2.2.1《动物细胞工程》课件

1、动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞培养、 动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、 单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。提问：提问：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养, 植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术v动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基将它分散成单个细胞，然

2、后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。中，让这些细胞生长和增殖。1、选材：、选材： 动物动物胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物 的组织、器的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。分化程度低，容易培养。v在进行动物细胞培养时，用在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散细胞，说明细胞间的物质主要是细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质蛋白质。动。动物细胞培养适宜的物细胞培养适宜的PH为为7.27.4，此环境下，此环境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。2.

3、如何分散成单个细胞？如何分散成单个细胞？一般选取胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的组织细胞的组织细胞的原因是的原因是 代谢旺盛代谢旺盛增殖能力强增殖能力强分化程度低分化程度低4.4.过程：过程：幼龄动物组织幼龄动物组织剪碎组织剪碎组织用胰蛋白酶处理分散成单个细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行原代培养用胰蛋白酶处理分散成单个细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行原代培养贴满甁壁的细胞用胰蛋白酶处理贴满甁壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成分散成单个细胞，制成细胞悬液细胞悬液分甁进行传代培养分甁进行传代培养动物细胞生长特性动

4、物细胞生长特性：v细胞贴壁：细胞贴壁： 将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。附。细胞的接触抑制细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。制。注意：癌细胞失去了接触抑制注意：癌细胞失去了接触抑制 细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞

5、5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系5.5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？细胞系？多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变基本概念基本概念1、原代培养：通常将直接从动物体内取出的、原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养动物组织消化后的初次培养称为原代培养2、传代培养：原代培养的细胞出现接触后，、传代培养：原代培养的细胞出现接触后，贴满甁壁的细

6、胞需要重新用胰蛋白酶等处贴满甁壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分甁继续培养，让细胞增殖，称理，然后分甁继续培养，让细胞增殖，称为传代培养。为传代培养。3、细胞株：原代培养的细胞一般传至、细胞株：原代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大多数细胞衰代左右细胞生长停滞，大多数细胞衰老死亡，少数细胞存活到老死亡，少数细胞存活到40到到50代，代，这种传代细胞为细胞株。这种传代细胞为细胞株。4、细胞系：细胞株传至、细胞系：细胞株传至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下无限增殖，质的改变，使其在培养

7、条件下无限增殖，这种传代细胞称为细胞系。这种传代细胞称为细胞系。问题：为什么在培养液中要使细胞分散开来？问题：为什么在培养液中要使细胞分散开来？1、培养时接触抑制、培养时接触抑制2、每个细胞与培养液充分接触，吸收营养、每个细胞与培养液充分接触，吸收营养总结：总结：动物细胞培养条件：动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （培养液和所用培养用具进行无菌处理培养液和所用培养用具进行无菌处理添加一定量添加一定量的抗生素的抗生素定期更换培养液）定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）血清主要提供一些激素

8、和生长因子血清主要提供一些激素和生长因子3、温度和、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、气体环境：、气体环境： O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）O2是细胞代谢所必需；是细胞代谢所必需；CO2的主要作用是维持培养液的的主要作用是维持培养液的PH值值动物细胞培养液的主要成分：动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物动物血清血清等。等。与植物培养基相比其特点是：与植物培养基相比其特点是：（1 1）液体培养基）液体培养基（2 2）含有动物血清）含有动物血清动物细胞培养与植物组织培养的比较动物细胞培养与植物组织

9、培养的比较细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细或细胞产物胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养应用动物细胞培养应用v大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单

10、克隆抗体）扰素、单克隆抗体）v作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞v人造皮肤人造皮肤v培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性判断某种物质的毒性v为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据据二、动物体细胞核移植技术二、动物体细胞核移植技术: 1、概念、概念 将动物的一个细胞的细胞核，移入一将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。物个体。

11、用核移植的方法得到的动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物称为克隆动物2、核移核移 植种类植种类 胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高难度高）受体细胞：受体细胞：M期的期的卵母细胞卵母细胞3、过程：、过程：问题：问题：1、为什么要选择、为什么要选择M期的卵母细胞做受体细胞？期的卵母细胞做受体细胞？M期的卵母细胞含有促进供体核表达全能性的物期的卵母细胞含有促进供体核表达全能性的物质，即成熟促进因子（质，即成熟促进因子（MPF），而且活性很高。），而且活性很高。2、在供体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，、在供体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须去掉受体卵母

