15min,扣好盖子。扣好盖子。2、培养观察、培养观察 361培养培养24h。3、菌落形态观察及镜检、菌落形态观察及镜检 血平板：圆形突起，针尖状，灰白色半透明血平板：圆形突起，针尖状，灰白色半透明/不透明，不透明，边缘整齐，表面光滑，边缘整齐，表面光滑，周围有溶血圈（周围有溶血圈（型和型和型溶血）型溶血）。 镜检：镜检：G+,链状排列，链长短不一（链状排列，链长短不一（4-8个细胞，个细胞，20-30个细胞）。个细胞）。 空气微生物的检验空气微生物的检验 溶血性溶血性链球菌：血平板上菌落灰白色，半透明链球菌：血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约或不透明，表面

6、光滑，有乳光，直径约0.5mm0.75mm，为圆形突起的细小菌落，周围有，为圆形突起的细小菌落，周围有2mm4mm界限分明，无色透明的溶血圈。界限分明，无色透明的溶血圈。型溶血型溶血（草绿色链球菌）：（草绿色链球菌）： 空气微生物的检验空气微生物的检验 溶血平板观察溶血平板观察空气微生物的检验空气微生物的检验 生化生化 鉴定鉴定1、革兰氏染色，阳性，、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生链状排列，符合者可做生化鉴定。化鉴定。2、生化鉴定、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL，加，加0.8mL灭菌生理盐水，灭

7、菌生理盐水，混匀，再加入链球菌混匀，再加入链球菌18-24h361肉浸液肉汤培养肉浸液肉汤培养物物0.5mL及及0.25%氯化钙氯化钙0.25mL，混匀，置于，混匀，置于361水浴水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。空气微生物的检验空气微生物的检验（2）杆菌肽敏感试验（药敏试验）杆菌肽敏感试验（药敏试验） 将分纯的乙

8、型溶血性将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，划线处贴附杆菌肽纸片，36，18h，出现抑菌带，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）。型溶血性链球菌）。四、实验报告四、实验报告根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。空气微生物的检验空气微生物的检验培养基培养基菌落数菌落数平均菌落数平均菌落数东东西西南南北北中中普平普平血平血平空气微生物的检验空气微生物的检验五、实验结果分析与报告五、实验结果分析与报告 （1）溶血性链球菌是鉴定球菌最常用的项目，）溶血性链球菌是鉴定球

9、菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。也是鉴定过程中重要的一步。 （2）甲型溶血性链球菌：血平板菌落周围部分）甲型溶血性链球菌：血平板菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色溶血环。红细胞被破坏，呈现一个草绿色溶血环。 （3）乙型溶血性链球菌：血平板菌落周围红细）乙型溶血性链球菌：血平板菌落周围红细胞被全部破坏，呈现一个清楚透明的溶血环；胞被全部破坏，呈现一个清楚透明的溶血环； （4）丙型溶血性链球菌：血平板菌落周围无红）丙型溶血性链球菌：血平板菌落周围无红细胞溶解，无溶血环。细胞溶解，无溶血环。空气微生物的检验空气微生物的检验（5）镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上）镜检革兰阳性链状排列

10、球菌，血平板上呈现溶血环，链激酶和杆菌肽敏感试验阳呈现溶血环，链激酶和杆菌肽敏感试验阳性可报告为溶血性链球菌。性可报告为溶血性链球菌。空气微生物的检验空气微生物的检验空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准居室内空气卫生细菌学评价的参考指标（前苏联）居室内空气卫生细菌学评价的参考指标（前苏联）夏季标准夏季标准冬季标准冬季标准空气空气评价评价细菌总数细菌总数（cfu/m3 ）绿色和溶血性绿色和溶血性链球菌（链球菌（cfu/m3 ）细菌总数细菌总数（cfu/m3 ）绿色和溶血性绿色和溶血性链球菌（链球菌（cfu/m3 ）清洁清洁空气空气1 500164 50036污染污染空气空气2 500367 000124空气微生物的检验空气微生物的检验空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准空气微生物的卫生标准室内空气质量标准（室内空气质量标准（GB/T 18883-2002）对微生物