课题1菊花的组织培养

1、专题专题3:3:植物的组织培养技术植物的组织培养技术（一）植物组织培养的基本过程（一）植物组织培养的基本过程一、基础知识一、基础知识n概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成 完整新个体完整新个体的潜能。的潜能。n基础：生物体的每一个细胞都包含有基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种该物种所所 特有特有全套遗传物质全套遗传物质，都有发育成为完整，都有发育成为完整 个体所必需的个体所必需的全部基因全部基因。因为它们都是。因为它们都是 由由同一个同一个受精卵细胞受精卵细胞有丝分裂分化而来。有丝分裂分化而来。细胞的全能性细胞的全能性有丝分裂有丝分裂受精卵受精卵

2、 在个体发育中，细胞在形在个体发育中，细胞在形态、结构和生理功能上发生稳定态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程叫做细胞分化。性差异的过程叫做细胞分化。1.离体2.一定的营养物质3.植物激素：主要是生长素和细胞分裂素4.适宜的外界环境条件，例如无菌、适宜的温度、PH值、湿度、光照等 细胞全能性大小： 受精卵生殖细胞体细胞 植物细胞动物细胞 分化程度低的细胞分化程度高的细胞 从从活植物体活植物体上切下进行培养的那上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官。部分细胞、组织或器官。外植体：外植体： 由由高度分化高度分化的植物器官、组织或的植物器官、组织或细细 胞产生胞产生愈伤组织愈伤组织的过程，又称去

3、分化。的过程，又称去分化。 脱分化产生的愈伤组织在培养过程脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化中重新分化根或芽根或芽等器官的过程等器官的过程. 细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则, ,是是高度液高度液 泡化泡化的、成无定形状态的的、成无定形状态的薄壁细胞薄壁细胞. .脱分化：脱分化： 再分化：再分化：愈伤组织愈伤组织: :（二）影响植物组织培养的因素：（二）影响植物组织培养的因素：1植物材料的影响：植物材料的影响：N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S SB B、微量元素、微量元素: :B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCoC C、有机物：

4、甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖D D、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等、主要影响蛋白质、核酸的合成；、主要影响蛋白质、核酸的合成； K K、 Ca Ca、MgMg、S S主要影响酶的活性。主要影响酶的活性。思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？有利于有利于根根的分化的分化有利于有利于芽芽的分化，抑的分化，抑制根的分化制根的分化促进促进愈伤组织愈伤组织生长生长制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒接种接种培养培养栽培栽培 三、实验具体操作过程三、实

5、验具体操作过程移栽移栽MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4保存配制好的保存配制好的培养基培养基母液母液来制备来制备无机物中无机物中大量元素浓缩大量元素浓缩1010倍倍，微量元素浓缩微量元素浓缩100100倍倍，常温保存，常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按按1mg/ml1mg/ml的质量浓度的质量浓度单独单独配制成母液配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量倍数，计算用量琼脂加水并加热熔化，加蔗糖和各种母液琼

6、脂加水并加热熔化，加蔗糖和各种母液菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在轻刷洗，刷洗后在流水流水下冲洗下冲洗20min20min左右左右用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积体积分数为分数为7070的酒精的酒精中摇动中摇动2 23 3次，持续次，持续6 67s7s，立，立即将外植体取出，在即将外植体取出，在无菌水无菌水中清洗中清洗 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入入质量分数为质量分数为0.10.1的氯化汞溶液的氯化汞溶液中中1 12min

7、2min，取，取出后在出后在无菌水无菌水中至少清洗中至少清洗3 3次，漂净消毒液次，漂净消毒液正常苗正常苗污染苗污染苗1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径珍珠岩 ,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩 。蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？四、结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况