12、细胞的核？为什么必须去掉受体卵母细胞的核？为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞。要利用价值的动物提供的体细胞。3、用于核移植的供体细胞为什么都选用传代、用于核移植的供体细胞为什么都选用传代10代代以内的细胞？以内的细胞？10代以内的细胞一般都能保持正常的二倍体核型代以内的细胞一般都能保持正常的二倍体核型小结：小结：原理：动物细胞核的全能性原理：动物细胞核的全能性主要的生物技术：主要的生物技术：、动物细胞培养技术、动物细胞培养技术 、动物细胞核移植、动物细胞核移植 、胚胎移植技术、胚胎移植技术属于无性生殖属于无性生殖

13、4. 4.应用应用1. 1.加速家畜遗传改良进程，促进优良种畜繁殖加速家畜遗传改良进程，促进优良种畜繁殖2.保护濒危物种保护濒危物种3. 3.生产医用蛋白生产医用蛋白 4. 4.作为异体移植的供体作为异体移植的供体5. 5.用于组织器官的移植用于组织器官的移植5. 5.体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：1. 1.成功率低成功率低2. 2.克隆动物存在健康问题克隆动物存在健康问题3. 3.克隆食品的安全性问题存在争议克隆食品的安全性问题存在争议卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫

14、母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 （ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （）（） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出

15、生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D 4. 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A.A.培养基不同；培养基不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大

16、量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A5.5.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( )( ) A. A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B.B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等长素和动物血清等 C.C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白 D.D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理动物细胞培养前和培养过程

17、中都要用胰蛋白酶处理D6.6.下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用 A.A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.B.保护濒危物种保护濒危物种 C.C.获得组织器官异体移植的供体获得组织器官异体移植的供体 D.D.大量产生紫杉醇大量产生紫杉醇D2.2.回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题：（1 1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长 到细胞表面到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这时，细胞会停止分裂增殖，这 种现象称为细胞的种现象称为细胞的

18、。此时，瓶壁上形成的。此时，瓶壁上形成的 细胞层数是细胞层数是 。要使贴壁的细胞从瓶。要使贴壁的细胞从瓶 壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是_ 。（2 2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂 停止，进而出现停止，进而出现 的现象；但极少数细的现象；但极少数细 胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生 改变而变成改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性降低细胞，该种细胞的黏着性降低, , 细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。相互接触相互接

19、触接触抑制接触抑制单层（或一层）单层（或一层）胰蛋白胰蛋白酶酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性减少减少（3 3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观 察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是 检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目， 最好选用细胞分裂到最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观察。期的细胞用显微镜进行观察。由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色能进入活细胞内，故活细胞不能着

20、色中中（5 5）在细胞培养过程中，通常在冷冻条件下保存细胞。）在细胞培养过程中，通常在冷冻条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中因为在这种条件下，细胞中 的活性降低，细的活性降低，细胞胞 的速率降低。的速率降低。（6 6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发 生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当 作作 进行攻击。进行攻击。新陈代谢新陈代谢酶酶抗原抗原1.1.概念：两个或多个动物细胞，结合形概念：两个或多个动物细胞，结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。杂交细胞：融合后形成的具有原来两个杂交细

21、胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。杂交细胞。2.2.原理：原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性3.诱导诱导融合的因素融合的因素v生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导融合诱导融合.(.(利用灭活仙台利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) ) v化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇PEGPEG诱

22、导融合诱导融合. . v物理法：物理法：电激电激融合融合诱导方法诱导方法物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）4.目的：目的：制备单克隆抗体制备单克隆抗体5.5.过程：过程：病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞融合成功的标志：融合成功的标志：杂交细胞进行有杂交细胞进行有丝分裂丝分裂过程小结：过程小结：过程：膜融合过程：膜融合 质融

23、合质融合 核融合核融合6.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交称为意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交称为可能可能7.应用：应用：目前这一技术已经成为研究细胞遗传、目前这一技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等重要手段细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等重要手段为制备单克隆抗体开辟了新途径。为制备单克隆抗体开辟了新途径。重组细胞的特点：杂交细胞具有两个亲本重组细胞的特点：杂交细胞具有两个亲本的遗传性息，能表现两个亲本的特点的遗传性息，能表现两个亲本的特点主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭

24、活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较较1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？知识回顾：知识回顾：1.1.什

25、么是抗体？什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。疫功能的球蛋白。2.B2.B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万种以上的淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。3.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？传统的

26、抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？将抗原反复注射到动物体内，然后从动物将抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离血清中分离4.缺陷：缺陷：产量低，特异性差，纯度低产量低，特异性差，纯度低5.解决方法：解决方法：采用单个采用单个B淋巴细胞进行无性淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群，产生化学性质单一，繁殖，形成细胞群，产生化学性质单一，特异性强的抗体。特异性强的抗体。思路：思路：要获得大量的单一抗体，必须克要获得大量的单一抗体，必须克隆单一的隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群淋巴细胞，形成细胞群将将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合将将B淋巴细胞与骨髓瘤

27、细胞融合的原因：淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因：一个一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体B淋巴细胞不能无限增殖，而小鼠骨髓瘤细淋巴细胞不能无限增殖，而小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。胞能无限增殖。杂交杂交 细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体过程

28、总结：过程总结：1.B细胞实际上是细胞实际上是2.单克隆抗体的制备过程经过几次筛选？单克隆抗体的制备过程经过几次筛选？其目的是什么？其目的是什么？浆细胞浆细胞两次；两次；第一次筛选的目的是：获得杂交瘤细胞；第一次筛选的目的是：获得杂交瘤细胞；第二次筛选的目的是：获得能产生特异性第二次筛选的目的是：获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。3.细胞融合后培养液中有几种细胞细胞融合后培养液中有几种细胞,如何筛选如何筛选? BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种细筛选杂种细胞胞已知细胞合成已知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其中两条途径

29、，其中D途途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获促融，获得杂种细胞。得杂种细胞。第二次筛选：第二次筛选： 在在“多孔培养板上多孔培养板上”培养培养杂交瘤细胞系列杂交瘤细胞系列每孔只放一个杂交瘤细胞。每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养克隆化培养”每每个杂交瘤细胞，并进行个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测单一抗体检测”，“检测阳性

30、检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。4.单克隆杂交瘤细胞的特点：单克隆杂交瘤细胞的特点：具有两个亲本的遗传物质具有两个亲本的遗传物质产生特异性抗体产生特异性抗体体外培养无限增殖体外培养无限增殖思考：思考：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理养原理2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有细胞的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体细胞

31、分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体可以获得大量单克隆抗体 单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：特异性强，灵敏度高，可大量制备特异性强，灵敏度高，可大量制备3. 3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：作为诊断试剂作为诊断试剂（准确、高效、简易、快速

32、的优点）（准确、高效、简易、快速的优点）例：早早孕诊断盒例：早早孕诊断盒用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物如：生物导弹（能将药物定向带到癌细胞所如：生物导弹（能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常细胞，又减少了药剂量）正常细胞，又减少了药剂量）一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂

33、交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是体，与骨髓瘤细胞融合的是 A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A A2.2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是中，正确的是A.A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D

34、. D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4.4.利用细胞工程方法，以利用细胞工程方法，以SARSSARS病毒核衣壳蛋白为抗病毒核衣壳蛋白为抗 原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是 A.

35、A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产 生的血清抗体为单克隆抗体生的血清抗体为单克隆抗体 B.B.体外培养单个体外培养单个B B淋巴细胞可以获得大量针对淋巴细胞可以获得大量针对SARSSARS 病毒的单克隆抗体病毒的单克隆抗体 C.C.将等量将等量B B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEGPEG诱诱 导融合后的细胞均为杂交瘤细胞导融合后的细胞均为杂交瘤细胞 D.D.利用该单克隆抗体与利用该单克隆抗体与SARSSARS病毒核衣壳蛋白特异病毒核衣壳蛋白特异 性结合的方法可诊断出病毒感染者性结合的方法可诊断出病毒感染者D5.5.

36、试管婴儿、试管苗和克隆羊这三者可以说是现代试管婴儿、试管苗和克隆羊这三者可以说是现代生物科技的杰出成果生物科技的杰出成果, ,下列对其生物学原理及技术的下列对其生物学原理及技术的叙述叙述, ,正确的是正确的是 A.A.都属于无性生殖都属于无性生殖 B.B.都利用了细胞工程的某些技术都利用了细胞工程的某些技术 C.C.都不会发生基因重组都不会发生基因重组 D.D.都体现了已分化的细胞具有全能性都体现了已分化的细胞具有全能性B例题例题1 1：19751975年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。